Volym: 100 ml
Förvaring: ≤ –15 °C
Sterilitet: Sterilfiltrerad
Stabil glutaminlösning (L-alanyl-L-glutamin, 200 mM) är en mycket stabil dipeptidform av L-glutamin som är utformad som en direkt ersättning för konventionell L-glutamin i cellodlingsmedier. L-glutamin är en essentiell aminosyra och en viktig energikälla för odlade celler, som spelar en avgörande roll för celltillväxt, metabolism och proteinsyntes.
Användning och fördelar
I standardvätskemedia bryts L-glutamin ned relativt snabbt vid 37 °C, vilket leder till bildandet av toxiska biprodukter såsom ammoniumjoner som kan påverka cellernas livskraft och experimentresultaten negativt. Stabil glutamin övervinner denna begränsning genom att tillhandahålla en icke-nedbrytbar dipeptidform som förblir intakt under odlingsförhållanden.
Cellerna klyver enzymatiskt dipeptidbindningen för att frigöra L-glutamin efter behov, vilket säkerställer en kontinuerlig färsk tillförsel samtidigt som ackumulering av skadliga avfallsprodukter förhindras. Detta gör lösningen särskilt fördelaktig för långvariga cellodlingar och odlingssystem med hög densitet.
Formulering och användning
L-Alanyl-L-Glutamin-lösningen bereds i vatten av cellodlingskvalitet i en koncentration på 200 mM och är sterilfiltrerad för kontamineringskänsliga tillämpningar. Den kan spädas direkt i komplett medium enligt experimentella krav. Förvara vid ≤ –15 °C och undvik upprepade frys-tina-cykler för att bibehålla produktens stabilitet.
Endast för forskningsändamål. Får inte användas i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Får inte användas på människor eller djur.
Volym: 100 ml
Förvaring: +2 °C till +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrerad
HEPES-buffertlösning (1 M), även känd som N-2-hydroxietylpiperazin-N-2-etansulfonsyra, är ett zwitterjoniskt organiskt buffertmedel som ofta används i cellodlingsmedier. Det är utformat för att upprätthålla stabila pH-förhållanden inom det fysiologiska intervallet 6,7 till 8,6, vilket stödjer optimal cellfunktion vid in vitro-tillämpningar.
Användning och fördelar
HEPES ger tillförlitlig buffertkapacitet i cellodlingssystem, särskilt när celler hanteras utanför en CO₂-inkubator. Tillsatsen av 10–25 mM HEPES till odlingsmediet ger förbättrad pH-stabilitet under längre hanteringsperioder, vilket bidrar till att upprätthålla konsekventa experimentella förhållanden.
Denna buffert är membranimpermeabel, har minimal inverkan på biokemiska reaktioner och uppvisar stark kemisk och enzymatisk stabilitet. Dessa egenskaper gör den lämplig för ett brett spektrum av cellodlings
- och biokemiska tillämpningar.
Formulering och användning
Lösningen levereras som ett 1 M koncentrat berett i vatten av cellodlingskvalitet och är steriliserat för användning i kontamineringskänsliga miljöer. Den kan spädas till önskad arbets koncentration beroende på tillämpningskraven. Förvara vid +2 °C till +8 °C och hantera under aseptiska förhållanden för att bevara produktens integritet.
Endast för forskningsändamål. Får inte användas i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Får inte användas på människor eller djur.
Volym: 50 ml
Förvaring: +2 °C till +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrerad
D-(+)-glukoslösning (dextroslösning) är ett sterilt, färdigt att använda tillskott som innehåller det naturligt förekommande sockret D-(+)-glukos, en central komponent i cellmetabolismen. Glukos är involverat i viktiga biologiska processer såsom energiproduktion, glykosylering och bildandet av glykaner som bidrar till cellernas struktur och funktion.
Användning och fördelar
Denna glukoslösning används ofta som tillskott i cellodlingsmedier och i många cellulära och molekylärbiologiska tillämpningar. Som primär koldioxid
- och energikälla stöder glukos celltillväxt, proliferation och metabolisk aktivitet. Dess inblandning i biosyntetiska vägar gör den också avgörande för att upprätthålla normal cellfysiologi och experimentell konsistens.
Formulering och användning
Lösningen levereras i en hög koncentration på 250 g/l glukos, vilket möjliggör flexibel utspädning i odlingsmedier enligt experimentella krav. Den är sterilfiltrerad för att säkerställa lämplighet för kontamineringskänsliga tillämpningar. Förvara vid +2 °C till +8 °C och hantera aseptiskt för att bibehålla produktens kvalitet och stabilitet.
Endast för forskningsändamål. Får inte användas i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Får inte användas på människor eller djur.
Volym: 10 ml
Förvaring: +2 °C till +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrerad
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) Solution (100x) är ett kemiskt definierat tillskott avsett för ett brett spektrum av cellodlingsapplikationer. Det används oftast som tillsats i basala cellodlingsmedier för att stödja celltillväxt under förhållanden med reducerat serum eller utan serum.
Användning och fördelar
Vårt ITS-tillskott tillhandahåller väsentliga komponenter som krävs för optimal prestanda hos serumfria medier. Genom att komplettera konventionella näringsmedier med ITS kan behovet av fetalt bovint serum (FBS) för rutinunderhåll av många cellinjer minskas avsevärt. Detta bidrar till att minimera variabiliteten förknippad med serumanvändning samtidigt som en jämn celltillväxt och livskraft upprätthålls.
Insulin stöder cellernas upptag och metabolism av viktiga näringsämnen, transferrin underlättar järntransporten och selen bidrar till antioxidantförsvaret och den enzymatiska aktiviteten. Tillsammans främjar dessa komponenter en balanserad cellmetabolism och förbättrad reproducerbarhet i definierade odlingssystem.
Sammansättning och användning
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) levereras som en 100-faldigt koncentrerad lösning i Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) utan fenolrött. För standardtillämpningar, späd 1:100 i lämpligt basmedium för att uppnå den rekommenderade arbetskoncentrationen. Förvara vid +2 °C till +8 °C och hantera under aseptiska förhållanden för att bibehålla produktens stabilitet och sterilitet.
Endast för forskningsändamål. Får inte användas i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Får inte användas på människor eller djur.
Volym: 5 ml
Förvaring: +2 °C till +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrerad
Insulin Human Recombinant Solution är ett kemiskt definierat tillskott som vanligtvis används för odling av däggdjurscellinjer, inklusive celler från kinesiska hamstrars äggstockar (CHO-celler). Denna lösning av cellodlingskvalitet innehåller rekombinant humant insulin uttryckt i Saccharomyces cerevisiae, vilket garanterar hög renhet och jämn prestanda i forskningsapplikationer.
Användning och fördelar
Insulin tillsätts rutinmässigt till serumfria och kemiskt definierade medier för att främja celltillväxt och produktivitet. Som ett viktigt reglerande hormon stöder insulin cellernas upptag, utnyttjande och lagring av glukos, aminosyror och fettsyror. Det hämmar också nedbrytningen av glykogen, proteiner och lipider, vilket bidrar till förbättrad cellviabilitet och metabolisk stabilitet i odlingssystem. Den kemiskt definierade formuleringen stöder reproducerbarhet och minimerar variabiliteten i känsliga cellodlingsarbetsflöden.
Biologiska egenskaper och användning
Insulin är ett tvåkedjigt polypeptidhormon som produceras naturligt av β-cellerna i bukspottkörtelns öar. Det har en molekylvikt på cirka 5 800 Da. α
- och β-kedjorna är bundna av två disulfidbindningar mellan kedjorna, och α-kedjan innehåller en disulfidbindning inom kedjan. För cellodlingsapplikationer ska lösningen hanteras under aseptiska förhållanden och förvaras vid +2 °C till +8 °C för att bibehålla stabilitet och prestanda.
Endast för forskningsändamål. Får inte användas i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Får inte användas på människor eller djur.
