Volum: 100 ml
Depozitare: ≤ –15 °C
Sterilitate: Filtrat steril
Soluția stabilă de glutamină (L-alanil-L-glutamină, 200 mM) este o formă dipeptidică foarte stabilă de L-glutamină, concepută ca înlocuitor direct al L-glutaminei convenționale în mediile de cultură celulară. L-glutamina este un aminoacid esențial și o sursă majoră de energie pentru celulele cultivate, jucând un rol critic în creșterea celulară, metabolism și sinteza proteinelor.
Aplicații și beneficii
În mediile lichide standard, L-glutamina se degradează relativ rapid la 37 °C, ducând la formarea de produse secundare toxice, cum ar fi ionii de amoniu, care pot afecta negativ viabilitatea celulelor și rezultatele experimentale. Glutamina stabilă depășește această limitare, oferind o formă dipeptidică nedegradabilă, care rămâne intactă în condiții de cultură.
Celulele scindă enzimatic legătura dipeptidică pentru a elibera L-glutamina după cum este necesar, asigurând o aprovizionare continuă cu substanță proaspătă și prevenind în același timp acumularea de produse reziduale dăunătoare. Acest lucru face ca soluția să fie deosebit de avantajoasă pentru culturile celulare pe termen lung și sistemele de creștere cu densitate ridicată.
Formulare și utilizare
Soluția L-Alanyl-L-Glutamine este preparată în apă de calitate pentru culturi celulare la o concentrație de 200 mM și este filtrată steril pentru aplicații sensibile la contaminare. Poate fi diluată direct în medii complete, în funcție de cerințele experimentale. A se păstra la ≤ –15 °C și a se evita ciclurile repetate de îngheț-dezgheț pentru a menține stabilitatea produsului.
Numai pentru uz cercetare. Nu se utilizează în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la oameni sau animale.
Volum: 100 ml
Depozitare: +2 °C până la +8 °C
Sterilitate: Filtrat steril
Soluția tampon HEPES (1 M), cunoscută și sub denumirea de acid N-2-hidroxietilpiperazin-N-2-etansulfonic, este un agent tampon organic zwitterionic utilizat pe scară largă în mediile de cultură celulară. Este concepută pentru a menține condiții stabile de pH în intervalul fiziologic de la 6,7 la 8,6, susținând funcționarea optimă a celulelor în timpul aplicațiilor in vitro.
Aplicații și beneficii
HEPES oferă o capacitate de tamponare fiabilă în sistemele de cultură celulară, în special atunci când celulele sunt manipulate în afara unui incubator cu CO₂. Adăugarea de 10-25 mM HEPES în mediile de cultură oferă o stabilitate îmbunătățită a pH-ului în timpul perioadelor de manipulare prelungite, contribuind la menținerea unor condiții experimentale constante.
Acest tampon este impermeabil la membrană, are o interferență minimă cu reacțiile biochimice și demonstrează o stabilitate chimică și enzimatică puternică. Aceste proprietăți îl fac potrivit pentru o gamă largă de aplicații de cultură celulară și biochimice.
Formulare și utilizare
Soluția este furnizată sub formă de concentrat 1 M preparat în apă de calitate pentru culturi celulare și este filtrată steril pentru utilizare în medii sensibile la contaminare. Poate fi diluată până la concentrația de lucru dorită, în funcție de cerințele aplicației. A se păstra la +2 °C până la +8 °C și a se manipula în condiții aseptice pentru a păstra integritatea produsului.
Numai pentru uz cercetare. Nu se utilizează în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la oameni sau animale.
Volum: 50 ml
Depozitare: +2 °C până la +8 °C
Sterilitate: Filtrat steril
Soluția de D-(+)-glucoză (soluție de dextroză) este un supliment steril, gata de utilizare, care conține zahăr natural D-(+)-glucoză, o componentă centrală a metabolismului celular. Glucoza este implicată în procese biologice esențiale, cum ar fi producerea de energie, glicozilarea și formarea glicanilor care contribuie la structura și funcționarea celulară.
Aplicații și beneficii
Această soluție de glucoză este utilizată pe scară largă ca supliment în mediile de cultură celulară și în numeroase aplicații de biologie celulară și moleculară. Ca sursă primară de carbon și energie, glucoza susține creșterea celulară, proliferarea și activitatea metabolică. Implicarea sa în căile biosintetice o face, de asemenea, esențială pentru menținerea fiziologiei celulare normale și a consistenței experimentale.
Formulare și utilizare
Soluția este furnizată la o concentrație ridicată de 250 g/L glucoză, permițând diluarea flexibilă în mediile de cultură în funcție de cerințele experimentale. Este filtrată steril pentru a asigura adecvarea pentru aplicații sensibile la contaminare. A se păstra la +2 °C până la +8 °C și a se manipula aseptic pentru a menține calitatea și stabilitatea produsului.
Numai pentru uz cercetare. Nu se utilizează în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la oameni sau animale.
Volum: 10 ml
Condiții de păstrare: +2 °C până la +8 °C
Sterilitate: Filtrat steril
Soluția de insulină-transferină-seleniu (ITS) (100x) este un supliment definit chimic, conceput pentru o gamă largă de aplicații în cultura celulară. Este utilizată cel mai frecvent ca aditiv în mediile de cultură celulară bazale pentru a susține creșterea celulară în condiții de ser redus sau fără ser.
Aplicații și beneficii
Suplimentul nostru ITS furnizează componentele esențiale necesare pentru performanța optimă a mediilor fără ser. Prin suplimentarea mediilor nutritive convenționale cu ITS, necesarul de ser fetal bovin (FBS) pentru întreținerea de rutină a multor linii celulare poate fi redus semnificativ. Acest lucru ajută la minimizarea variabilității asociate cu utilizarea serului, menținând în același timp creșterea și viabilitatea celulară constante.
Insulina susține absorbția celulară și metabolismul nutrienților cheie, transferina facilitează transportul fierului, iar seleniul contribuie la apărarea antioxidantă și la activitatea enzimatică. Împreună, aceste componente promovează un metabolism celular echilibrat și o reproductibilitate îmbunătățită în sistemele de cultură definite.
Formulare și utilizare
Insulina-transferina-seleniu (ITS) este furnizată sub formă de soluție concentrată 100x în soluția salină echilibrată Earle (EBSS) fără roșu de fenol. Pentru aplicații standard, diluați 1:100 în mediul bazal adecvat pentru a obține concentrația de lucru recomandată. A se păstra la +2 °C până la +8 °C și a se manipula în condiții aseptice pentru a menține stabilitatea și sterilitatea produsului.
Numai pentru uz în cercetare. A nu se utiliza în proceduri de diagnostic sau terapeutice. A nu se utiliza la oameni sau animale.
Volum: 5 ml
Condiții de păstrare: +2 °C până la +8 °C
Sterilitate: Filtrat steril
Soluția de insulină umană recombinantă este un supliment definit chimic utilizat în mod obișnuit pentru cultivarea liniilor celulare de mamifere, inclusiv a celulelor ovariene de hamster chinezesc (CHO). Această soluție de calitate pentru culturi celulare conține insulină umană recombinantă exprimată în Saccharomyces cerevisiae, asigurând o puritate ridicată și performanțe constante în aplicațiile de cercetare.
Aplicații și beneficii
Insulina este adăugată în mod obișnuit în medii fără ser și definite chimic pentru a stimula creșterea și productivitatea celulară. Ca hormon regulator cheie, insulina susține absorbția, utilizarea și stocarea celulară a glucozei, aminoacizilor și acizilor grași. De asemenea, inhibă descompunerea glicogenului, proteinelor și lipidelor, contribuind astfel la îmbunătățirea viabilității celulare și a stabilității metabolice în sistemele de cultură. Formularea definită chimic susține reproductibilitatea și minimizează variabilitatea în fluxurile de lucru sensibile ale culturii celulare.
Proprietăți biologice și utilizare
Insulina este un hormon polipeptidic cu două lanțuri, produs în mod natural de celulele β ale insulelor pancreatice. Are o greutate moleculară de aproximativ 5.800 Da. Lanțurile α și β sunt legate prin două legături disulfidice interlanț, iar lanțul α conține o legătură disulfidică intralanț. Pentru aplicații de cultură celulară, soluția trebuie manipulată în condiții aseptice și depozitată la +2 °C până la +8 °C pentru a menține stabilitatea și performanța.
