NIH-3T3-celler: Främjande av fibroblaststudier och tillämpningar av NIH-3T3
NIH-3T3-cellinjen, som etablerades 1962 av Howard Green och George Todaro vid New York University School of Medicine från vävnaden i ett 17 dagar gammalt embryo från en Swiss Albino-mus, har blivit en grundläggande resurs inom biomedicinsk forskning. NIH-3T3-celler är kända för sin höga mottaglighet för leukemivirus och sarkomvirus och är ett viktigt verktyg för en mängd vetenskapliga undersökningar, bland annat studier av viral onkologi, analys av genuttryck och utforskning av cellulär tillväxtdynamik. Nomenklaturen "3T3" återspeglar cellodlingsmetoden och betecknar ett "3-dagars överföringsintervall" med en initial sådddensitet på 3 × 10^5 celler, vilket belyser de standardiserade förhållanden under vilka dessa celler först odlades och expanderade.
Olika morfologier och tillämpningar av NIH-3T3-celler
En av de utmärkande egenskaperna hos NIH-3T3-celler är deras morfologiska anpassningsförmåga, som varierar avsevärt med kulturens konfluens. Vid lägre tätheter uppvisar dessa fibroblaster en spindelformad, ensam cellstruktur som utvecklas till täta, virvlande mönster när populationen når konfluens. Med en genomsnittlig diameter på cirka 18 μm erbjuder NIH-3T3-celler en mångsidig modell för djupgående cellbiologiska studier, allt från vävnadsreparationsmekanismer till de invecklade vägarna för cellcykelreglering.
Information om odling
Viktiga odlingsdetaljer:
Fördubbling av befolkningen Tid: Ungefär 20 timmar.
Typ av tillväxt: Vidhäftande kulturer.
Utsådd densitet: Rekommenderad: 3 till 4 x 10^4 celler/cm^2.
Tillväxtmedium: DMEM eller Ham's F12, kompletterat med 5% FBS och 2,5 mM L-glutamin.
Tillväxtförhållanden: Hålls vid 37 °C i en luftfuktad inkubator med 5% CO2.
Förvaring: Förvaras vid temperaturer under -195 °C i ångfasen av flytande kväve.
Frysningsmetod: Använd CM-1 eller CM-ACF medium; använd en långsam frysmetod (1°C temperatursänkning).
Upptiningsprotokoll: snabb uppvärmning i ett 37 °C vattenbad, följt av centrifugering för att avlägsna frysmedium, därefter återsuspension i tillväxtmedium.
Biosäkerhetsnivå: Odling kräver en biosäkerhetsnivå 1-inställning.
Schweizisk albino-mus i ett laboratorium.
För- och nackdelar med att använda NIH 3T3-celler
Fördelar med att
Transfektionseffektivitet: NIH-3T3-celler är kända för sina höga transfektionshastigheter och är utmärkta för både övergående och stabila genuttrycksstudier och rymmer en mängd olika transfektionstekniker.
Användbarhet för matarskikt: Dessa celler fungerar ofta som ett stödjande matarskikt för samkulturer med celler som keratinocyter och stamceller, tack vare att de frisätter tillväxtfaktorer som främjar tillväxten av de samodlade cellerna.
Stamcellsforskning: NIH-3T3-celler är ett förstahandsval inom stamcellsforskning eftersom de inducerar pluripotens utan genetisk modifiering och skapar en gynnsam miljö för stamcellsdifferentiering.
Stabilitet i odlingen: NIH-3T3-celler är kända för sin stabilitet och låga frekvens av spontan transformation. Under vissa förhållanden eller efter exponering för specifika onkogener eller mutagener kan NIH-3T3-celler dock genomgå spontan omvandling. Denna omvandling kan leda till att cellerna får cancerogena egenskaper, t.ex. okontrollerad tillväxt, förlust av kontaktinhibering och förmåga att bilda tumörer när de injiceras i mottagliga värddjur.
Nackdelar
Inkonsekvent cellstorlek: Den långsträckta, spindelliknande morfologin hos NIH-3T3-celler kan variera, vilket försvårar bildanalyser i analyser.
Infektionskänslighet: Dessa celler är benägna att drabbas av bakterie- och mykoplasmainfektioner om de inte förvaras under stränga aseptiska förhållanden, vilket potentiellt kan påverka den experimentella integriteten.
Forskningsapplikationer för NIH-3T3-celler
Studier av DNA-transfektion: NIH-3T3-cellernas robusthet gör dem idealiska för att introducera och studera funktionen hos olika gener, vilket demonstreras i forskning som undersöker proteiner som NAB2-STAT6 och deras roller i cellulära processer.