Volym: 100 ml
Förvaring: +2 °C till +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrerad
Natriumpyruvatlösning (100 mM) är ett sterilt, färdigt att använda tillskott som är utformat för att ge en extra, lättillgänglig energikälla för cellodlingsmedier. Natriumpyruvat spelar en viktig roll i cellernas energimetabolism och stöder tillväxten av metaboliskt aktiva och snabbt prolifererande celler, såsom tumörceller. Tillskott kan förbättra cellernas livskraft och bidra till att upprätthålla metabolisk stabilitet i odlingssystem.
Användning och fördelar
Denna lösning används ofta i rutinmässig cellodling för att berika medier med pyruvat och främja optimala tillväxtförhållanden. Den stöder ATP-produktion, kan bidra till att minska oxidativ stress och bidrar till förbättrad metabolisk prestanda hos odlade celler. Produkten tillverkas i vatten av cellodlingskvalitet och är sterilt filtrerad, vilket garanterar jämn kvalitet och reproducerbarhet i forskningsarbetsflöden.
Användning och kompatibilitet
Den rekommenderade slutkoncentrationen för de flesta cellodlingsapplikationer är 1 mM natriumpyruvat, vilket uppnås genom att späda 100 mM stamlösningen 1:100 i komplett odlingsmedium. Lösningen är kompatibel med ett brett spektrum av basala medier och däggdjurscellinjer. Förvara vid +2 °C till +8 °C och skydda mot kontaminering för att bibehålla produktens stabilitet.
Endast för forskningsändamål. Får inte användas i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Får inte användas på människor eller djur.
Volym: 100 ml Förvaring: ≤-15°C Sterilitet: Sterilt filtrerad
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) är ett sterilt, bruksfärdigt koncentrat som är utformat för att minska riskerna för mikrobiell kontaminering vid cellodling och relaterade laboratorieapplikationer. Denna 100x-lösning innehåller en väletablerad kombination av penicillin, streptomycin och amfotericin B, vilket ger en bredspektrig antimikrobiell aktivitet mot grampositiva och gramnegativa bakterier, jästsvampar och filamentösa svampar. Formuleringen är lämplig för användning i eukaryota cellkulturer, bakteriemedier och andra kontaminationskänsliga system, vilket stöder en ren och konsekvent laboratorieverksamhet.
Tillämpning och fördelar Denna lösning är optimerad för rutinmässiga forskningsprotokoll och används ofta för att upprätthålla aseptiska förhållanden i arbetsflöden för cellodling. Den ger tillförlitlig prestanda i kontamineringskänsliga miljöer och hjälper forskare att minska risken för mikrobiell överväxt utan att äventyra cellernas hälsa eller experimentens reproducerbarhet. Den sterilfiltrerade formuleringen eliminerar behovet av ytterligare solubiliseringssteg, vilket ger en strömlinjeformad medieberedning och minskar variabiliteten i de dagliga laboratorieprocedurerna.
Användning och kompatibilitet För att uppnå standardiserade arbetskoncentrationer, späd lösningen 1:100 i ditt kompletta odlingsmedium. Produkten är kompatibel med ett brett spektrum av mammaliecellinjer och basala medier. Med konsekvent lagertillgänglighet kan forskare dra nytta av pålitlig leveranskontinuitet och förenklad logistikplanering. Lösningen ska förvaras vid ≤ -15 °C och skyddas från upprepade frys
- och upptiningscykler för att bibehålla stabiliteten. Endast för forskningsändamål. Ej för användning i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Ej för användning på människor eller djur.
Volym: 100 ml Förvaring: +2°C till +8°C Sterilitet: Sterilt filtrerad
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) är ett sterilt tillskott som är utformat för att förbättra celltillväxt och livskraft i cellodlingssystem för däggdjur. Formuleringen motsvarar ett 100x koncentrat av de icke-essentiella aminosyror som finns i standard Minimum Essential Medium (MEM), vilket möjliggör direkt tillskott av basala medier med minimal beredning.
Tillämpning och fördelar Detta tillskott ger en extra aminosyrapool för snabbt prolifererande celler eller för cellinjer som har förlorat förmågan att syntetisera icke-essentiella aminosyror de novo. Genom att lindra den metaboliska bördan av biosyntesen bidrar det till förbättrad tillväxtkinetik, förlängd livsduglighet och större experimentell konsekvens
- särskilt i näringskänsliga kulturer eller kulturer med hög densitet.
Sammansättning och användning Lösningen innehåller glycin, L-alanin, L-asparagin, L-asparaginsyra, L-glutaminsyra, L-prolin och L-serin. Den är kompatibel med MEM och de flesta andra standardmedier. För användning, späd 1:100 i det slutliga odlingsmediet. Denna produkt är sterilfiltrerad och klar att använda utan ytterligare hanteringssteg. Endast för forskningsändamål. Ej för användning i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Ej för användning på människor eller djur.
Accutase är en färdig att använda, sterilt filtrerad cellavskiljningslösning som är utformad som ett skonsamt alternativ till trypsin/EDTA för att separera vidhäftande däggdjursceller från standardplastutrustning för vävnadsodling och ytor med vidhäftningsbeläggning. Den kombinerar proteolytisk och kollagenolytisk enzymaktivitet i en balanserad saltlösning för att ge effektiv men kontrollerad separering, vilket bevarar proteiner på cellytan och främjar hög livskraft efter passage samt snabb återvidhäftning.
Accutase-formuleringen är baserad på Dulbeccos fosfatbuffrade saltlösning (DPBS) med EDTA och fenolrött som visuell pH-indikator. Enzymerna är av icke-däggdjurs
- och icke-bakteriellt ursprung, vilket gör Accutase särskilt väl lämpad för stamcellsforskning, vaccinarbetsflöden och alla tillämpningar där föroreningar av animaliskt eller mikrobiellt ursprung måste minimeras. Lösningen autoinhiberas vid 37 °C, så inget neutraliserande reagens eller serumhaltigt medium krävs efter avskiljningen – cellerna kan överföras direkt till färskt medium.
Viktiga egenskaper
Användningsfärdig 1x sterilfiltrerad vätska – ingen utspädning eller rekonstituering krävs
Kombinerad proteolytisk och kollagenolytisk enzymaktivitet för skonsam dissociation
Varje batch standardiserad till en definierad dissociationsaktivitet för konsistens mellan olika partier
Enzymer av icke-mammaliskt och icke-bakteriellt ursprung
Autoinhiberas vid 37 °C – ingen neutraliserande lösning behövs
Formulerad i Dulbeccos PBS med EDTA
Fenolrött ingår som visuell pH-indikator
pH 6,8–7,8
Typiska tillämpningar
Accutase dissocierar skonsamt en mängd olika vidhäftande och känsliga celltyper, inklusive humana embryonala stamceller (hESCs), humana inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs), neurala stamceller, primära neuroner och rutinmässigt odlade vidhäftande cellinjer såsom HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 och A549. Typiska användningsområden inkluderar:
Rutinmässig subkultur och passering av vidhäftande däggdjursceller
Skonsam dissociation av enskilda celler från hESCs, iPSCs och andra känsliga cellinjer
Provberedning för flödescytometri och FACS-analys
Analys av cellytmarkörer där epitopintegriteten är viktig
Analyser av cellmigrering, proliferation och apoptos
Quiescensanalyser genom serumdeprivation och studier av onkogen-transfektion
Migrationsanalyser av tumörceller och neurala krestceller
Uppskalning av produktionen i bioreaktorarbetsflöden
För rutinarbete, applicera cirka 10 ml Accutase per 75 cm2 odlingsyta och inkubera i 5–10 minuter vid rumstemperatur. Den optimala inkubationstiden bör bestämmas för varje cellinje och bör inte överstiga en timme. Innan tillsats, skölj cellskiktet med en Ca2+/Mg2+-fri saltlösning, såsom DPBS utan kalcium och magnesium, för att avlägsna kvarvarande serum och tvåvärda katjoner.