Numai pentru uz în cercetare. Nu se utilizează în proceduri de diagnostic sau terapeutice. Nu se utilizează la oameni sau animale.
Volum: 100 ml
Depozitare: +2 °C până la +8 °C
Sterilitate: Filtrat steril
Soluția de piruvat de sodiu (100 mM) este un supliment steril, gata de utilizare, conceput pentru a furniza o sursă suplimentară de energie ușor accesibilă pentru mediile de cultură celulară. Piruvatul de sodiu joacă un rol cheie în metabolismul energetic celular și susține creșterea celulelor active din punct de vedere metabolic și cu proliferare rapidă, cum ar fi celulele tumorale. Suplimentarea poate îmbunătăți viabilitatea celulelor și poate ajuta la menținerea stabilității metabolice în sistemele de cultură.
Aplicații și beneficii
Această soluție este utilizată pe scară largă în cultura celulară de rutină pentru a îmbogăți mediile cu piruvat și a promova condiții optime de creștere. Susține producția de ATP, poate ajuta la reducerea stresului oxidativ și contribuie la îmbunătățirea performanței metabolice a celulelor cultivate. Fabricat în apă de calitate pentru cultura celulară și filtrat steril, produsul asigură o calitate constantă și reproductibilitate în fluxurile de lucru de cercetare.
Utilizare și compatibilitate
Concentrația finală recomandată pentru majoritatea aplicațiilor de cultură celulară este de 1 mM piruvat de sodiu, obținută prin diluarea soluției stoc de 100 mM în proporție de 1:100 în mediu de cultură complet. Soluția este compatibilă cu o gamă largă de medii bazale și linii celulare de mamifere. A se păstra la +2 °C până la +8 °C și a se proteja de contaminare pentru a menține stabilitatea produsului.
Numai pentru uz în cercetare. Nu se utilizează în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la oameni sau animale.
Volum: 100 ml Depozitare: ≤-15°C Sterilitate: Steril-filtrat
Antibiotic/Antimicotic Solution (100x) este un concentrat steril, gata de utilizare, conceput pentru a reduce riscurile de contaminare microbiană în culturile celulare și în aplicațiile de laborator conexe. Această soluție 100x conține o combinație bine stabilită de penicilină, streptomicină și amfotericină B
- care asigură o activitate antimicrobiană cu spectru larg împotriva bacteriilor Gram-pozitive și Gram-negative, drojdiilor și ciupercilor filamentoase. Formularea este adecvată pentru utilizarea în culturi de celule eucariote, medii bacteriene și alte sisteme sensibile la contaminare, sprijinind operațiunile de laborator curate și consecvente.
Aplicație și beneficii Optimizată pentru protocoalele de cercetare de rutină, această soluție este utilizată pe scară largă pentru menținerea condițiilor aseptice în fluxurile de lucru din culturile celulare. Aceasta oferă performanțe fiabile în medii sensibile la contaminare, ajutând cercetătorii să reducă riscul de creștere microbiană excesivă fără a compromite sănătatea celulelor sau reproductibilitatea experimentelor. Formularea filtrată steril elimină necesitatea unor etape suplimentare de solubilizare, susținând pregătirea raționalizată a mediilor și reducând variabilitatea procedurilor zilnice de laborator.
Utilizare și compatibilitate Pentru a obține concentrații de lucru standard, diluați soluția 1:100 în mediul de cultură complet. Produsul este compatibil cu o gamă largă de linii celulare de mamifere și medii bazale. Datorită disponibilității constante a stocurilor, cercetătorii beneficiază de o continuitate fiabilă a aprovizionării și de o planificare logistică simplificată. Soluția trebuie depozitată la ≤ -15 °C și protejată de cicluri repetate de îngheț-dezgheț pentru a menține stabilitatea. Numai pentru utilizare în cercetare. A nu se utiliza în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la om sau la animale.
Volum: 100 ml Depozitare: +2°C până la +8°C Sterilitate: Steril-filtrat
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) este un supliment steril conceput pentru a spori creșterea și viabilitatea celulelor în sistemele de cultură a celulelor de mamifere. Formularea corespunde unui concentrat 100x al aminoacizilor neesențiali care se găsesc în mediul minim esențial (MEM) standard, permițând suplimentarea directă a mediilor bazale cu o pregătire minimă.
Aplicație și beneficii Acest supliment oferă o rezervă suplimentară de aminoacizi pentru celulele cu proliferare rapidă sau pentru liniile celulare care și-au pierdut capacitatea de a sintetiza de novo aminoacizii neesențiali. Prin ușurarea sarcinii metabolice a biosintezei, acesta susține o cinetică de creștere îmbunătățită, o viabilitate prelungită și o mai mare consistență experimentală
- în special în culturile sensibile la nutrienți sau cu densitate ridicată.
Compoziție și utilizare Soluția include glicină, L-alanină, L-asparagină, acid L-aspartic, acid L-glutamic, L-prolină și L-serină. Este compatibilă cu MEM și cu majoritatea mediilor standard. Pentru utilizare, se diluează 1:100 în mediul de cultură final. Acest produs este steril-filtrat și gata de utilizare fără etape suplimentare de manipulare. Numai pentru utilizare în cercetare. Nu se utilizează în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la oameni sau animale.
Accutase este o soluție de detașare celulară gata de utilizare, filtrată steril, concepută ca o alternativă delicată la tripsină/EDTA pentru disocierea celulelor mamifere aderente de pe recipientele standard din plastic pentru culturi tisulare și de pe suprafețele acoperite cu strat de aderență. Aceasta combină activitatea enzimelor proteolitice și colagenolitice într-o soluție salină echilibrată pentru a asigura o disociere eficientă, dar controlată, conservând proteinele de la suprafața celulară și favorizând o viabilitate ridicată după pasare și o reatașare rapidă.
Formula Accutase se bazează pe soluția salină tamponată cu fosfat Dulbecco (DPBS) cu EDTA și roșu de fenol ca indicator vizual al pH-ului. Enzimele sunt de origine non-mamiferă și non-bacteriană, ceea ce face ca Accutase să fie deosebit de potrivit pentru cercetarea celulelor stem, fluxurile de lucru pentru vaccinuri și orice aplicație în care contaminanții de origine animală sau microbiană trebuie minimizați. Soluția se autoinhibă la 37 °C, astfel încât nu este necesar niciun reactiv de neutralizare sau mediu conținând ser după detașare – celulele pot fi transferate direct într-un mediu proaspăt.
Caracteristici cheie
Lichid 1x filtrat steril, gata de utilizare – nu este necesară diluarea sau reconstituirea
Activitate enzimatică proteolitică și colagenolitică combinată pentru o disociere delicată
Fiecare lot este standardizat la o activitate de disociere definită pentru a asigura consistența de la lot la lot
Enzime de origine non-mamiferă și non-bacteriană
Se autoinhibă la 37 °C – nu este necesară o soluție de neutralizare
Formulat în PBS Dulbecco cu EDTA
Roșu de fenol inclus ca indicator vizual al pH-ului
pH 6,8 – 7,8
Aplicații tipice
Accutase disociază ușor o gamă largă de tipuri de celule aderente și sensibile, inclusiv celule stem embrionare umane (hESC), celule stem pluripotente induse umane (iPSC), celule stem neuronale, neuroni primari și linii aderente cultivate în mod obișnuit, precum HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 și A549. Cazuri tipice de utilizare includ:
Subcultivarea și pasarea de rutină a celulelor mamifere aderente
Disocierea delicată a celulelor individuale din hESC, iPSC și alte linii sensibile
Pregătirea probelor pentru citometrie în flux și analiza FACS
Analiza markerilor de suprafață celulară în cazul în care integritatea epitopului este importantă
Testele de migrare, proliferare și apoptoză celulară
Teste de repaus prin privare de ser și studii de transfecție cu oncogene
Teste de migrare a celulelor tumorale și a celulelor creastei neurale
Creșterea producției în fluxurile de lucru ale bioreactorului
Pentru lucrările de rutină, aplicați aproximativ 10 ml de Accutase pe 75 cm2 de suprafață de cultură și incubați timp de 5–10 minute la temperatura camerei. Timpul optim de incubare trebuie determinat pentru fiecare linie celulară și nu trebuie să depășească o oră. Înainte de adăugare, clătiți stratul celular cu o soluție salină fără Ca2+/Mg2+, cum ar fi DPBS fără calciu și magneziu, pentru a îndepărta serul rezidual și cationii bivalenți.
