Linha celular RAW 264.7 na investigação sobre macrófagos e imunologia

A linha celular RAW 264.7 constitui um modelo in vitro robusto para macrófagos murinos, fundamental no domínio da investigação imunológica. Originárias de um rato BALB/c macho, estas células foram transformadas pelo vírus da leucemia murina de Abelson, resultando numa linha celular semelhante aos macrófagos. Devido à sua estabilidade funcional e à capacidade inerente de realizar tanto a fagocitose como a pinocitose, as células RAW 264.7 são essenciais para o estudo das interações hospedeiro-patógeno, tornando-as uma pedra angular nos esforços de investigação imunológica [1,2].

Características morfológicas e comportamento de crescimento

Após análise, as células RAW 264.7 apresentam um crescimento semi-aderente, com tendência para formar tanto células aderentes fusiformes como células viáveis esféricas flutuantes, com um diâmetro celular que varia entre 10 e 20 µm. Esta natureza polimórfica e a adaptabilidade às condições de cultura tornam as células RAW 264.7 uma ferramenta versátil para manipulação e observação experimentais.

Função imunológica e apresentação de antigénios

Enquanto células apresentadoras de antigénios, as células RAW 264.7 desempenham um papel fundamental no sistema imunitário. A sua função vai além do simples reconhecimento de agentes patogénicos, estendendo-se ao processamento e à apresentação de antigénios às células T, orquestrando assim uma resposta imunitária abrangente. Esta dinâmica facilita uma compreensão mais profunda de como o sistema imunitário identifica e neutraliza entidades estranhas.

Polarização dos macrófagos: o paradigma M0, M1 e M2

As células RAW 264.7, no seu estado basal como macrófagos M0, possuem a notável capacidade de se polarizarem para o fenótipo M1 pró-inflamatório ou para o fenótipo M2 anti-inflamatório. Esta capacidade de polarização proporciona aos investigadores um modelo para estudar as influências e os efeitos de várias citocinas e fatores ambientais na função dos macrófagos e nas respostas imunitárias [3,4].

Osteoclastogénese e remodelação óssea

Embora não sejam propriamente osteoclastos, as células RAW 264.7 têm sido fundamentais no estudo da osteoclastogénese — o processo de formação dos osteoclastos. Estas células facilitam a exploração da expressão génica osteoclástica e da sua capacidade de resposta à ativação dos recetores. Esta investigação tem implicações profundas para a compreensão da fisiopatologia de condições como a osteoporose, em que a remodelação óssea desregulada é uma característica marcante.

Vantagens e desvantagens das células RAW 264.7

Vantagens

• Fácil cultivo: A linha celular RAW 264.7 é fácil de cultivar e manter em laboratório, sem requisitos complicados.
• Bem caracterizada: A RAW 264.7 é uma linha celular bem caracterizada, o que significa que possui características fenotípicas e funcionais estáveis.
• Modelo in vitro de macrófagos: Como as células RAW 264.7 são macrófagos, apresentam funções essenciais próprias dos macrófagos, tais como a fagocitose e a pinocitose. Por isso, são frequentemente utilizadas como modelo in vitro de macrófagos.
• Diferenciação em osteoclastos: As células RAW 264.7 podem ser diferenciadas em osteoclastos utilizando fatores moleculares específicos. Estas células diferenciadas são capazes de realizar a remodelação óssea, à semelhança dos osteoclastos.

Desvantagens

• Representação insuficiente dos macrófagos primários: Sendo uma linha celular transformada, a RAW 264.7 pode não representar com precisão as características dos macrófagos primários e pode apresentar algumas diferenças na expressão génica, no fenótipo e na função.
• Limitações na triagem de fármacos: as células RAW 264.7 podem não ser adequadas para todos os tipos de ensaios de triagem de fármacos, e as suas respostas a alguns fármacos podem diferir das dos macrófagos primários.
• Forte adesão celular: As células RAW 264.7 aderem fortemente à superfície do frasco de cultura e, por vezes, podem ser difíceis de descolar.