Hantering och förvaring
Förvara den oöppnade flaskan fryst vid -15 °C eller lägre. Tina antingen vid rumstemperatur eller över natten vid +2 °C till +8 °C. Tina inte Accutase i ett 37 °C varmt vattenbad, eftersom förhöjda temperaturer minskar enzymaktiviteten. Efter upptining kan lösningen förvaras i upp till 2 månader vid +2 °C till +8 °C; förvara inte vid rumstemperatur. Förvärm inte reagenset till 37 °C före användning – tillsätt det direkt till tvättade celler vid rumstemperatur. För långvarig hållbarhet rekommenderas engångsaliquotering för att undvika upprepade upptiningscykler. Arbeta alltid under aseptiska förhållanden.
Kvalitet
Tillverkat enligt strikta kvalitetsstandarder. Varje batch av Accutase är sterilt filtrerad och testad med avseende på sterilitet, pH, utseende och dissociationsaktivitet för att säkerställa enhetlig, reproducerbar prestanda från batch till batch.
Produktspecifikationer
Specifikation
Detalj
ProdukttypReagens för cellavskiljning/dissociation
FormatSterilfiltrerad vätska, färdig att använda
Volym100 ml
Arbetskoncentration1x (färdig att använda)
EnzymaktivitetKombinerad proteolytisk och kollagenolytisk
Enzymets ursprungIcke-däggdjurs
- och icke-bakteriellt
BuffertsystemDulbeccos PBS med EDTA
pH-indikatorFenolrött
pH-intervall6,8 – 7,8
UtseendeKlar, ljusröd till orange lösning
Förvaringstemperatur-15 °C eller lägre
Hållbarhet efter upptiningUpp till 2 månader vid +2 °C till +8 °C
Rekommenderad användningsvolym~10 ml per 75 cm² odlingsyta
Typisk inkubationstid5–10 minuter vid rumstemperatur
TransportförhållandenFryst på torris
Avsedd användningEndast för forskningsändamål och vidare tillverkning
Formulering (sammansättning per liter)
Komponent
Koncentration (mg/l)
Oorganiska salter
Natriumklorid (NaCl)8000,00
Dinatriumvätefosfat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumklorid (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenfosfat (KH2PO4)200,00
Övriga komponenter
EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenolrött3,00
Patenterad enzymblandning (proteolytisk och kollagenolytisk aktivitet)1x
Accutase är ett registrerat varumärke som tillhör Innovative Cell Technologies, Inc.
Denna färdiga, sterilt filtrerade flytande formulering är berikad med Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS), 2 mM L-glutamin, D-glukos (1,0 g/l) och 2,2 g/l natriumbikarbonat (NaHCO3), vilket gör den lämplig för användning i en CO2-reglerad inkubatoratmosfär (vanligtvis 5 % CO2). Det medföljande fenolrött fungerar som en pH-indikator, vilket möjliggör bekväm visuell övervakning av mediets tillstånd under cellodlingen.
Viktiga egenskaper
Klassisk Eagles MEM-formulering med Earles balanserade saltlösning (EBSS)
2 mM L-glutamin ingår – redo för omedelbar användning
2,2 g/l natriumbikarbonat – buffrad för inkubation med 5 % CO2
Med D-glukos (1,0 g/l) som primär kolkälla
Med fenolrött som pH-indikator
Utan HEPES och utan natriumpyruvat
Sterilt filtrerat flytande medium, klart för användning
pH 7,0 – 7,6
Typiska tillämpningar
EMEM stöder odling av en mängd olika däggdjurscellinjer, inklusive HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 och många primära celler. Vanliga tillämpningar inkluderar:
Rutinmässig underhåll och expansion av adherenta cellinjer
Arbetsflöden för virusförökning och vaccinproduktion
Cytotoxicitets
- och bioassay-tillämpningar
Studier av transfektion och proteinexpression
Grundläggande forskning inom cellbiologi och molekylärbiologi
För optimal celltillväxt kompletteras EMEM vanligtvis med 5–10 % fetalt bovint serum (FBS) och, beroende på cellinjen, med icke-essentiella aminosyror (NEAA) och antibiotika såsom penicillin/streptomycin.
Hantering och förvaring
Förvara den oöppnade flaskan vid +2 °C till +8 °C, skyddad från ljus. Efter öppnandet ska produkten användas under aseptiska förhållanden. L-glutamin i lösning bryts ned gradvis – vi rekommenderar att mediet används inom 4 veckor efter öppnandet för bästa resultat, eller att det kompletteras med färskt L-glutamin före användning om det förvaras under längre perioder. Låt mediet värmas upp till 37 °C innan det tillsätts till cellerna.
Kvalitet
Tillverkat enligt strikta kvalitetsstandarder. Varje sats testas med avseende på sterilitet, pH, osmolalitet och endotoxinnivåer för att säkerställa jämn prestanda vid cellodlingsapplikationer.
Produktspecifikationer
Specifikation
Detalj
ProdukttypMEM
ProduktkategoriCellodlingsmedier
FormatFlytande
SteriltJa
Storlek500 ml
L-glutaminMed L-glutamin (2 mM)
GlukosMed glukos (1,0 g/l)
NatriumbikarbonatMed NaHCO3 (2,2 g/l)
HEPESUtan HEPES
Natrium-pyruvatUtan natriumpyruvat
FenolröttMed fenolrött
SaltlösningEarle’s Balanced Salt Solution (EBSS)
pH7,0 – 7,6
EndotoxinhaltEj specificerat
Förvaring+2 °C till +8 °C
Formulering (sammansättning per liter)
Komponent
Koncentration (mg/l)
Oorganiska salter
Kalciumklorid · 2H2O265,00
Magnesiumsulfat97,72
Kaliumklorid400,00
Natriumklorid6 800,00
Natriumdihydrogenfosfat, vattenfritt122,00
Natriumbikarbonat (NaHCO3)2 200,00
Aminosyror
L-arginin · HCl126,00
L-cystin · 2HCl31,30
L-glutamin292,00
L-histidin · HCl · H2O42,00
L-isoleucin52,00
L-leucin52,00
L-lysin · HCl72,50
L-metionin15,00
L-fenylalanin32,00
L-treonin48,00
L-tryptofan10,00
L-tyrosin · 2Na · 2H2O51,90
L-valin46,00
Vitaminer
D-kalciumpantotenat1,00
Kolin klorid1,00
Folsyra1,00
myo-inositol2,00
Nikotinamid1,00
Pyridoxal · HCl1,00
Riboflavin0,10
Tiamin · HCl1,00
Övriga beståndsdelar
D(+)-glukos1 000,00
Fenolrött10,00
Viktiga egenskaper hos Freeze Medium CM-1 inkluderar:
Bred kompatibilitet: Effektivt för ett stort antal olika celltyper, inklusive primära celler, stamceller och etablerade cellinjer.
Hög viabilitet: Optimerat för att maximera cellåtervinning och viabilitet efter upptining, vilket säkerställer tillförlitliga experimentella resultat.
Redo att använda: Bekvämt förberedd och steriliserad för omedelbar användning, vilket minskar förberedelsetiden och risken för kontaminering.
Förbättrad stabilitet: Upprätthåller konsekvent prestanda under standardförhållanden för kryokonservering, vilket säkerställer reproducerbara resultat.
Lång hållbarhetstid: CM-1 är ett serumhaltigt kryopreserveringsmedium som är färdigt att använda och kan förvaras i kylskåp i upp till ett år.
Användning av CM-1 för frysning av celler
Följ dessa steg för att använda CM-1 för frysning av både adherenta celler och suspenderade celler
För adherenta celler, tvätta och separera dem från odlingssubstratet. För suspenderade celler, fortsätt direkt till nästa steg.
Räkna cellerna för att säkerställa att de har rätt koncentration.
Centrifugera cellerna för att pelletera dem och resuspendera sedan i CM-1-frysmedium.
Överför de resuspenderade cellerna till kryovialer.