Manipulare și depozitare
Depozitați flaconul nedeschis la -15 °C sau mai jos. Decongelați fie la temperatura camerei, fie peste noapte la +2 °C până la +8 °C. Nu decongelați Accutase într-o baie de apă la 37 °C, deoarece temperaturile ridicate reduc activitatea enzimatică. După decongelare, soluția poate fi păstrată până la 2 luni la +2 °C până la +8 °C; nu depozitați la temperatura camerei. Nu preîncălziți reactivul la 37 °C înainte de aplicare – adăugați-l direct la celulele spălate la temperatura camerei. Pentru o durată de valabilitate îndelungată, se recomandă alicotarea de unică folosință pentru a evita ciclurile repetate de decongelare. Lucrați întotdeauna în condiții aseptice.
Calitate
Fabricat în conformitate cu standarde stricte de calitate. Fiecare lot de Accutase este filtrat steril și testat pentru sterilitate, pH, aspect și activitate de disociere, pentru a asigura performanțe consistente și reproductibile de la un lot la altul.
Specificații
Specificații
Detalii
Tipul produsuluiReactiv de detașare/disociere celulară
FormatLichid filtrat steril, gata de utilizare
Volum100 ml
Concentrație de lucru1x (gata de utilizare)
Activitate enzimaticăProteolitică și colagenolitică combinată
Originea enzimelorNon-mamiferă și non-bacteriană
Sistem tamponPBS Dulbecco cu EDTA
Indicator de pHRoșu de fenol
Interval de pH6,8 – 7,8
AspectSoluție limpede, de culoare roșu pal până la portocaliu
Temperatura de depozitare-15 °C sau mai puțin
Stabilitate după decongelarePână la 2 luni la +2 °C până la +8 °C
Volum recomandat de utilizare~10 ml per 75 cm² suprafață de cultură
Timp tipic de incubare5 – 10 minute la temperatura camerei
Condiții de transportCongelat în gheață carbonică
Utilizare prevăzutăNumai pentru cercetare și producție ulterioară
Formulă (Compoziție pe litru)
Component
Concentrație (mg/L)
Săruri anorganice
Clorură de sodiu (NaCl)8000,00
Hidrogenofosfat disodic (Na2HPO4)1150,00
Clorură de potasiu (KCl)200,00
Dihidrogenofosfat de potasiu (KH2PO4)200,00
Alte componente
EDTA · 4Na (EDTA tetrasodic)220,00
Roșu de fenol3,00
Amestec enzimatic brevetat (activitate proteolitică și colagenolitică)1x
Accutase este o marcă comercială înregistrată a Innovative Cell Technologies, Inc.
Această formulă lichidă, gata de utilizare și filtrată steril, este suplimentată cu soluția salină echilibrată a lui Earle (EBSS), 2 mM L-glutamină, D-glucoză (1,0 g/L) și 2,2 g/L bicarbonat de sodiu (NaHCO3), ceea ce o face potrivită pentru utilizarea într-o atmosferă de incubator cu CO2 controlat (de obicei 5 % CO2). Fenolul roșu inclus acționează ca indicator de pH, permițând monitorizarea vizuală convenabilă a stării mediului în timpul culturii celulare.
Caracteristici cheie
Formulă MEM clasică Eagle cu soluție salină echilibrată Earle (EBSS)
Include 2 mM L-glutamină – gata de utilizare imediată
2,2 g/L bicarbonat de sodiu – tamponat pentru incubare cu 5 % CO2
Cu D-glucoză (1,0 g/L) ca sursă primară de carbon
Cu roșu de fenol ca indicator de pH
Fără HEPES și fără piruvat de sodiu
Mediu lichid filtrat steril, gata de utilizare
pH 7,0 – 7,6
Aplicații tipice
EMEM susține cultivarea unei largi varietăți de linii celulare de mamifere, inclusiv HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 și multe celule primare. Aplicațiile obișnuite includ:
Întreținerea de rutină și extinderea liniilor celulare aderente
Fluxuri de lucru pentru propagarea virusurilor și producția de vaccinuri
Aplicații de citotoxicitate și bioanaliză
Studii de transfecție și expresie proteică
Cercetare fundamentală în biologie celulară și biologie moleculară
Pentru o creștere celulară optimă, EMEM este de obicei suplimentat cu 5–10 % ser fetal bovin (FBS) și, în funcție de linia celulară, cu aminoacizi neesențiali (NEAA) și antibiotice precum penicilina/streptomicina.
Manipulare și depozitare
Depozitați flaconul nedeschis la +2 °C până la +8 °C, ferit de lumină. După deschidere, utilizați în condiții aseptice. L-glutamina din soluție este supusă unei degradări treptate – recomandăm utilizarea mediului în termen de 4 săptămâni de la deschidere pentru performanțe optime sau suplimentarea cu L-glutamină proaspătă înainte de utilizare, dacă este depozitat pentru perioade mai lungi. Lăsați mediul să se încălzească la 37 °C înainte de a-l adăuga la celule.
Calitate
Fabricat în conformitate cu standarde stricte de calitate. Fiecare lot este testat pentru sterilitate, pH, osmolalitate și niveluri de endotoxine pentru a asigura performanțe constante în aplicațiile de cultură celulară.
Specificații
Specificații
Detalii
Tipul produsuluiMEM
Categorie de produsMediu de cultură celulară
FormatLichid
SterilDa
Dimensiune500 ml
L-glutaminăCu L-glutamină (2 mM)
GlucozăCu glucoză (1,0 g/L)
Bicarbonat de sodiuCu NaHCO3 (2,2 g/L)
HEPESFără HEPES
Piruvat de sodiuFără piruvat de sodiu
Roșu de fenolCu roșu de fenol
Soluție salinăSoluție salină echilibrată Earle (EBSS)
pH7,0 – 7,6
Conținut de endotoxineNespecificat
Depozitare+2 °C până la +8 °C
Formulă (Compoziție pe litru)
Componentă
Concentrație (mg/L)
Săruri anorganice
Clorură de calciu · 2H2O265,00
Sulfat de magneziu97,72
Clorură de potasiu400,00
Clorură de sodiu6.800,00
Dihidrogenofosfat de sodiu, anhidru122,00
Bicarbonat de sodiu (NaHCO3)2.200,00
Aminoacizi
L-arginină · HCl126,00
L-cistină · 2HCl31,30
L-Glutamină292,00
L-histidină · HCl · H2O42,00
L-izoleucină52,00
L-leucină52,00
L-lizină · HCl72,50
L-metionină15,00
L-fenilalanină32,00
L-treonină48,00
L-triptofan10,00
L-tirozină · 2Na · 2H2O51,90
L-valină46,00
Vitamine
D-pantotenat de calciu1,00
Clorură de colină1,00
Acid folic1,00
Mio-inozitol2,00
Nicotinamidă1,00
Piridoxal · HCl1,00
Riboflavină0,10
Tiamină · HCl1,00
Alte componente
D(+)-Glucoză1.000,00
Roșu de fenol10,00
Caracteristicile principale ale Freeze Medium CM-1 includ:
Compatibilitate largă: Eficient pentru o gamă largă de tipuri de celule, inclusiv celule primare, celule stem și linii celulare stabilite.
Viabilitate ridicată: Optimizat pentru a maximiza recuperarea și viabilitatea celulelor după dezghețare, asigurând rezultate experimentale fiabile.
Gata de utilizare: Preparate și sterilizate convenabil pentru aplicare imediată, reducând timpul de preparare și riscul de contaminare.
Stabilitate îmbunătățită: Menține performanța constantă în condiții standard de crioconservare, asigurând rezultate reproductibile.
Durată lungă de valabilitate: CM-1 este un mediu de crioconservare care conține ser, gata de utilizare, care poate fi păstrat în frigider timp de până la un an.
Utilizarea CM-1 pentru congelarea celulelor
Pentru a utiliza CM-1 pentru congelarea celulelor aderente și în suspensie, urmați acești pași
Pentru celulele aderente, spălați-le și disociați-le de substratul de cultură. Pentru celulele în suspensie, treceți direct la pasul următor.
Numărați celulele pentru a vă asigura că sunt la concentrația corespunzătoare.
Centrifugați celulele pentru a le granula, apoi resuspendați-le în mediul de congelare CM-1.
Transferați celulele resuspendate în crioale.
