Celulele COS-1: O forță de muncă celulară în studiile de expresie genică
Linia celulară COS-1 este o celulă de tip fibroblast care provine din țesutul renal al unei maimuțe și este frecvent utilizată de cercetători pentru a studia virusul maimuței, SV40. Aceste celule sunt ușor transfectate și adesea utilizate pentru a crea proteine recombinante pentru diverse experimente biochimice, moleculare și de biologie celulară.
Acest articol va oferi detalii complete despre linia celulară COS-1, acoperind toate informațiile esențiale de care aveți nevoie. În mod specific, veți dobândi cunoștințe despre următoarele:
- Linia celulară COS-1: Origine și informații generale.
- Avantaje și dezavantaje ale celulelor COS-1
- Aplicații de cercetare ale celulelor COS-1
- Celulele COS-1: Publicații
- Resurse pentru linia celulară COS-1, inclusiv protocoale, videoclipuri și altele
- Cultivarea celulelor COS-1
1.linia celulară COS-1: Origine și informații generale.
Înainte de a începe orice activitate cu o linie celulară, este esențial să aveți o înțelegere fundamentală a liniei celulare în sine. Aceasta include informații precum originea celulelor, modul în care acestea au fost izolate și caracteristicile lor. În această secțiune, vom aprofunda elementele de bază ale celulelor COS-1.
Ce este linia celulară COS-1?
Linia celulară COS-1 cuprinde celule de tip fibroblast pe care J.W.F. Cowell și colegii săi le-au creat pentru prima dată în 1981. Aceste celule au fost generate prin transformarea unei linii de celule epiteliale de maimuță verde cunoscută sub numele de CV-1 cu o formă mutantă a virusului simian SV40. Ulterior, linia celulară COS-1 stabilită a fost caracterizată în detaliu pentru a restabili regiunea genomului SV40 care fusese eliminată anterior din originea de replicare. Aceste celule exprimă antigene T mari și alte proteine necesare pentru replicarea corectă a genomurilor circulare, cum ar fi plasmidele.
Celulele COS-1 au o morfologie asemănătoare fibroblastelor și aderă la suprafețe, întinzându-se ca un monocameră. În prezent, nu există variante genetice cunoscute ale liniei celulare COS-1. Cu toate acestea, o linie celulară înrudită COS-7 provine, de asemenea, din celulele CV-1 și prezintă caracteristici similare.
2.avantaje și dezavantaje ale celulelor COS-1
Linia celulară COS-1 are avantaje și limitări unice, pe care le vom discuta mai jos.
Avantaje
- Facilitatea transfecției: Linia celulară COS-1 este ușor de transfectat utilizând diverse metode, inclusiv abordări fizice și chimice.
- Producerea de lentivirusuri: Linia celulară COS-1 este o gazdă de ambalare adecvată pentru producerea de particule de lentivirus recombinant de înaltă calitate fără etape suplimentare de purificare. Aceste celule aderă ferm la suprafețele din plastic, ceea ce previne contaminarea supernatanților de transfecție care conțin particule virale [1].
- Expresia genică: Linia celulară COS-1 este utilizată pe scară largă pentru studii de analiză a expresiei tranzitorii și stabile, producând multe proteine recombinante prin transfecție cu plasmide circulare care conțin originea de replicare SV40 [2].
Limitări
- Linie celulară non-umană: Deoarece celulele COS-1 provin de la primate neumane, proteinele recombinante produse de această linie celulară sunt adecvate numai pentru experimente de laborator și nu pot fi recomandate pentru uz uman.
3.aplicații de cercetare ale celulelor COS-1
Unul dintre cele mai importante considerente atunci când se discută despre o linie celulară este reprezentat de aplicațiile sale în cercetare. Această secțiune va analiza cele mai importante aplicații de cercetare ale celulelor COS-1.
- Producția de proteine recombinante: Linia celulară COS-1 este utilizată pe scară largă pentru producerea de proteine recombinante prin transfecția tranzitorie sau stabilă a vectorilor circulari care conțin originea de replicare SV40. Într-un studiu recent, biologii au utilizat linia celulară COS-1 pentru a produce gonadotropină corionică ecvină, un hormon reproductiv recombinant pentru aplicații reproductive [3]. În mod similar, un alt studiu a utilizat celulele COS-1 pentru a produce un anticorp monoclonal recombinant de tip pui împotriva unui tip specific de virus gripal [4].
- Producerea de particule de tip viral: Celulele COS-1 servesc ca gazde de ambalare pentru producția de lentivirusuri de înaltă calitate și pot fi utilizate pentru generarea de vaccinuri virale. Un studiu a utilizat linia celulară COS-1 pentru a produce particule neinfecțioase, dar foarte imunogene, asemănătoare virusului dengue, care sunt candidați eficienți pentru vaccinuri [5].
4.celule COS-1: Publicații
Unele publicații notabile privind celulele COS-1 sunt:
- Producerea și purificarea de particule asemănătoare virusului Dengue din celule COS-1: Această publicație din Bio-Protocol explică utilizarea celulelor COS-1 pentru producerea de particule foarte imunogene asemănătoare virusului dengue.