Använd en metod med långsam frysning innan cellerna överförs till långtidsförvaring
Metod
Beskrivning av metoden
Steg för steg
❄️
Manuell frysning
En steg-för-steg-metod som innebär gradvis temperatursänkning för att säkerställa cellernas livskraft
1️⃣ Placera cellerna i frysmedium i en 4°C frys i 40 minuter.
2️⃣ Överför till en frys på -80°C i 24 timmar.
3️⃣ Förvara cellerna i flytande kväve för långtidsförvaring
❄️
Användning av Mr Frosty
En praktisk anordning som möjliggör kontrollerade fryshastigheter utan elektrisk ström
1️⃣ Förbered celler i kryovialer med frysmedium.
2️⃣ Placera kryovialerna i Mr Frosty-behållaren.
3️⃣ Förvara vid -80°C i 24 timmar innan du överför till flytande kväve
❄️
Frys med kontrollerad hastighet
En högprecisionsfrys från Thermo Fisher eller andra tillverkare som är utformad för kontrollerad temperatursänkning
1️⃣ Programmera enheten för att gradvis sänka temperaturen.
2️⃣ Placera de förberedda cellerna i frysen.
3️⃣ Efter fryscykeln, överför cellerna till flytande kväve
Förvara kryovialerna vid temperaturer under -130°C eller i flytande kväve för långtidsförvaring.
Ingredienser
Innehåller FBS, DMSO, glukos, salter
Buffringskapacitet: pH = 7,2 till 7,6
Cytions Freeze Medium CM-1 erbjuder en tillförlitlig lösning för kryokonservering, vilket säkerställer hög cellviabilitet och funktionalitet efter upptining för ett brett spektrum av forskningsapplikationer.
- och kycklingleverceller, särskilt under förhållanden med reducerat serum.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium är noggrant formulerat för att optimera cellodlingsförhållandena. Det har en berikad sammansättning som ger förhöjda nivåer av essentiella komponenter som aminosyror och natriumpyruvat, samt ytterligare element som putrescin, tymidin, hypoxantin och zink. Dessa tillsatser gör det möjligt för forskare att komplettera mediet med minimalt serum eller definierade komponenter för specifika celltyper, vilket underlättar exakta experimentella förhållanden.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium innehåller inte proteiner eller tillväxtfaktorer. Därför är det ofta nödvändigt att komplettera med tillväxtfaktorer och Fetal Bovine Serum (FBS), vilket gör det möjligt för forskare att skräddarsy mediet efter kraven för sina specifika cellinjer. För optimal prestanda måste koncentrationen av FBS noggrant optimeras för varje cellinje, så att optimal tillväxt och funktionalitet säkerställs.
För att upprätthålla ett fysiologiskt pH använder Ham's F-12K (Kaighn's) Medium ett natriumbikarbonatbuffert-system (2,5 g/L), vilket kräver en kontrollerad 5-10% CO2-miljö under odlingen. Detta säkerställer att mediets pH-värde ligger inom det idealiska intervallet för celltillväxt och livskraft
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 vid 20-25°C.
Varje parti har testats för sterilitet och frånvaro av mykoplasma och bakterier.
Förvaring
Förvaras i kylskåp vid +2°C till +8°C i mörker. Frysning och uppvärmning upp till +37°C minimerar produktens kvalitet.
Värm inte upp mediet till mer än 37°C och använd inte okontrollerbara värmekällor (t.ex. mikrovågsugnar).
Om endast en del av mediet ska användas, ta bort denna mängd från flaskan och värm upp den i rumstemperatur.
Hållbarheten för alla medier utom basmediet är 8 veckor från tillverkningsdatum.
Sammansättning
Komponenter
mg/L
Oorganiska salter
Kalciumklorid x 2H2O
135,24
Koppar(II)sulfat x 5H2O
0,00
Järn(II)sulfat x 7H2O
0,83
Magnesiumklorid x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfat x 7H2O
394,49
Kaliumklorid
283,29
Kaliumdivätefosfat
58,52
Natriumklorid
7597,20
di-Natriumvätefosfatvattenfri
115,02
Zinksulfat x 7H2O
0,14
Övriga komponenter
D(+)-Glukos vattenfri
1260,00
Hypoxanthin
4,08
DL-α-lipoinsyra
0,21
Fenol röd
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Natrium pyruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidin
0,73
Aminosyror
L-Alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-asparagin x H2O
30,02
L-Asparaginsyra
26,62
L-Cystein x HCl x H2O
70,24
L-glutamin
292,20
L-glutaminsyra
29,42
Glycin
15,01
L-Histidin x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucin
7,87
L-Leucin
26,24
L-Lysin x HCl
73,04
L-metionin
8,95
L-fenylalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-Serin
21,02
L-Threonin
23,82
L-tryptofan
4,08
L-tyrosin
10,87
L-Valin
23,42
Vitaminer
D(+)-Biotin
0,07
D-kalciumpantotenat
0,48
Kolinklorid
13,96
Folsyra
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoxin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) är en buffertlösning som används i stor utsträckning inom biologisk och kemisk forskning. Den spelar en avgörande roll för att upprätthålla pH-balansen och osmolariteten under olika experimentella procedurer, inklusive vävnadsbearbetning och cellodling. Vår PBS-lösning är noggrant formulerad med ingredienser med hög renhet för att säkerställa stabilitet och tillförlitlighet i varje experiment. Osmolariteten och jonkoncentrationerna i vår PBS efterliknar i hög grad de som finns i människokroppen, vilket gör den isotonisk och giftfri för de flesta celler.
Sammansättning av vår PBS-lösning
Vår PBS-lösning är en pH-justerad blandning av fosfatbuffertar och saltlösningar av ultrapur kvalitet. Vid en 1X arbetskoncentration innehåller den:
8000 mg/L natriumklorid (NaCl)
200 mg/L kaliumklorid (KCl)
1150 mg/L Natriumfosfat dibasisk vattenfri (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumfosfat monobasiskt vattenfritt (KH2PO4)
Denna sammansättning säkerställer en optimal pH
- och jonbalans, lämplig för ett brett spektrum av biologiska tillämpningar.
Tillämpningar av vår PBS-lösning
Vår PBS-lösning är idealisk för olika tillämpningar inom biologisk forskning. Dess isotoniska och giftfria egenskaper gör den lämplig för utspädning av substanser och sköljning av cellbehållare. PBS-lösningar som innehåller EDTA är effektiva för att frigöra fastsittande och klumpade celler. Tvåvärda metaller som zink bör dock inte tillsättas i PBS, eftersom det kan orsaka utfällning. I sådana fall rekommenderas Good's buffertar. Dessutom är vår PBS-lösning ett godtagbart alternativ till viralt transportmedium för transport och förvaring av RNA-virus, inklusive SARS-CoV-2.
Kvalitetskontroll
Sterilt filtrerad
Förvaring och hållbarhetstid
Förvaras vid +2°C till +25°C, skyddat från ljus.
Efter öppnandet, förvara vid 2°C till 25°C och använd inom 24 månader.
Förhållanden vid leverans
Omgivande temperatur
Underhåll
Förvaras i kylskåp vid +2°C till +8°C i mörker. Undvik frysning och frekvent uppvärmning till +37°C, eftersom det försämrar produktkvaliteten.
Värm inte upp mediet över 37°C och använd inte okontrollerade värmekällor som t.ex. mikrovågsugnar.
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut den mängd som behövs och värm det till rumstemperatur före användning.
Sammansättning
Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)
Salter
Kaliumklorid
200
Kaliumfosfat monobasiskt vattenfritt
200
Natriumklorid
8000
Natriumfosfat dibasisk vattenfri
1150
RPMI 1640 Medium utformades ursprungligen för att stödja tillväxten av mänskliga leukemiceller i både suspension och monolagerkulturer, men har utvecklats genom modifieringar av forskare och kommersiella leverantörer för att bli lämpligt för ett brett spektrum av däggdjursceller. Det är exceptionellt kompatibelt med cellinjer som HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyter och karcinom.