Utilizați o metodă de congelare lentă înainte de a transfera celulele pentru depozitare pe termen lung
Metodă
Descriere
Etape
❄️
Înghețarea manuală
O metodă pas cu pas care implică reducerea treptată a temperaturii pentru a asigura viabilitatea celulelor
1️⃣ Puneți celulele în mediu de congelare într-un congelator la 4°C timp de 40 de minute.
2️⃣ Se transferă la un congelator la -80°C timp de 24 de ore.
3️⃣ Depozitați celulele în azot lichid pentru conservare pe termen lung
❄️
Utilizarea Mr. Frosty
Un dispozitiv convenabil care permite ratele de congelare controlate fără energie electrică
1️⃣ Pregătiți celulele în crioale cu mediu de congelare.
2️⃣ Așezați criovialele în recipientul Mr. Frosty.
3️⃣ Păstrați la -80°C timp de 24 de ore înainte de a transfera în azot lichid
❄️
Congelator cu rată controlată
Un congelator de înaltă precizie de la Thermo Fisher sau de la alți producători conceput pentru reducerea controlată a temperaturii
1️⃣ Programați dispozitivul pentru a reduce treptat temperatura.
2️⃣ Introduceți celulele pregătite în congelator.
3️⃣ După ciclul de congelare, transferați celulele în azot lichid
Depozitați criovialele la temperaturi sub -130°C sau în azot lichid pentru conservare pe termen lung.
Ingrediente
Conține FBS, DMSO, glucoză, săruri
Capacitate de tamponare: pH = 7,2 până la 7,6
Mediul de congelare CM-1 de la Cytion oferă o soluție fiabilă pentru crioconservare, asigurând o viabilitate celulară ridicată și funcționalitate post-dezgheț pentru o gamă largă de aplicații de cercetare.
Mediul Ham's F-12K (Kaighn's) este atent formulat pentru a optimiza condițiile de cultură celulară. Acesta are o compoziție îmbogățită, oferind niveluri ridicate de componente esențiale, cum ar fi aminoacizii și piruvatul de sodiu, precum și elemente suplimentare, inclusiv putrescina, timidina, hipoxantina și zincul. Aceste adaosuri permit cercetătorilor să completeze mediul cu ser minim sau cu componente definite pentru anumite tipuri de celule, facilitând condiții experimentale precise.
În special, mediul Ham's F-12K (Kaighn's) nu conține proteine sau factori de creștere. În consecință, suplimentarea cu factori de creștere și ser fetal bovin (FBS) este adesea necesară, permițând cercetătorilor să adapteze mediul la cerințele liniilor lor celulare specifice. Pentru o performanță optimă, concentrația de FBS trebuie să fie atent optimizată pentru fiecare linie celulară, asigurând creșterea și funcționalitatea optime.
Pentru a menține pH-ul fiziologic, mediul Ham's F-12K (Kaighn's) utilizează un sistem tampon de bicarbonat de sodiu (2,5 g/L), necesitând un mediu controlat cu 5-10% CO2 în timpul cultivării. Acest lucru asigură menținerea pH-ului mediului în intervalul ideal pentru creșterea și viabilitatea celulelor
Controlul calității
pH = 7,2 +/
- 0,02 la 20-25°C.
Fiecare lot a fost testat pentru sterilitate și absența micoplasmei și a bacteriilor.
Păstrare
A se păstra la frigider între +2°C și +8°C în întuneric. Înghețarea, precum și încălzirea până la +37°C minimizează calitatea produsului.
Nu încălziți mediul la mai mult de 37°C și nu utilizați surse necontrolabile de căldură (de exemplu, aparate cu microunde).
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, scoateți această cantitate din flacon și încălziți-o la temperatura camerei.
Termenul de valabilitate pentru orice mediu, cu excepția mediului de bază, este de 8 săptămâni de la data fabricării.
Compoziție
Componente
mg/L
Săruri anorganice
Clorură de calciu x 2H2O
135,24
Sulfat de cupru(II) x 5H2O
0,00
Sulfat de fier (II) x 7H2O
0,83
Clorură de magneziu x 6H2O
105,72
Sulfat de magneziu x 7H2O
394,49
Clorură de potasiu
283,29
Dihidrogenfosfat de potasiu
58,52
Clorură de sodiu
7597,20
hidrogenofosfat de di-sodiuanhidru
115,02
Sulfat de zinc x 7H2O
0,14
Alte componente
D(+)-Glucoză anhidră
1260,00
Hipoxantină
4,08
Acid DL-α-Lipoic
0,21
Fenol roșu
3,00
Putrescină x 2HCl
0,32
Pirovat de sodiu
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidină
0,73
Aminoacizi
L-Alanină
17,82
L-arginină x HCl
421,40
L-Asparagină x H2O
30,02
Acid L-aspartic
26,62
L-cisteină x HCl x H2O
70,24
L-Glutamină
292,20
Acid L-glutamic
29,42
Glicină
15,01
L-histidină x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucină
7,87
L-leucină
26,24
L-lizină x HCl
73,04
L-Metionină
8,95
L-fenilalanină
9,91
L-Prolină
69,06
L-serină
21,02
L-Treonină
23,82
L-triptofan
4,08
L-tirozină
10,87
L-Valină
23,42
Vitamine
D(+)-Biotină
0,07
Pantotenat de D-calciu
0,48
Clorură de colină
13,96
Acid folic
1,32
mio-Inositol
18,02
Nicotinamidă
0,04
Piridoxină x HCl
0,06
Riboflavină
0,04
Tiamină x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
Soluția salină tamponată cu fosfat (PBS) este o soluție tampon utilizată pe scară largă în cercetarea biologică și chimică. Aceasta joacă un rol crucial în menținerea echilibrului pH-ului și a osmolarității în timpul diferitelor proceduri experimentale, inclusiv prelucrarea țesuturilor și cultura celulară. Soluția noastră PBS este formulată meticulos cu ingrediente de înaltă puritate pentru a asigura stabilitatea și fiabilitatea în fiecare experiment. Osmolaritatea și concentrațiile de ioni ale soluției noastre PBS le imită îndeaproape pe cele ale corpului uman, făcând-o izotonică și netoxică pentru majoritatea celulelor.
Compoziția soluției noastre PBS
Soluția noastră PBS este un amestec cu pH ajustat de soluții tampon fosfat de calitate ultrapură și soluții saline. La o concentrație de lucru 1X, aceasta conține:
8000 mg/L clorură de sodiu (NaCl)
200 mg/L Clorură de potasiu (KCl)
1150 mg/L Fosfat de sodiu dibazic anhidru (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfat de potasiu monobazic anhidru (KH2PO4)
Această compoziție asigură un pH optim și un echilibru ionic, adecvat pentru o gamă largă de aplicații biologice.
Aplicații ale soluției noastre PBS
Soluția noastră PBS este ideală pentru diverse aplicații în cercetarea biologică. Proprietățile sale izotonice și non-toxice o fac potrivită pentru diluarea substanțelor și clătirea recipientelor pentru celule. Soluțiile PBS care conțin EDTA sunt eficiente pentru desprinderea celulelor atașate și grupate. Cu toate acestea, metalele divalente, cum ar fi zincul, nu trebuie adăugate în PBS, deoarece pot provoca precipitații. În astfel de cazuri, sunt recomandate tampoanele Good. În plus, soluția noastră PBS este o alternativă acceptabilă la mediul de transport viral pentru transportul și depozitarea virușilor ARN, inclusiv SARS-CoV-2.
Controlul calității
Steril-filtrat
Depozitare și termen de valabilitate
A se păstra la +2°C până la +25°C, ferit de lumină.
Odată deschis, depozitați la o temperatură cuprinsă între 2°C și 25°C și utilizați în termen de 24 de luni.
Condiții de transport
Temperatură ambiantă
Întreținere
Păstrați la frigider la +2°C până la +8°C, în întuneric. Evitați înghețarea și încălzirea frecventă la +37°C, deoarece reduce calitatea produsului.
Nu încălziți mediul peste 37°C și nu utilizați surse de căldură necontrolate, cum ar fi aparatele cu microunde.
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, se îndepărtează cantitatea necesară și se încălzește la temperatura camerei înainte de utilizare.
Compoziție
Categoria
Componente
Concentrație (mg/L)
Săruri
Clorură de potasiu
200
Fosfat de potasiu monobazic anhidru
200
Clorură de sodiu
8000
Fosfat de sodiu dibazic anhidru
1150
Inițial conceput pentru a susține creșterea celulelor leucemice umane atât în suspensie, cât și în culturi monocelulare, mediul RPMI 1640 a evoluat prin modificările aduse de cercetători și de furnizorii comerciali, devenind adecvat pentru o gamă variată de celule de mamifere. Este extrem de compatibil cu linii celulare precum HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocite și carcinoame.