Cellbaserade analyser: Deras tillförlitlighet sträcker sig till olika analyser, inklusive analyser av viabilitet, apoptos och fokusbildning, vilket ger insikter i cellulära svar under olika experimentella förhållanden.
Cellcykelforskning: Cellinjens enkla manipulering av cellcykeln via serumnivåer gör den till en potent modell för att studera cellcykelreglering och dess avvikelser i sjukdomssammanhang.
Förbättra din forskning med NIH-3T3-celler
Viktiga studier som involverar fibroblastcellinjen NIH 3T3
Cellinjen NIH-3T3 har varit central i många forskningsprojekt som spänner över olika aspekter av cellbiologi. Nedan följer några viktiga studier som använder dessa celler:
- Utforskning av fusionsproteinet NAB2-STAT6: Denna studie, som publicerades i Biochemical and Biophysical Research Communications, undersöker hur fusionsproteinet NAB2-STAT6 påverkar NIH-3T3-celler, särskilt dess roll för att öka celltillväxt och migration genom EGR-1-reglering
- Undersökning av APOBEC3 och Murine Leukemia Virus: Denna forskning i tidskriften Virology undersöker hypermutationen av AKV murint leukemivirus i NIH-3T3-celler som uttrycker musgenen APOBEC3
- Utvärdering av den antimetastatiska potentialen hos epigenetiska läkemedel: I Oncotargets and Therapy utvärderas i denna studie de antimetastatiska effekterna av hydralazin och valproinsyra på RAS-transformerade NIH-3T3-celler
- Baicaleins inverkan på NIH-3T3-proliferation och kollagensyntes: Denna forskning använder NIH-3T3-celler för att undersöka hur Baicalein påverkar cellproliferation och kollagenproduktion genom miR-9/insulinliknande tillväxtfaktor-1-axelmodulering
- Studerar utarmning av riboflavin och tumörigenes: I denna studie presenteras resultat om hur riboflavinbrist i NIH-3T3-celler bidrar till tumörbildning genom att främja cellproliferation och dysreglera cellcykelgener
Viktiga resurser för NIH-3T3-cellforskning
För forskare som är intresserade av att arbeta med NIH-3T3-celler finns en mängd olika resurser tillgängliga för att vägleda odling och experimentella protokoll:
- Sfäroidbildning i NIH-3T3-celler: Denna video ger en detaljerad genomgång av att bilda sfäroider, en 3D-cellkulturteknik som aggregerar NIH-3T3-celler i kluster, vilket ger en mer fysiologiskt relevant modell för studier
- Övervakning av NIH-3T3-cellers tillväxt: Genom JuLI Br live cell imaging system fångar denna video tillväxtdynamiken hos NIH-3T3-celler under 65 timmar, vilket visar cellproliferation i realtid
Dessa resurser syftar till att stödja dina forskningsansträngningar med NIH-3T3-celler, vilket ger en grund för framgångsrika experiment och upptäckter.
Vanliga frågor om NIH-3T3-celler
Referenser
- Rahimi, A.M., M. Cai och S. Hoyer-Fender, Heterogeneity of the NIH3T3 Fibroblast Cell Line. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., et al, Första molekylära cytogenetiska högupplösta karakteriseringen av NIH 3T3-cellinjen genom murin flerfärgsbandning. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al, Comparative analysis of different feeder layers with 3T3 fibroblasts for culturing rabbits limbal stem cells. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al, Differentiering av neuronala celler från NIH/3T3-fibroblaster under definierade förhållanden. Utveckling, tillväxt och differentiering, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al, NAB2-STAT6 fusionsprotein förmedlar cellproliferation och onkogen progression via EGR-1-reglering. Biokemiska och biofysiska forskningskommunikationer, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Expression of the Sloppymerase™ in NIH/3T3 Cells: Utforska mångsidigheten hos ett felbenäget fusionspolymeras. 2021.
- Sahinturk, V., et al, Akrylamid utövar sin cytotoxicitet i NIH/3T3 fibroblastceller genom apoptos. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. och F. Caicci, Discovery of the First Human Retro-Giant Virus: Beskrivning av dess morfologi, retrovirala kinas och förmåga att framkalla tumörer hos möss. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M., et al,E2F1-Ror2-signalering förmedlar samordnad transkriptionsreglering för att främja G1/S-fasövergång ibFGF-stimuleradeNIH/3T3-fibroblaster. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L., et al, Riboflavin Depletion främjar tumörigenes i HEK293T- och NIH3T3-celler genom att upprätthålla cellproliferation och reglera cellcykelrelaterad gentranskription. Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.