RPMI 1640 Medium skiljer sig från andra cellodlingsmedier på grund av sin unika sammansättning. Det innehåller en betydande mängd fosfat, aminosyror och vitaminer. Framför allt innehåller det biotin, vitamin B12 och PABA, som saknas i Eagle's Minimal Essential Medium eller Dulbecco's Modified Eagle Medium. Dessutom uppvisar RPMI 1640 Medium signifikant förhöjda koncentrationer av vitaminerna inositol och kolin. Det innehåller dock inte proteiner, lipider eller tillväxtfaktorer. Följaktligen krävs ofta tillsats av 10% fetalt bovint serum (FBS) för att ge optimala förutsättningar för celltillväxt.
Buffringssystemet i RPMI 1640 Medium är beroende av natriumbikarbonat och kräver en 5-10% CO2-miljö för att upprätthålla ett fysiologiskt lämpligt pH. Inkluderingen av reduktionsmedlet glutation skiljer detta medium ytterligare från andra.
Kvalitetskontroll
Sterilt filtrerad
Förvaring och hållbarhetstid
Förvaras vid +2°C till +8°C, skyddat från ljus.
Efter öppnandet, förvara vid 4°C och använd inom 6-8 veckor.
Förhållanden vid leverans
Omgivande temperatur
Underhåll
Förvaras i kylskåp vid +2°C till +8°C i mörker. Undvik frysning och frekvent uppvärmning till +37°C, eftersom det försämrar produktkvaliteten.
Värm inte upp mediet över 37°C och använd inte okontrollerade värmekällor som t.ex. mikrovågsugnar.
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut den mängd som behövs och värm det till rumstemperatur före användning.
Sammansättning
Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)
Aminosyror
Glycin
10.00
L-Alanyl-L-Glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-AsparaginH2O
56.82
L-Asparaginsyra
20.00
L-kystin 2HCl
65.20
L-glutaminsyra
20.00
L-Histidin HClH2O
20.27
L-hydroxi-L-prolin
20.00
L-Isoleucin
50.00
L-Leucin
50.00
L-Lysin HCl
40.00
L-metionin
15.00
L-fenylalanin
15.00
L-prolin
20.00
L-Serin
30.00
L-Threonin
20.00
L-Tryptofan
5.00
L-tyrosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitaminer
p-Amino bensoesyra
1.00
D-biotin
0.20
Kolinklorid
3.00
D-kalciumpantotenat
0.25
Folsyra
1.00
myo-Inositol
35.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoxin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Oorganiska salter
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Övriga komponenter
D-Glukos
2000.00
L-glutation reducerad
1.00
Fenolrött natriumsalt
5.30
Denna unika formulering kombinerar Dulbeccos modifierade Eagle-medium (DMEM) och Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) i ett exakt förhållande på 1:1. Tillsatsen av L-glutamin förbättrar dess sammansättning ytterligare.
DMEM, som härstammar från Eagles Minimal Essential Medium (EMEM), erbjuder en högre koncentration av aminosyror och vitaminer jämfört med sin föregångare. Däremot är Hams F-12 baserat på Hams F-10-medium, vilket tillhandahåller en kompletterande uppsättning av väsentliga komponenter.
För att stödja optimal celltillväxt är det vanligt att komplettera DMEM:Ham's F12 med FBS i en typisk koncentration på 5–10 %. Detta tillskott är nödvändigt eftersom mediet saknar tillväxthormoner, lipider och proteiner som är avgörande för cellutvecklingen.
DMEM:Ham's F12 innehåller ett pH-buffertsystem och kompletteras ofta med fenolrött, en pH-indikator. Odlade celler i DMEM:Ham's F12, eller något annat medium som använder bikarbonatbuffertsystemet, kräver en kontrollerad CO2-miljö på 5–10 % för att upprätthålla lämpliga pH-nivåer.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrerat
Förvaring och hållbarhet
Förvaras vid +2 °C till +8 °C, skyddat från ljus.
Efter öppnandet ska produkten förvaras vid 4 °C och användas inom 6–8 veckor.
Transportförhållanden
Rumstemperatur
Förvaring
Förvara i kylskåp vid +2 °C till +8 °C i mörker. Undvik frysning och frekvent uppvärmning till +37 °C, eftersom detta försämrar produktens kvalitet.
Värm inte mediet över 37 °C och använd inte okontrollerade värmekällor såsom mikrovågsugnar.
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut den nödvändiga mängden och värm den till rumstemperatur före användning.
Sammansättning
Kategori
Beståndsdelar
Koncentration (mg/l)
Aminosyror
Glycin
18,75
L-alanin
4,45
L-arginin-HCl
147,50
L-asparagin H₂O
7,50
L-asparaginsyra
6,65
L-cystein HCl H₂O
17,56
L-cystin 2 HCl
31,29
L-glutaminsyra
7,35
L-glutamin
365,00
L-histidin HCl H₂O
31,48
L-isoleucin
54,47
L-leucin
59,05
L-lysin-HCl
91,25
L-metionin
17,24
L-fenylalanin
35,48
L-prolin
17,25
L-serin
26,25
L-treonin
53,45
L-tryptofan
9,02
L-tyrosin 2 Na 2 H2O
55,79
L-valin
52,85
Vitaminer
D-biotin
0,0035
Kolin klorid
8,98
D-kalciumpantotenat
2,24
Folsyra
2,66
myo-inositol
12,60
Nikotinamid
2,02
Pyridoxin-HCl
0,031
Pyridoxal-HCl
2,00
Riboflavin
0,219
Tiamin-HCl
2,17
Vitamin B12
0,68
Oorganiska salter
CaCl2 2 H2O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO3)3 9 H2O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl2 6 H2O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na2HPO4
71,02
NaH2PO4 2 H2O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Övriga komponenter
D-glukos
3151,00
Hypoxantin
2,40
HEPES
3574,50
Linolsyra
0,042
Liponsyra
0,105
Fenolrött natriumsalt
8,63
Putrescin-2-HCl
0,081
Natriumpyruvat
55,00
Tymidin
0,365
- 0,02 vid 20-25 °C. Varje parti har testats för sterilitet och frånvaro av mykoplasma och bakterier. Förvaring Förvaras i kylskåp vid +2 °C till +8 °C i mörker. Frysning och uppvärmning till +37 °C försämrar produktens kvalitet. Värm inte mediet till mer än 37 °C och använd inte okontrollerbara värmekällor (t.ex. mikrovågsugnar). Om endast en del av mediet ska användas, ta ut denna mängd från flaskan och värm den till rumstemperatur. Hållbarhetstiden för alla medier utom basmediet är 6 till 8 veckor från öppningsdatumet. Sammansättning Komponenter mg/L Oorganiska salterKalciumklorid x 2H2O132,00 Magnesiumsulfat97,67 Kaliumklorid400 Natriumklorid6 460,00 Dinatriumvätefosfat (vattenfritt)504,00 Övriga komponenterD(+)-glukos (vattenfri)3 000 Glutation (reducerat)0 Köttpeptone600,00 Fenolrött natriumsalt11 AminosyrorL-alanin13 L-arginin x HCl42,1 L-asparagin x H2O45,03 L-asparaginsyra19,97 L-Cystein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabil)219,15 L-glutaminsyra22,07 Glycin7,51 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hydroxiprolin19,67 L-isoleucin39,3 L-leucin39,36 L-lysin x HCl36,54 L-metionin14,92 L-fenylalanin16,52 L-prolin17,27 L-serin26,28 L-treonin17,87 L-tryptofan3,06 L-tyrosin dinatriumsalt26,10 L-valin17,57 Vitaminerp-Aminobensoesyra1,0 Askorbinsyra0,5 D(+)-biotin0,2 D-kalciumpantotenat0,2 Kolin klorid5 Folsyra10 Myo-inositol36 Nikotinamid0,5 Nikotinsyra0,5 Pyridoxal HCl0,5 Pyridoxin HCl0,50 Riboflavin0,2 Tiamin HCl0,2 Vitamin B122,0
Medium 199 erbjuder en rad olika tillämpningar inom området. Det kan effektivt upprätthålla kumulus-oocytkomplexet (COC) och stödja in vitro-mognaden av oocyter. Dessutom används det för att skölja aspirationskanaler vid insamling av ägg från tyska Holstein-kor. Medium 199 är dessutom ett utmärkt medium för odling av hjärtats endotelceller från råttor. Dessa tillämpningar visar på Medium 199:s mångsidighet och anpassningsförmåga till olika experimentella behov.