Mediul RPMI 1640 se distinge de alte medii de cultură celulară datorită compoziției sale unice. Acesta conține o cantitate substanțială de fosfat, aminoacizi și vitamine. În special, acesta conține biotină, vitamina B12 și PABA, absente din Eagle's Minimal Essential Medium sau Dulbecco's Modified Eagle Medium. În plus, mediul RPMI 1640 prezintă concentrații semnificativ ridicate de vitamine inositol și colină. Cu toate acestea, acesta nu conține proteine, lipide sau factori de creștere. În consecință, suplimentarea cu 10% ser fetal bovin (FBS) este de obicei necesară pentru a oferi condiții optime de creștere celulară.
Sistemul tampon al mediului RPMI 1640 se bazează pe bicarbonat de sodiu și necesită un mediu cu 5-10% CO2 pentru a menține un pH adecvat fiziologic. Includerea agentului reducător glutation distinge și mai mult acest mediu de altele.
Controlul calității
Steril-filtrat
Depozitare și termen de valabilitate
A se păstra la +2°C până la +8°C, ferit de lumină.
Odată deschis, depozitați la 4°C și utilizați în termen de 6-8 săptămâni.
Condiții de transport
Temperatură ambiantă
Întreținere
Păstrați la frigider la +2°C până la +8°C, în întuneric. Evitați înghețarea și încălzirea frecventă la +37°C, deoarece aceasta reduce calitatea produsului.
Nu încălziți mediul peste 37°C și nu utilizați surse de căldură necontrolate, cum ar fi aparatele cu microunde.
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, se îndepărtează cantitatea necesară și se încălzește la temperatura camerei înainte de utilizare.
Compoziție
Categoria
Componente
Concentrație (mg/L)
Aminoacizi
Glicină
10.00
L-Alanil-L-Glutamină
434.40
L-arginină
200.00
L-AsparaginăH2O
56.82
Acid L-Aspartic
20.00
L-cistină 2HCl
65.20
Acid L-glutamic
20.00
L-histidină HClH2O
20.27
L-hidroxi-L-prolină
20.00
L-Isoleucină
50.00
L-leucină
50.00
L-lizină HCl
40.00
L-Metionină
15.00
L-fenilalanină
15.00
L-Prolină
20.00
L-serină
30.00
L-Treonină
20.00
L-triptofan
5.00
L-tirozină 2Na 2H2O
28.83
L-Valină
20.00
Vitamine
acid p-amino benzoic
1.00
D-Biotină
0.20
Clorură de colină
3.00
Pantotenat D-calcic
0.25
Acid folic
1.00
mio-Inositol
35.00
Nicotinamidă
1.00
Piridoxină HCl
1.00
Riboflavină
0.20
Tiamină HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Săruri anorganice
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Alte componente
D-glucoză
2000.00
L-Glutation redus
1.00
Fenol roșu sare de sodiu
5.30
Această formulă unică combină Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) și Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) într-un raport precis de 1:1. Adăugarea de L-glutamină îmbunătățește și mai mult compoziția sa.
DMEM, derivat din mediu esențial minim Eagle (EMEM), oferă o concentrație crescută de aminoacizi și vitamine în comparație cu predecesorul său. În contrast, Ham's F-12 se bazează pe mediul Ham's F-10, oferind un set complementar de componente esențiale.
Pentru a susține creșterea celulară optimă, este o practică obișnuită să se suplimenteze DMEM:Ham's F12 cu FBS la o concentrație tipică de 5-10%. Această adăugare este necesară, deoarece mediul nu conține hormoni de creștere, lipide și proteine esențiale pentru dezvoltarea celulară.
DMEM:Ham's F12 încorporează un sistem tampon de pH și este adesea suplimentat cu roșu de fenol, un indicator de pH. Celulele cultivate în DMEM:Ham's F12 sau în orice mediu care utilizează sistemul tampon de bicarbonat necesită un mediu controlat de CO2 de 5-10% pentru a menține niveluri adecvate de pH.
Controlul calității
Filtrat steril
Depozitare și termen de valabilitate
A se păstra la +2 °C până la +8 °C, ferit de lumină.
Odată deschis, a se păstra la 4 °C și a se utiliza în termen de 6–8 săptămâni.
Condiții de transport
Temperatura ambiantă
Întreținere
A se păstra la frigider la temperaturi cuprinse între +2 °C și +8 °C, la întuneric. A se evita înghețarea și încălzirea frecventă la +37 °C, deoarece acestea reduc calitatea produsului.
Nu încălziți mediul peste 37 °C și nu utilizați surse de căldură necontrolate, cum ar fi aparatele cu microunde.
Dacă se utilizează doar o parte din mediu, scoateți cantitatea necesară și încălziți-o la temperatura camerei înainte de utilizare.
Compoziție
Categorie
Componente
Concentrație (mg/L)
Aminoacizi
Glicină
18,75
L-alanină
4,45
L-arginina HCl
147,50
L-asparagină H₂O
7,50
Acid L-aspartic
6,65
L-cisteină HCl H₂O
17,56
L-cistină 2 HCl
31,29
Acid L-glutamic
7,35
L-glutamină
365,00
L-histidină HCl H₂O
31,48
L-izoleucină
54,47
L-leucină
59,05
L-lizină HCl
91,25
L-metionină
17,24
L-fenilalanină
35,48
L-prolină
17,25
L-serină
26,25
L-treonină
53,45
L-triptofan
9,02
L-tirozină 2 Na 2 H2O
55,79
L-valină
52,85
Vitamine
D-biotină
0,0035
Clorură de colină
8,98
D-pantotenat de calciu
2,24
Acid folic
2,66
Mio-inozitol
12,60
Nicotinamidă
2,02
Piridoxină HCl
0,031
Piridoxal HCl
2,00
Riboflavină
0,219
Clorhidrat de tiamină
2,17
Vitamina B12
0,68
Săruri anorganice
CaCl2 2 H2O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO3)3 9 H2O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl2 6 H2O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na2HPO4
71,02
NaH2PO4 2 H2O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Alte componente
D-glucoză
3151,00
Hipoxantină
2,40
HEPES
3574,50
Acid linoleic
0,042
Acid lipoic
0,105
Sare de sodiu a roșului fenol
8,63
Putrescina 2 HCl
0,081
Piruvat de sodiu
55,00
Timidină
0,365
- 0,02 la 20-25 °C. Fiecare lot a fost testat pentru sterilitate și absența micoplasmei și bacteriilor. Întreținere A se păstra la frigider la +2 °C până la +8 °C, la întuneric. Congelarea și încălzirea până la +37 °C diminuează calitatea produsului. Nu încălziți mediul la peste 37 °C și nu utilizați surse de căldură incontrolabile (de exemplu, aparate cu microunde). Dacă se utilizează doar o parte din mediu, scoateți această cantitate din flacon și încălziți-o la temperatura camerei. Termenul de valabilitate pentru orice mediu, cu excepția mediului de bază, este de 6 până la 8 săptămâni de la data deschiderii. Compoziție Componente mg/L Săruri anorganiceClorură de calciu x 2H2O132,00 Sulfat de magneziu97,67 Clorură de potasiu400 Clorură de sodiu6.460 Hidrogen fosfat disodic (anhidru)504,00 Alte componenteD(+)-Glucoză (anhidră)3.000 Glutation (redus)0,5 Peptone din carne600,00 Sare de sodiu fenol roșu11 AminoaciziL-alanină13,3 L-arginina x HCl42,14 L-asparagină x H2O45,03 Acid L-aspartic19,97 L-Cisteină x HCl x H2O31,75 L-glutamină (stabilă)219,15 Acid L-glutamic22,07 Glicină7,51 L-histidină x HCl x H2O20,96 L-hidroxiprolină19,67 L-izoleucină39,3 L-leucină39,36 L-lizină x HCl36,54 L-metionină14,92 L-fenilalanină16,52 L-Prolină17,27 L-serină26,28 L-treonină17,87 L-triptofan3,06 Sare disodică de L-tirozină26,10 L-valină17,57 VitamineAcid p-aminobenzoic1 Acid ascorbic0,56 D(+)-Biotină0,2 D-pantotenat de calciu0,2 Clorură de colină5 Acid folic10 Mio-inozitol36 Nicotinamidă0,5 Acid nicotinic0,5 Clorhidrat de piridoxal0,5 Clorhidrat de piridoxină0,5 Riboflavină0,2 Tiamină HCl0 Vitamina B122,0
Medium 199 oferă o gamă largă de aplicații în domeniu. Acesta poate menține în mod eficient complexul cumulus-ovocit (COC) și susține maturarea in vitro a ovocitelor. În plus, este utilizat la clătirea liniilor de aspirație în timpul recoltării de ovule de la vacile germane Holstein. În plus, mediul 199 servește ca mediu excelent pentru cultivarea celulelor endoteliale cardiace derivate de la șobolani. Aceste aplicații demonstrează versatilitatea și adaptabilitatea Medium 199 la diverse nevoi experimentale.