- Analiza expresiei gonadotropinei corionice ecvine recombinante în trei sisteme gazdă - E. coli BL21C, lizat celular de insectă Sf și celule de mamifere COS-1: În acest studiu, cercetătorii au comparat producția și modificarea posttraducțională a unui hormon de reproducere recombinant, de exemplu gonadotropina corionică ecvină, în diferite sisteme de expresie, inclusiv celulele de mamifere COS-1.
- Investigarea particulelor de tip Flaviviral transmise de căpușe ca sistem de livrare pentru terapia genică: Acest studiu a utilizat celule COS-1 pentru producerea de particule asemănătoare virusului encefalitei transmise de căpușe (TBEV). Aceste particule sunt propuse ca o navetă pentru transmiterea repliconilor necesari (de exemplu, gene terapeutice).
- Generarea unui anticorp monoclonal recombinant la pui împotriva neuraminidazei virusului gripei aviare H9N2: Acest articol publicat în revista AMB Express a utilizat celule COS-1 pentru a produce anticorpi monoclonali recombinanți chickenized împotriva neuraminidazei virusului gripei aviare de tip H9N2.
- Solubilizarea fără detergent a canalelor Kv umane exprimate în celule de mamifere: În acest studiu, linia celulară de mamifere COS-1 a fost utilizată pentru a exprima canale Kv umane în vederea efectuării unor experimente de solubilizare.
5.resurse pentru linia celulară COS-1, inclusiv protocoale, videoclipuri și multe altele
Protocoale de cultură celulară
- Cultura de celule COS-1: Acest link conține informații valoroase despre divizarea, înghețarea și decongelarea celulelor COS-1.
- Celule COS-1: Acest link conține informații de bază despre linia celulară COS-1.
Protocoale de transfecție
Iată câteva surse care descriu metoda de transfecție pentru celulele COS-1.
- Transfecția tranzitorie a celulelor COS-1: Acest document cuprinde un protocol pentru transfecția tranzitorie a liniei celulare COS-1.
Videoclipuri referitoare la linia celulară COS-1
Următoarele resurse video pot ajuta la obținerea de informații generale privind cultivarea, întreținerea și transfecția celulelor COS-1.
- Transmiterea celulelor: Acest videoclip discută practicile de cultură de bază pentru liniile celulare de mamifere.
- Congelarea celulelor aderente: Acest videoclip conține informații pentru înghețarea liniilor de celule aderente.
- Protocol de transfecție: Acest videoclip prezintă o procedură de transfectare a celulelor de mamifere.
6.cultivarea celulelor COS-1
|
Caracteristică |
Informații |
|
Timp de dublare |
Aproximativ 48 de ore |
|
Adherente sau în suspensie |
Aderentă crește sub formă de monocameră pe suprafața flaconului de cultură |
|
Densitatea de însămânțare |
2 până la 4 x 10^4 celule/cm²; celulele aderente sunt spălate cu 1x PBS, tratate cu Accutase, centrifugate, resuspendate și distribuite într-un nou balon |
|
Mediu de creștere |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) cu 10% FBS; mediul trebuie înlocuit de 2 până la 3 ori pe săptămână |
|
Condiții de creștere (temperatură, CO2) |
Necesită un incubator umidificat cu 5% CO2 și o temperatură de 37°C |
|
Conservare |
Sub temperatura de -150°C în faza de vapori a azotului lichid |
|
Procesul și mediul de congelare |
O metodă de congelare lentă, cu o scădere a temperaturii de numai 1 °C, folosind medii CM-1 sau CM-ACF |
|
Procesul de decongelare |
Decongelarea celulelor congelate prin incubarea acestora într-o baie de apă la 37 °C timp de 40-60 de secunde cu agitare rapidă. Centrifugați celulele pentru a elimina mediul de congelare, resuspendați granula și distribuiți-o într-un balon de cultură cu mediu proaspăt. Aderența durează aproximativ 24 de ore. |
|
Nivelul de biosecuritate |
Se recomandă nivelul 1 de biosecuritate pentru manipularea celulelor COS-1 |
Sperăm că acest articol a furnizat o cantitate suficientă de informații pentru a vă ajuta să începeți să lucrați cu celule COS-1. Vă rugăm să comandați de la noi dacă doriți să utilizați această linie celulară pentru studiul dumneavoastră de cercetare.
Referințe
- Smith, S.L. și T. Shioda, Advantages of COS-1 monkey kidney epithelial cells as packaging host for small-volume production of high-quality recombinant lentiviruses. Journal of virological methods, 2009. 157(1): p. 47-54.
- MacKenzie, C.J. și T. Shioda, COS-1Cells as Packaging Host for Production of Lentiviruses. Protocoale actuale în biologia celulară, 2011. 50(1): p. 26.7. 1-26.7. 15.
- Bhardwaj, A., și colab., Analiza expresiei gonadotropinei corionice ecvine recombinante în trei sisteme gazdă: E. coli BL21C, lisat celular de insecte Sf și celule de mamifere COS-1. Indian Journal of Animal Research, 2021. 55(1): p. 40-45.
- Wang, F., et al., Generarea unui anticorp monoclonal recombinant de pui împotriva neuraminidazei virusului gripei aviare H9N2. AMB Express, 2020. 10: p. 1-7.
- Galula, J.U., G.-J.J. Chang și D.-Y. Chao, Producția și purificarea de particule asemănătoare virusului Dengue din celulele COS-1. Bio-protocol, 2019. 9(12): p. e3280-e3280.