Mediets historia
Utvecklingen av Medium 199 på 1950-talet innebar ett betydande framsteg inom vävnadsodlingsmedier. Innan det introducerades var många odlingsmedier beroende av produkter och vävnadsextrakt från djur. Morgan och hans kollegor revolutionerade dock området genom att formulera en helt definierad näringskälla för cellkulturer. Genom sina experiment med olika kombinationer av vitaminer, aminosyror och andra faktorer upptäckte de de exceptionella tillväxtfrämjande egenskaperna hos Medium 199.
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 vid 20-25°C.
Varje parti har testats för sterilitet och frånvaro av mykoplasma och bakterier.
Förvaring
Förvaras i kylskåp vid +2°C till +8°C i mörker. Frysning och uppvärmning upp till +37°C minimerar produktens kvalitet.
Värm inte upp mediet till mer än 37° C och använd inte okontrollerbara värmekällor (t.ex. mikrovågsugnar).
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut denna mängd ur flaskan och värm upp den i rumstemperatur.
Hållbarheten för alla medier utom basmediet är 8 veckor från tillverkningsdatumet.
Sammansättning
Komponenter
mg/L
Oorganiska salter
Kalciumklorid x 2H2O
264,92
Järn(III)nitrat x 9H2O
0,72
Magnesiumsulfat
97,67
Kaliumklorid
400,00
Natriumacetat x 3H2O
82,95
Natriumklorid
6,800.00
Natriumdivätefosfat x H2O
140,00
Övriga komponenter
Adeninsulfat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Kolesterol
0,20
2'-Deoxiribos
0,50
D(+)-Glukos vattenfri
1,000.00
Glutation (röd)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hypoxanthin
0,30
Fenol röd
10,00
D-Ribos
0,50
Tymin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xanthin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminosyror
L-Alanin
25,00
L-arginin x HCl
70,00
L-Asparaginsyra
30,00
L-Cystein x HCl x H2O
0,10
L-Cystin
20,00
L-Glutamin stabil
149,00
L-glutaminsyra
67,00
Glycin
50,00
L-Histidin x HCl x H2O
21,88
L-Hydroxyprolin
10,00
L-Isoleucin
20,00
L-Leucin
60,00
L-Lysin x HCl
70,00
L-metionin
15,00
L-fenylalanin
25,00
L-prolin
40,00
L-Serin
25,00
L-Threonin
30,00
L-tryptofan
10,00
L-Tyrosin
40,00
L-Valin
25,00
Vitaminer
4-Amino bensoesyra
0,05
Askorbinsyra
0,05
D(+)-Biotin
0,01
Calciferol
0,10
D-kalciumpantotenat
0,01
Kolinklorid
0,50
Folsyra
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadion
0,01
Nikotinsyra
0.025
Nikotinamid
0.025
Pyridoxal x HCl
0.025
Pyridoxol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
DL-α-tokoferolfosfat dinatriumsalt
0,01
Tiamin x HCl
0,01
Vitamin A-acetat
0,14
IMDM lämpar sig väl för snabbt växande cellkulturer med hög densitet, inklusive Jurkat-, COS-7
- och makrofagceller. De olika modifieringarna av IMDM som finns tillgängliga för en rad olika cellodlingsapplikationer kan hittas med hjälp av verktyget för medieväljare. Flytande medier tillhandahåller viktiga näringsämnen för alla cellodlingsapplikationer. Var och en av våra högkvalitativa cellodlingsmedier tillverkas enligt den ursprungligen publicerade formeln eller de modifieringar som krävs för att säkerställa konsekvent prestanda och stabilitet hos odlingsmediet.
IMDM jämfört med DMEM
IMDM innehåller kaliumnitrat i stället för järnnitrat samt HEPES och natriumpyruvat. De ytterligare komponenterna i IMDM gör det mer lämpligt för specialiserade celltyper och specifika tillämpningar än DMEM.
IMDM jämfört med RPMI
IMDM och RPMI har olika formuleringar som kan vara relevanta för stimulering med PMA/ionomycin. En betydande skillnad är koncentrationen av Ca2+. Medan RPMI innehåller 0,42 mM Ca2+, innehåller IMDM 1,49 mM.
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 vid 20-25°C.
Varje parti har testats för sterilitet och frånvaro av mykoplasma och bakterier.
Underhåll
Förvaras i kylskåp vid +2°C till +8°C i mörker. Frysning och uppvärmning upp till +37°C minimerar produktens kvalitet.
Värm inte upp mediet till mer än 37° C och använd inte okontrollerbara värmekällor (t.ex. mikrovågsugnar).
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut denna mängd ur flaskan och värm upp den i rumstemperatur.
Hållbarheten för alla medier utom basmediet är 8 veckor från tillverkningsdatumet.
Sammansättning
Komponenter
mg/L
Oorganiska salter
Kalciumklorid x 2 H2O
219,00
Kaliumklorid
330,00
Kaliumnitrat
0.076
Vattenfritt magnesiumsulfat
97,73
Natriumklorid
4,505.00
Natriumdivätefosfat vattenfritt
109,00
Natriumselenit
0,02
Övriga komponenter
D(+)-Glukos vattenfri
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvat
110,00
Fenolrött
15,00
Aminosyror
L-Alanin
25,00
L-arginin x HCl
84,00
L-Asparagin x H2O
25,00
L-Asparaginsyra
30,00
L-kystin x 2HCl
91,24
L-Glutamin
584,00
L-glutaminsyra
75,00
Glycin
30,00
L-Histidin x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-metionin
30,00
L-fenylalanin
66,00
L-prolin
40,00
L-Serin
42,00
L-Threonin
95,20
L-tryptofan
16,00
L-Tyrosin x 2Na
104,20
L-Valin
93,60
Vitaminer
D(+)-Biotin
0.013
D-kalciumpantotenat
4,00
Kolinklorid
4,00
Folsyra
4,00
myo-Inositol
7,20
Cellodlingsmedier: En översikt
Inom biovetenskapen är cellodling en av de viktigaste metoderna. Med begreppet ”cellodling” avses uttag av celler, vävnader eller organ från ett djur eller en växt och den efterföljande implanteringen av dessa celler, vävnader eller organ i en artificiell miljö som främjar deras överlevnad och/eller tillväxt. De grundläggande miljökraven för optimal cellutveckling är kontrollerad temperatur, ett substrat för cellfästning, ett lämpligt odlingsmedium och en inkubator som upprätthåller optimalt pH och osmolalitet. Cellerna måste ha dessa förhållanden för att kunna växa till sin fulla potential.
Valet av ett lämpligt odlingsmedium för in vitro-odling är det steg i cellodlingen som är både det mest kritiska och det viktigaste. Ett odlingsmedium, även kallat odlingsmiljö, är en vätska eller gel som är sammansatt för att främja organismers utveckling på mikroskopisk, cellulär eller växtliknande nivå. Det medium som används för att odla celler innehåller ofta en tillräcklig tillförsel av energi och ämnen som reglerar cellcykeln. De viktigaste beståndsdelarna i ett odlingsmedium är aminosyror, vitaminer, oorganiska salter, glukos och serum. Serum tillsätts till mediet eftersom det fungerar som en källa till tillväxtfaktorer, hormoner och vidhäftningsfaktorer. Förutom att tillföra näringsämnen bidrar mediet också till att upprätthålla pH-värdet och osmolaliteten.