Istoric
Dezvoltarea Medium 199 în anii 1950 a marcat un progres semnificativ în mediile de cultură tisulară. Înainte de introducerea sa, multe medii de cultură se bazau pe produse de origine animală și pe extracte de țesuturi. Cu toate acestea, Morgan și colegii săi au revoluționat domeniul prin formularea unei surse nutritive complet definite pentru culturile celulare. Prin experimentele lor care au implicat diferite combinații de vitamine, aminoacizi și alți factori, ei au descoperit proprietățile excepționale de stimulare a creșterii ale Medium 199.
Controlul calității
pH = 7,2 +/
- 0,02 la 20-25°C.
Fiecare lot a fost testat pentru sterilitate și absența micoplasmei și a bacteriilor.
Păstrare
A se păstra la frigider între +2°C și +8°C în întuneric. Înghețarea și încălzirea până la +37° C minimizează calitatea produsului.
Nu încălziți mediul la mai mult de 37° C și nu utilizați surse necontrolabile de căldură (de exemplu, aparate cu microunde).
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, scoateți această cantitate din flacon și încălziți-o la temperatura camerei.
Termenul de valabilitate pentru orice mediu, cu excepția mediului de bază, este de 8 săptămâni de la data fabricării.
Compoziție
Componente
mg/L
Săruri anorganice
Clorură de calciu x 2H2O
264,92
Nitrat de fier (III) x 9H2O
0,72
Sulfat de magneziu
97,67
Clorură de potasiu
400,00
Sodiu acetat x 3H2O
82,95
Clorură de sodiu
6,800.00
Dihidrogenfosfat de sodiu x H2O
140,00
Alte componente
Sulfat de adenină
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Colesterol
0,20
2'-Deoxiriboză
0,50
D(+)-Glucoză anhidră
1,000.00
Glutation (roșu)
0,05
Guanină x HCl
0,30
Hipoxantină
0,30
Fenol roșu
10,00
D-Riboză
0,50
Timină
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xantină
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminoacizi
L-Alanină
25,00
L-arginină x HCl
70,00
Acid L-aspartic
30,00
L-cisteină x HCl x H2O
0,10
L-cistină
20,00
L-Glutamină stabilă
149,00
Acid L-glutamic
67,00
Glicină
50,00
L-histidină x HCl x H2O
21,88
L-hidroxiprolină
10,00
L-Isoleucină
20,00
L-leucină
60,00
L-lizină x HCl
70,00
L-Metionină
15,00
L-fenilalanină
25,00
L-Prolină
40,00
L-serină
25,00
L-Treonină
30,00
L-triptofan
10,00
L-tirozină
40,00
L-Valină
25,00
Vitamine
acid 4-amino benzoic
0,05
Acid ascorbic
0,05
D(+)-Biotină
0,01
Calciferol
0,10
Pantotenat de D-calciu
0,01
Clorură de colină
0,50
Acid folic
0,01
mio-Inositol
0,05
Menadionă
0,01
Acid nicotinic
0.025
Nicotinamidă
0.025
Piridoxal x HCl
0.025
Piridoxol x HCl
0.025
Riboflavină
0,01
DL-α-Tocoferol fosfat sare disodică
0,01
Tiamină x HCl
0,01
Vitamine A acetat
0,14
IMDM este potrivit pentru culturile de celule cu proliferare rapidă și densitate mare, inclusiv celulele Jurkat, COS-7 și macrofage. Diversele modificări ale IMDM disponibile pentru o gamă largă de aplicații de cultură celulară pot fi găsite utilizând instrumentul de selectare a mediilor. Mediile lichide furnizează nutrienți esențiali pentru toate aplicațiile de cultură celulară. Fiecare dintre mediile noastre de cultură celulară de înaltă calitate este fabricat în conformitate cu formula publicată inițial sau cu modificările necesare pentru performanța constantă și stabilitatea mediului de cultură.
IMDM vs. DMEM
IMDM conține nitrat de potasiu în loc de nitrat ferric și HEPES și piruvat de sodiu. Componentele suplimentare din IMDM îl fac mai potrivit decât DMEM pentru tipuri de celule specializate și aplicații specifice.
IMDM vs. RPMI
IMDM și RPMI au formulări diferite care pot fi relevante pentru stimularea cu PMA/ionomicină. O diferență semnificativă este concentrația de Ca2+. În timp ce RPMI conține 0,42 mM Ca2+, IMDM conține 1,49 mM.
Controlul calității
pH = 7,2 +/
- 0,02 la 20-25°C.
Fiecare lot a fost testat pentru sterilitate și absența micoplasmei și a bacteriilor.
Păstrare
A se păstra la frigider la +2°C până la +8°C în întuneric. Înghețarea și încălzirea până la +37° C minimizează calitatea produsului.
Nu încălziți mediul la mai mult de 37° C și nu utilizați surse necontrolabile de căldură (de exemplu, aparate cu microunde).
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, scoateți această cantitate din flacon și încălziți-o la temperatura camerei.
Termenul de valabilitate pentru orice mediu, cu excepția mediului de bază, este de 8 săptămâni de la data fabricării.
Compoziție
Componente
mg/L
Săruri anorganice
Clorură de calciu x 2 H2O
219,00
Clorură de potasiu
330,00
Nitrat de potasiu
0.076
Sulfat de magneziu anhidru
97,73
Clorură de sodiu
4,505.00
Dihidrogenfosfat de sodiu anhidru
109,00
Selenit de sodiu
0,02
Alte componente
D(+)-Glucoză anhidră
4,500.00
HEPES
5,958.00
Piruvat de sodiu
110,00
Fenol roșu
15,00
Aminoacizi
L-Alanină
25,00
L-arginină x HCl
84,00
L-Asparagină x H2O
25,00
Acid L-aspartic
30,00
L-cistină x 2HCl
91,24
L-Glutamină
584,00
Acid L-glutamic
75,00
Glicină
30,00
L-histidină x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucină
104,80
L-leucină
104,80
L-lizină x HCl
146,20
L-Metionină
30,00
L-fenilalanină
66,00
L-Prolină
40,00
L-serină
42,00
L-Treonină
95,20
L-triptofan
16,00
L-tirozină x 2Na
104,20
L-Valină
93,60
Vitamine
D(+)-Biotină
0.013
Pantotenat de D-calciu
4,00
Clorură de colină
4,00
Acid folic
4,00
mio-Inositol
7,20
Mediile de cultură celulară: o prezentare generală
În domeniul științelor vieții, una dintre cele mai importante metodologii este cultura celulară. Prin expresia „cultură celulară” se înțelege prelevarea de celule, țesuturi sau organe de la un animal sau o plantă și implantarea ulterioară a acestor celule, țesuturi sau organe într-un mediu artificial favorabil supraviețuirii și/sau creșterii lor. Cerințele fundamentale de mediu pentru dezvoltarea optimă a celulelor sunt temperatura controlată, un substrat pentru atașarea celulelor, un mediu de creștere adecvat și un incubator care menține pH-ul și osmolalitatea optime. Celulele trebuie să beneficieze de aceste condiții pentru a-și atinge potențialul maxim de creștere.
Alegerea unui mediu de creștere adecvat pentru cultivarea in vitro reprezintă etapa din cultura celulară care este atât cea mai critică, cât și cea mai vitală. Un mediu de creștere, cunoscut și sub denumirea de mediu de cultură, este un lichid sau un gel formulat pentru a stimula dezvoltarea organismelor la scară microscopică, celulară sau vegetală. Mediul utilizat pentru cultivarea celulelor conține adesea o cantitate adecvată de energie și substanțe care controlează ciclul celular. Principalele componente ale unui mediu de cultură includ aminoacizi, vitamine, săruri anorganice, glucoză și ser. Serul este adăugat în mediu deoarece acționează ca sursă de factori de creștere, hormoni și factori de atașare. Pe lângă furnizarea de nutrienți, mediul contribuie, de asemenea, la menținerea nivelurilor de pH și osmolalitate.
Tipuri de medii utilizate în cultura celulară
Atât celulele umane, cât și cele animale pot fi cultivate fie într-un mediu artificial sau sintetic, fie într-un mediu complet natural, suplimentat cu elemente naturale. În continuare, vă vom oferi o prezentare generală a diferitelor tipuri de medii disponibile în prezent.
Mediile naturale
În mediile naturale se găsesc numai fluide biologice care există în starea lor naturală. Mediile naturale sunt foarte utile și ușor de utilizat pentru cultivarea unei largi varietăți de tipuri de celule animale. Lipsa de înțelegere a componentelor precise care alcătuiesc mediile naturale este factorul principal care contribuie la repetabilitatea scăzută a rezultatelor obținute folosind medii naturale.
Mediile artificiale
Prepararea mediilor artificiale sau sintetice implică adăugarea de nutrienți (atât organici, cât și anorganici), proteine serice, carbohidrați, cofactori, vitamine și săruri, precum și fazele gazoase de O₂ și CO₂ [1].
Au fost dezvoltate diverse tipuri de medii artificiale pentru a îndeplini una sau mai multe dintre următoarele funcții: 1) Supraviețuire imediată (o soluție salină echilibrată cu un pH și o presiune osmotică precise). 2) Supraviețuire prelungită (o soluție salină echilibrată suplimentată cu diferite formulări de substanțe chimice organice și/sau ser). 3) Dezvoltare pe termen nedeterminat. 4) Funcții specializate.
Există patru clasificări distincte pentru mediile artificiale:
Mediile care conțin ser
Cel mai frecvent tip de supliment întâlnit în mediile utilizate pentru cultivarea celulelor animale este serul fetal bovin. Acesta este adăugat în mediul de cultură ca supliment cu cost redus, pentru a obține cele mai bune condiții posibile de creștere. Pe lângă rolul său de transportor sau chelator pentru nutrienții instabili sau insolubili în apă, hormoni și factori de creștere, inhibitori de protează și alte substanțe, serul leagă și neutralizează moleculele dăunătoare.
Mediu fără ser
Prezența serului în medii prezintă o serie de dezavantaje și poate cauza erori majore de interpretare în cercetarea imunologică [2, 3]. Au fost create diverse medii fără ser [4, 5]. Aceste medii sunt, în general, formulate special pentru a susține cultivarea unui singur tip de celule, cum ar fi Knockout Serum Replacement și Knockout DMEM de la Thermo Fisher Scientific, precum și mediul mTESR de la Stem Cell Technologies [6], destinat celulelor stem [7].
În plus, aceste medii conțin cantități definite de factori de creștere purificați, lipoproteine și alte proteine, care, în mod obișnuit, sunt furnizate de ser [8]. Aceste medii sunt adesea denumite „medii de cultură definite”, deoarece componentele care le alcătuiesc sunt bine cunoscute.
Mediile definite chimic
Aceste medii includ componente anorganice și organice ultrapure, care nu au fost afectate de niciun fel de contaminare. Ele pot include, de asemenea, adaosuri de proteine pure, cum ar fi factorii de creștere.
Modificarea genetică a bacteriilor sau a drojdiei, împreună cu adăugarea anumitor acizi grași, vitamine, colesterol și aminoacizi, duce la producerea componentelor lor [9].
Mediile fără proteine
Mediile fără proteine sunt cele care nu conțin deloc proteine, ci includ doar elemente neproteice. În comparație cu mediile cu ser adăugat, utilizarea mediilor fără proteine adăugate favorizează o proliferare celulară mai mare și o expresie proteică mai intensă și facilitează purificarea oricărui produs generat într-un proces ulterior [10-12]. Proteinele nu sunt incluse în formulări precum MEM și RPMI-1640. Cu toate acestea, se poate administra un supliment proteic dacă este necesar.
Mediile de cultură și componentele lor de bază
Mediile de cultură comerciale pot fi achiziționate sub formă de pulbere sau lichid și includ adesea o varietate de nutrienți, precum aminoacizi, glucoză, săruri, vitamine și alte suplimente alimentare.
Nevoile de astfel de componente diferă de la o linie celulară la alta, iar aceste variații sunt responsabile pentru numărul mare de formulări diferite ale mediilor. Fiecare componentă îndeplinește o anumită funcție, care va fi prezentată în paragrafele următoare:
Sisteme tampon
Pentru a menține condiții optime de creștere, pH-ul trebuie controlat, ceea ce se realizează adesea prin unul dintre cele două sisteme tampon:
Sistemul tampon natural
Raportul CO₂/H₂CO₃ din atmosferă este egal cu cel din mediu, creând un mecanism natural de tamponare. Pentru a-și păstra mecanismul natural de tamponare, culturile trebuie menținute într-un mediu cu 5-10% CO₂, ceea ce se realizează adesea prin utilizarea unui incubator cu CO₂. Unul dintre cele mai mari avantaje ale utilizării unui tampon natural este faptul că este ieftin și sigur.
HEPES
Tamponarea chimică cu ajutorul zwitterionului HEPES are o capacitate de tamponare mai mare în intervalul de pH 7,2-7,4 și nu necesită un mediu gazos reglat. Pentru anumite tipuri de celule, o doză mai mare de HEPES poate fi dăunătoare. Mediile care conțin HEPES sunt, de asemenea, mult mai sensibile la efectele fototoxice ale luminii fluorescente [13].
Roșu de fenol
Indicatorul de pH roșu de fenol este adesea inclus în mediile de cultură disponibile în comerț, permițând monitorizarea continuă a pH-ului. Pe măsură ce celulele se multiplică, metaboliții produși de acestea determină o modificare a pH-ului și, prin urmare, o schimbare de culoare a mediului. Roșul de fenol are un efect dublu asupra culorii mediului, acesta devenind galben la un pH acid și violet la un pH alcalin. La pH 7,4, valoarea optimă pentru cultura celulară, mediul capătă o nuanță roșie fluorescentă.
Roșul fenolic prezintă însă câteva dezavantaje: în primul rând, acesta este capabil să simuleze acțiunea mai multor hormoni steroizi, în special a estrogenului [14]. Prin urmare, atunci când se studiază celule sensibile la estrogen, cum ar fi țesutul mamar, se recomandă utilizarea unui mediu fără roșu fenolic. Echilibrul sodiu-potasiu este perturbat de prezența roșului de fenol în mai multe formulări fără ser. Adăugarea de ser sau de hormon hipofizar bovin în medii poate contracara acest efect [15]. În al treilea rând, detectarea în experimentele de citometrie în flux este îngreunată de prezența roșului de fenol.
Săruri anorganice
Mediile care conțin săruri anorganice, precum ionii de sodiu, potasiu și calciu, contribuie la menținerea echilibrului osmotic și la reglarea potențialului membranar.
Aminoacizi
Deoarece aminoacizii sunt componentele fundamentale ale proteinelor, aceștia reprezintă o componentă esențială a fiecărui mediu de creștere celulară conceput vreodată. Deoarece celulele nu sunt capabile să producă singure anumiți aminoacizi, este important ca mediul de cultură să includă aminoacizi esențiali. Aceștia sunt necesari pentru proliferarea celulelor, iar concentrația la care sunt prezenți determină densitatea celulară maximă care poate fi atinsă. În special, L-glutamina, un aminoacid esențial, este extrem de importantă.
L-glutamina funcționează ca sursă secundară de energie pentru metabolism și contribuie cu azot la producția de NAD, NADPH și nucleotide. Deoarece L-glutamina este un aminoacid instabil care, în timp, se transformă într-o formă pe care celulele nu o pot utiliza, aceasta trebuie adăugată în mediu.
În plus, aminoacizii neesențiali pot fi adăugați în mediu pentru a reface rezervele celor care au fost consumați pe parcursul procesului de creștere. Creșterea celulelor este stimulată, iar viabilitatea acestora este sporită atunci când mediul de creștere este suplimentat cu aminoacizi neesențiali.
Carbohidrați
Carbohidrații sub formă de zaharuri reprezintă principala sursă de energie. Multe dintre medii includ, pe lângă zaharurile mai comune, precum glucoza și galactoza, și maltoză și fructoză.