Typer av odlingsmedier som används vid cellodling
Både mänskliga och djurceller kan odlas i antingen ett artificiellt eller syntetiskt medium eller i ett helt naturligt medium som kompletteras med naturliga beståndsdelar. Nedan ger vi en översikt över de olika typer av odlingsmedier som finns tillgängliga idag.
Naturliga odlingsmedier
Naturliga medier innehåller endast biologiska vätskor som förekommer i sitt naturliga tillstånd. Naturliga medier är mycket användbara och lämpliga för odling av en bred variation av djurcelltyper. Bristen på kunskap om de exakta beståndsdelarna i naturliga medier är den främsta faktorn som bidrar till den låga repeterbarheten hos resultat som erhålls med naturliga medier.
Konstgjorda odlingsmedier
Framställningen av artificiella eller syntetiska odlingsmedier innebär tillsats av näringsämnen (både organiska och oorganiska), serumproteiner, kolhydrater, kofaktorer, vitaminer och salter, samt gasfaserna O₂ och CO₂ [1].
Olika typer av artificiella odlingsmedier har utvecklats för att uppfylla en eller flera av följande funktioner: 1) Omedelbar överlevnad (en balanserad saltlösning med exakt pH-värde och osmotiskt tryck). 2) Förlängd överlevnad (en balanserad saltlösning kompletterad med olika formuleringar av organiska kemikalier och/eller serum). 3) Utveckling under obegränsad tid. 4) Specialiserade funktioner.
Det finns fyra olika klassificeringar av artificiella odlingsmedier:
Seruminnehållande medier
Den vanligaste typen av tillskott i odlingsmedier för djurceller är fetalt bovint serum. Det tillsätts till odlingsmediet som ett kostnadseffektivt tillskott för att uppnå bästa möjliga tillväxtförhållanden. Förutom att fungera som transportör eller kelator för näringsämnen som är instabila eller vattenolösliga, hormoner och tillväxtfaktorer, proteasinhibitorer och andra ämnen, binder och neutraliserar serumet även skadliga molekyler.
Serumfria odlingsmedier
Förekomsten av serum i odlingsmediet har ett antal nackdelar och kan leda till allvarliga tolkningsfel inom immunologisk forskning [2, 3]. En rad olika serumfria odlingsmedier har tagits fram [4, 5]. Dessa odlingsmedier är i allmänhet specifikt framtagna för att stödja odling av en enda celltyp, såsom Knockout Serum Replacement och Knockout DMEM från Thermo Fisher Scientific, samt mTESR-mediet från Stem Cell Technologies [6], avsett för stamceller [7].
Dessutom innehåller dessa odlingsmedier definierade mängder av renade tillväxtfaktorer, lipoproteiner och andra proteiner, som annars vanligtvis tillförs via serumet [8]. Dessa odlingsmedier kallas ofta för ”definierade odlingsmedier”, eftersom de komponenter som ingår i dem är välkända.
Kemiskt definierade odlingsmedier
Dessa medier innehåller ultrarena oorganiska och organiska komponenter som inte har kontaminerats på något sätt. De kan även innehålla tillsatser av rena proteiner, såsom tillväxtfaktorer.
Genetisk modifiering av bakterier eller jäst, tillsammans med tillsats av vissa fettsyror, vitaminer, kolesterol och aminosyror, leder till produktion av deras beståndsdelar [9].
Proteinfritt odlingsmedium
Proteinfritt odlingsmedium är sådant som inte innehåller något protein alls utan endast icke-proteinhaltiga beståndsdelar. Jämfört med odlingsmedium med tillsatt serum främjar användningen av odlingsmedium utan tillsatt protein större cellproliferation och proteinexpression samt underlättar reningen av eventuella produkter som genereras i en efterföljande process [10–12]. Protein ingår inte i formuleringar som MEM och RPMI-1640. Ett proteintillskott kan dock administreras om det är nödvändigt.
Odlingsmedier och deras grundläggande beståndsdelar
Kommersiella odlingsmedier kan köpas i pulver- eller flytande form och innehåller ofta en mängd olika näringsämnen, såsom aminosyror, glukos, salter, vitaminer och andra kosttillskott.
Behovet av dessa komponenter varierar mellan olika cellinjer, och dessa variationer ligger till grund för det stora antalet olika mediesammansättningar. Varje komponent har en specifik funktion, som beskrivs i följande avsnitt:
Buffertsystem
För att upprätthålla optimala odlingsförhållanden måste pH-värdet regleras, vilket ofta sker med hjälp av ett av två buffertsystem:
Naturligt buffertsystem
Förhållandet mellan CO₂ och H₂CO₃ i atmosfären är detsamma som i odlingsmediet, vilket skapar en naturlig buffringsmekanism. För att bevara denna naturliga buffringsmekanism måste odlingarna hållas i en luftmiljö med 5–10 % CO₂, vilket ofta uppnås genom användning av en CO₂-inkubator. En av de största fördelarna med att använda en naturlig buffert är att den är både billig och säker.
HEPES
Kemisk buffring med hjälp av zwitterjonen HEPES har en större buffringsförmåga i pH-intervallet 7,2–7,4 och kräver ingen reglerad gasmiljö. För vissa celltyper kan en högre dos av HEPES vara skadlig. Medier som innehåller HEPES är dessutom betydligt mer känsliga för de fototoxiska effekterna av fluorescerande ljus [13].
Fenolrött
pH-indikatorn fenolrött ingår ofta i kommersiellt tillgängliga odlingsmedier, vilket möjliggör kontinuerlig övervakning av pH-värdet. När cellerna förökar sig orsakar de metaboliter som dessa celler producerar en förskjutning av pH-värdet och därmed en färgförändring i odlingsmediet. Fenolrött har en dubbel effekt på mediets färg: det blir gult vid surt pH och lila vid alkaliskt pH. Vid pH 7,4 – det optimala värdet för cellodling – får mediet en fluorescerande röd färg.
Men fenolrött har några nackdelar: För det första kan fenolrött efterlikna verkan hos ett antal steroidhormoner, främst östrogen [14]. Därför rekommenderas ett medium utan fenolrött vid studier av östrogenkänsliga celler, såsom bröstvävnad. Natrium-kaliumbalansen störs av förekomsten av fenolrött i flera serumfria formuleringar. Tillsats av serum eller bovint hypofyshormon till medierna kan motverka denna effekt [15]. För det tredje hindras detekteringen i flödescytometriska experiment av förekomsten av fenolrött.
Oorganiska salter
Medier som innehåller oorganiska salter, såsom natrium-, kalium- och kalciumjoner, bidrar till att upprätthålla osmotisk jämvikt och reglera membranpotentialen.
Aminosyror
Eftersom aminosyror är de grundläggande beståndsdelarna i protein är de en väsentlig komponent i varje enskilt cellodlingsmedium som någonsin har utvecklats. Eftersom celler inte kan producera vissa aminosyror på egen hand är det viktigt att odlingsmediet innehåller essentiella aminosyror. De är nödvändiga för cellernas förökning, och den koncentration i vilken de förekommer avgör den maximala celltäthet som kan uppnås. I synnerhet är L-glutamin, en essentiell aminosyra, särskilt viktig.
L-glutamin fungerar som en sekundär energikälla för ämnesomsättningen och tillför kväve till produktionen av NAD, NADPH och nukleotider. Eftersom L-glutamin är en instabil aminosyra som med tiden omvandlas till en form som cellerna inte kan utnyttja måste den tillföras odlingsmediet.
Dessutom kan icke-essentiella aminosyror tillföras odlingsmediet för att fylla på de som har förbrukats under tillväxtprocessen. Cellernas tillväxt stimuleras och deras livskraft ökar när odlingsmediet berikas med icke-essentiella aminosyror.
Kolhydrater
Kolhydrater i form av sockerarter är den huvudsakliga energikällan. Många odlingsmedier innehåller även maltos och fruktos utöver de vanligare sockerarterna glukos och galaktos.
Proteiner och peptider
Albumin, transferrin och fibronektin är de vanligaste proteinerna och peptiderna. De är särskilt viktiga i odlingsmedier som inte innehåller serum. Albumin, transferrin, aprotinin, fetuin och fibronektin är några av de proteiner som kan förekomma i serum, vilket är en rik proteinkälla.
Albumin är det dominerande proteinet i blodet och har till uppgift att binda och transportera olika ämnen, däribland vatten, salter, fria fettsyror, hormoner och vitaminer, mellan olika organ och celler. Albumins förmåga att binda till kemikalier gör det till ett effektivt medel för att avlägsna skadliga föreningar från det odlingsmedium där cellerna odlas.
Aprotinin är ett skyddsmedel i cellodlingssystem, eftersom det är stabilt vid neutralt och surt pH samt tål höga temperaturer och den nedbrytning som kan orsakas av proteolytiska enzymer. Det kan hämma ett antal serinproteaser, däribland trypsin.
Fetuin är ett glykoprotein som kan påvisas i högre halter i serum från foster och nyfödda djur jämfört med serum från vuxna. Dessutom fungerar det som en serinproteasinhibitor. Proteinet fibronektin är en väsentlig komponent i processen för celladhesion. Transferrin är ett protein som transporterar järn och ansvarar för att leverera järn till cellmembranen.
Fettsyror och lipider
De spelar en avgörande roll i serumfritt medium när serum saknas.
Vitaminer
Många vitaminer är nödvändiga för cellernas utveckling och förökning. Cellerna kan inte själva producera tillräckliga mängder av vitaminer, vilket gör att de är nödvändiga som kosttillskott vid vävnadsodling.
I cellodling är serum den primära källan till vitaminer; dock berikas odlingsmedierna även med olika vitaminer för att anpassa dem till en specifik celltyp. Vanligtvis används B-vitaminer för att stimulera tillväxten.
Spårämnen
Kemiska grundämnen som koppar, zink, selen och mellanprodukter av trikarbonsyror kallas spårämnen. Spårämnen tillsätts ofta i medier som inte innehåller serum för att ersätta de ämnen som vanligtvis finns i serum. Dessa ämnen är viktiga kemiska komponenter som krävs för en sund cellutveckling. Många biokemiska reaktioner är beroende av vissa mikronäringsämnen, till exempel enzymaktivitet.
Medietillskott
Det fullständiga odlingsmediet som rekommenderas för vissa cellinjer behöver extra komponenter som saknas i basmediet och serumet. Dessa kosttillskott stödjer celltillväxt och korrekt ämnesomsättning.
Även om hormoner, tillväxtfaktorer och signalmolekyler är nödvändiga för en korrekt proliferation av vissa cellinjer, bör följande försiktighetsåtgärder alltid vidtas: Eftersom tillsats av kosttillskott kan förändra osmolaliteten i det fullständiga odlingsmediet, vilket kan hämma cellutvecklingen, är det alltid tillrådligt att kontrollera osmolaliteten efter att kosttillskott har tillsatts. För de flesta cellinjer ligger den optimala osmolaliteten mellan 260 och 320 mOSM/kg.
Antibiotika
Antibiotika används ofta för att hämma tillväxten av bakterier och svampar [16], även om de inte är nödvändiga för celltillväxten. Eftersom antibiotika kan dölja kontaminering av mykoplasma och resistenta bakterier rekommenderas inte rutinmässig användning av dem vid cellodling [17, 18].
Dessutom kan antibiotika störa ämnesomsättningen hos överkänsliga celler. De penicillin-streptomycin-kombinationer som tillverkas av MilliporeSigma och Life Technologies används ofta. Plasmocin har använts vid odling av gliomcellinjerna TS603, TS516 och BT260 [19], och det har visat sig vara effektivt för att eliminera mykoplasmakontaminering (20).
Serum
Albuminer, tillväxtfaktorer och tillväxthämmare finns alla i serum. Serum är en av de viktigaste komponenterna i cellodlingsmedium eftersom det tillför aminosyror, proteiner, vitaminer (särskilt fettlösliga vitaminer som A, D, E och K), kolhydrater, lipider, hormoner, tillväxtfaktorer, mineraler och spårämnen.
Serum från foster och kalvar används ofta för att främja utvecklingen av odlade celler. Fosterserum är en rik källa till tillväxtfaktorer och lämpar sig för cellkloning och utveckling av känsliga celler. På grund av dess minskade tillväxtfrämjande egenskaper används kalvserum i kontaktinhibitionsförsök. Normala odlingsmedier innehåller ofta 2–10 % serum. Tillsatsen av serum till odlingsmediet tjänar följande syften [21]:
-
Serumet tillför cellerna nödvändiga näringsämnen (både i lösning och bundna till proteiner).
-
Serumet innehåller flera tillväxtfaktorer och hormoner som bidrar till tillväxtfrämjande och specialiserad cellaktivitet.
-
Det innehåller många bindande proteiner, såsom albumin och transferrin, som transporterar andra ämnen in i cellen. Albumin transporterar till exempel fetter, vitaminer, hormoner m.m. in i cellerna.
-
Det tillför även proteiner, såsom fibronektin, som ökar cellernas vidhäftning till substratet. Dessutom producerar det spridningsfaktorer som underlättar cellernas utbredning före celldelning.
-
Det tillför proteasinhibitorer som förhindrar proteolys i cellerna.
-
Det innehåller även mineraler såsom Na+, K+, Zn2+ och Fe2+.
-
Det ökar mediets viskositet och skyddar därmed cellerna från mekanisk skada under omrörning i suspensionskulturen.
-
Det fungerar även som en buffert.
Referenser
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Näring för djurceller i vävnadsodling; inledande studier av ett syntetiskt medium. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Snabb adsorption av en komponent i fosterkalvserum av däggdjursceller i odling. En potentiell källa till artefakter i studier av antiserum mot cellspecifika antigener. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Tillsats av serum till det medium som används för beredning av cellsuspensioner som en möjlig källa till artefakter i cellmedierade reaktioner studerade med hjälp av poplitealt lymfkörteltest. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Kommersiella serumfria odlingsmedier: hybridomtillväxt och produktion av monoklonala antikroppar. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Metoder för odling av celler i serumfritt medium. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, m.fl. HSP70-chaperoner transporterar RNA-fritt TDP-43 in i anisotropa, intranukleära, flytande sfäriska skal. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, m.fl. Downsyndrom-inducerad senescens stör kärnarkitekturen hos neurala progenitorceller. Cell Stem Cell. 2022;29:116–130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Fullständig ersättning av serum med albumin, transferrin och sojalipid i odlingar av lipopolysackaridreaktiva B-lymfocyter. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematisk förbättring av ett kemiskt definierat proteinfritt medium för hybridomtillväxt och produktion av monoklonala antikroppar. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Ett proteinfritt medium för odling av hybridomer och andra celler i immunsystemet. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serumfri cellodling: en enhetlig metod. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Klonal odling av cellinjer från kinesisk hamster i proteinfritt medium. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analys av de cytotoxiska effekterna av ljusexponerat HEPES-innehållande odlingsmedium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolrött i vävnadsodlingsmedier är ett svagt östrogen: implikationer för studien av östrogenresponsiva celler i odling. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Utveckling av serumfria medier. I: Master JRW, red. Animal Cell culture, 3:e uppl. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Användning av antibiotika i cellodlingsmedier. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Spridning och bekämpning av mykoplasmainfektioner i cellkulturer. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Byte av odlingsmedium och passering av cellinjer. Nat Protoc. 2007;2:2276–84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, m.fl. Histondemetylaset KDM6A känner direkt av syre för att reglera kromatin och cellernas öde. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, m.fl. Effektiviteten hos Plasmocin™ på olika däggdjurscellinjer infekterade av mollicutes jämfört med vanligt förekommande antibiotika i cellodling: en lokal erfarenhet. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molekylära aspekter av ligandbindning till serumalbumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53