Proteine și peptide
Albumina, transferina și fibronectina sunt cele mai frecvent utilizate proteine și peptide. Acestea sunt deosebit de importante în mediile care nu conțin ser. Albumina, transferina, aprotinina, fetuina și fibronectina sunt câteva dintre proteinele care pot fi găsite în ser, acesta fiind o sursă bogată de proteine.
Albumina este principala proteină prezentă în sânge, iar funcția sa este de a lega și transporta diverse substanțe, inclusiv apă, săruri, acizi grași liberi, hormoni și vitamine, între diferite organe și celule. Capacitatea albuminei de a se lega de substanțe chimice o face un candidat eficient pentru eliminarea compușilor nocivi din mediul în care sunt cultivate celulele.
Aprotinina este un agent protector în sistemele de cultură celulară, deoarece este stabilă la pH neutru și acid, precum și rezistentă la temperaturi ridicate și la distrugerea care poate fi cauzată de enzimele proteolitice. Aceasta este capabilă să inhibe o serie de proteaze serinice, inclusiv tripsina, printre altele.
Fetuina este o glicoproteină care poate fi detectată în cantități mai mari în serul animalelor fetale și al nou-născuților, comparativ cu serul adulților. În plus, aceasta acționează ca un inhibitor al proteazelor serinice. Proteina fibronectină este o componentă esențială în procesul de adeziune celulară. Transferina este o proteină care transportă fierul și este responsabilă de livrarea acestuia către membranele celulare.
Acizi grași și lipide
Aceștia joacă un rol crucial în mediul fără ser atunci când serul este absent.
Vitaminele
Numeroase vitamine sunt necesare pentru dezvoltarea și proliferarea celulară. Vitaminele nu pot fi produse în cantități adecvate de către celule și sunt, prin urmare, esențiale în cultura de țesuturi ca suplimente alimentare.
În cultura celulară, serul este sursa principală de vitamine; cu toate acestea, mediile de cultură sunt, de asemenea, tratate cu diverse vitamine pentru a le face adecvate unui tip specific de celule. De obicei, vitaminele din grupa B sunt utilizate pentru stimularea creșterii.
Oligoelemente
Elementele chimice precum cuprul, zincul, seleniul și intermediarii acidului tricarboxilic sunt cunoscuți sub denumirea de oligoelemente. Oligoelementele sunt adesea adăugate în mediile care nu conțin ser, pentru a înlocui elementele care sunt de obicei prezente în ser. Aceste elemente sunt componente chimice importante, necesare pentru o dezvoltare sănătoasă a celulelor. Multe reacții biochimice depind de anumiți micronutrienți, cum ar fi activitatea enzimatică.
Suplimente pentru mediu
Mediul de creștere complet recomandat pentru anumite linii celulare necesită componente suplimentare care lipsesc din mediile de bază și din ser. Aceste suplimente nutriționale susțin creșterea celulară și funcționarea metabolică adecvată.
Deși hormonii, factorii de creștere și moleculele de semnalizare sunt esențiali pentru proliferarea adecvată a anumitor linii celulare, trebuie luate întotdeauna următoarele precauții: întrucât adăugarea de suplimente ar putea modifica osmolalitatea mediului complet de creștere, ceea ce poate inhiba dezvoltarea celulară, este întotdeauna recomandabil să se verifice osmolalitatea după adăugarea suplimentelor. Pentru majoritatea liniilor celulare, osmolalitatea optimă se situează între 260 și 320 mOSM/kg.
Antibiotice
Antibioticele sunt adesea utilizate pentru a inhiba dezvoltarea contaminanților bacterieni și fungici [16], deși nu sunt esențiale pentru creșterea celulară. Deoarece antibioticele pot masca contaminarea cu micoplasme și bacterii rezistente, utilizarea lor de rutină nu este recomandată în culturile celulare [17, 18].
În plus, antibioticele pot perturba metabolismul celulelor hipersensibile. Se utilizează adesea combinațiile de penicilină-streptomicină produse de MilliporeSigma și Life Technologies. Plasmocinul a fost utilizat în cultura liniilor celulare de gliom TS603, TS516 și BT260 [19] și s-a dovedit a fi eficient în eliminarea contaminării cu micoplasmă (20).
Serul
Albuminele, factorii de creștere și inhibitorii de creștere sunt toți prezenți în ser. Serul este una dintre cele mai importante componente ale mediului de cultură celulară, deoarece furnizează aminoacizi, proteine, vitamine (în special vitamine liposolubile precum A, D, E și K), carbohidrați, lipide, hormoni, factori de creștere, minerale și oligoelemente.
Serul provenit de la fetuși și viței este adesea utilizat pentru a favoriza dezvoltarea celulelor cultivate. Serul fetal reprezintă o sursă abundentă de factori de creștere și este adecvat pentru clonarea celulară și dezvoltarea celulelor sensibile. Datorită capacităților sale reduse de stimulare a creșterii, serul de vițel este utilizat în experimentele de inhibare prin contact. Mediile de creștere normale conțin adesea între 2% și 10% ser. Adăugarea de ser în mediul de cultură servește următoarelor scopuri [21]:
-
Serul furnizează nutrienții esențiali pentru celule (atât în soluție, cât și atașați de proteine).
-
Serul conține mai mulți factori de creștere și hormoni implicați în stimularea creșterii și în activitatea celulară specializată.
-
Acesta oferă numeroase proteine de legare, precum albumina și transferina, care transportă alte substanțe chimice în interiorul celulei. De exemplu, albumina transportă grăsimi, vitamine, hormoni etc. în celule.
-
De asemenea, furnizează proteine, precum fibronectina, care sporesc aderența celulară la substrat. În plus, produce elemente de răspândire care ajută la expansiunea celulară înainte de diviziune.
-
Acesta furnizează inhibitori de protează care împiedică proteoliza în celule.
-
De asemenea, conține minerale precum Na+, K+, Zn2+ și Fe2+.
-
Crește vâscozitatea mediului, protejând astfel celulele de leziuni mecanice în timpul agitării culturii în suspensie.
-
De asemenea, acționează ca tampon.
Referințe
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutriția celulelor animale în cultura de țesuturi; studii inițiale privind un mediu sintetic. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Adsorbția rapidă a unei componente a serului fetal de vițel de către celulele mamifere în cultură. O sursă potențială de artefacte în studiile privind antiserurile împotriva antigenilor specifici celulelor. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Adăugarea de ser în mediul utilizat pentru prepararea suspensiilor celulare ca posibilă sursă de artefacte în reacțiile mediate celular studiate prin testul ganglionului limfatic popliteu. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Medii comerciale fără ser: creșterea hibridomelor și producția de anticorpi monoclonali. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Metode pentru creșterea celulelor cultivate în mediu fără ser. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, et al. Chaperonele HSP70 transportă TDP-43 fără ARN în învelișuri sferice lichide intranucleare anizotrope. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. Senescența indusă de sindromul Down perturbă arhitectura nucleară a progenitorilor neuronali. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Înlocuirea completă a serului cu albumină, transferină și lipide din soia în culturi de limfocite B reactive la lipopolizaharide. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Îmbunătățirea sistematică a unui mediu fără proteine, definit chimic, pentru creșterea hibridomelor și producția de anticorpi monoclonali. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Un mediu fără proteine pentru creșterea hibridomelor și a altor celule ale sistemului imunitar. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Cultura celulară fără ser: o abordare unificatoare. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Creșterea clonală a liniilor celulare de hamster chinezesc în medii fără proteine. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analiza efectelor citotoxice ale mediului de cultură conținând HEPES expus la lumină. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Roșul fenolic din mediile de cultură tisulară este un estrogen slab: implicații privind studiul celulelor sensibile la estrogen în cultură. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Dezvoltarea mediilor fără ser. În: Master JRW, editor. Cultura celulelor animale, ediția a 3-a. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Utilizarea antibioticelor în mediile de cultură celulară. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Răspândirea și controlul infecției cu micoplasme în culturile celulare. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Schimbarea mediului și pasarea liniilor celulare. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Demetilaza de histonă KDM6A detectează direct oxigenul pentru a controla cromatina și destinul celular. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, și colab. Eficacitatea Plasmocin™ asupra diverselor linii celulare de mamifere infectate cu mollicute, în comparație cu antibioticele utilizate în mod obișnuit în culturile celulare: o experiență locală. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Aspecte moleculare ale legării ligandului de albumina serică. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53