Aplicações das células RAW 264.7 na simulação de macrófagos e em estudos imunológicos

Modelização de respostas imunológicas celulares

A linha celular RAW 264.7, que reflete as funcionalidades dos macrófagos autênticos, é um modelo fundamental para a investigação das respostas celulares a agentes patogénicos e estímulos imunológicos. Um estudo que destacou este aspeto avaliou os efeitos imunomoduladores e antioxidantes de bactérias do ácido láctico inativadas pelo calor nestas células, proporcionando descobertas significativas na regulação do sistema imunitário [5 ].

A complementar isto, uma investigação realizada em 2019 elucidou o impacto imunológico da exposição das células RAW 264.7 a polissacarídeos da planta Polygonatum sibiricum. O estudo concluiu que estes compostos desencadeiam uma resposta imunitária através da ativação das vias de sinalização NF-κB/MAPK, proporcionando uma compreensão molecular aprofundada [6].

Exploração da osteoclastogénese

Funcionando como um modelo para estudos de diferenciação de osteoclastos, as células RAW 264.7 contribuem para a elucidação do comportamento dos osteoclastos e das vias de diferenciação. Tais investigações ampliam o nosso conhecimento sobre os mecanismos de reabsorção óssea e a patogénese da osteoporose. São frequentemente utilizadas técnicas avançadas de imagiologia para monitorizar alterações intracelulares e analisar o metabolismo do heme no interior destas células.

Obtenção de conhecimentos moleculares sobre a osteoclastogénese

Apesar do seu papel principal como modelo de macrófagos, as células RAW 264.7 também são utilizadas na investigação in vitro da osteoclastogénese. Ao induzir características semelhantes às dos osteoclastos nestas células, os investigadores obtêm uma compreensão do processo de diferenciação e do comportamento pré-osteoclástico, embora seja crucial ter em conta as características inerentes à linha celular e a sua origem nestes estudos.

Triagem da bioatividade de produtos naturais

A triagem da bioatividade em produtos naturais é outra aplicação em que as células RAW 264.7 se destacam. Por exemplo, a sua utilização num estudo coreano que investigou as propriedades imunoestimulantes de uma mistura de ervas demonstrou a eficácia da linha celular na identificação de compostos bioativos em substâncias naturais [7 ].

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Publicações científicas que utilizam células RAW 264.7

Existem muitas publicações de investigação disponíveis sobre a linha celular de macrófagos de ratinho RAW 264.7:

• Os polissacarídeos de Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induzem uma resposta imunitária na linha celular RAW 264.7 através da via NF-κB/MAPK: Este estudo propôs que os polissacarídeos obtidos da planta Polygonatum sibiricum podem desencadear uma resposta imunitária na linha celular de macrófagos de ratinho RAW 264.7 através da regulação da cascata de sinalização NF-κB/MAPK.
• Efeitos imunomoduladores do extrato de Tinospora crispa e dos seus principais compostos nas funções imunitárias dos macrófagos RAW 264.7: Este artigo, publicado na revista International Immunopharmacology, descreve que o extrato da planta Tinospora crispa e os seus principais constituintes têm um efeito imunomodulador e imunoestimulador na linha celular de macrófagos RAW 264.7.
• As bactérias lácticas inativadas pelo calor inibem a produção de óxido nítrico através da óxido nítrico sintase induzível e da ciclooxigenase-2 nas células RAW 264.7: Este estudo propôs que as bactérias do ácido láctico inativadas pelo calor podem potencialmente ser utilizadas na síntese de produtos probióticos, uma vez que possuem propriedades imunomoduladoras e antioxidantes. Os investigadores utilizaram células RAW 264.7 para estudar estas atividades biológicas.
• Efeito de uma formulação à base de ervas no reforço da resposta imunitária em macrófagos RAW 264.7: Este estudo utilizou células RAW 264.7 para estudar o efeito imunoestimulador de uma formulação à base de ervas denominada KM1608. O estudo sugeriu a KM1608 como um potencial agente de reforço da resposta imunitária.
• Uma análise de plantas utilizadas na medicina tradicional colombiana revelou o potencial anti-inflamatório dos cálices de Physalis angulata: Este artigo, publicado no Saudi Journal of Biological Sciences, investigou o potencial anti-inflamatório de 10 plantas tradicionais colombianas de uso comum, utilizando células RAW 264.7 estimuladas com LPS.

Células RAW 264.7: Recursos, protocolos, vídeos e muito mais

As células RAW 264.7 são frequentemente utilizadas em estudos de transfecção. Os recursos seguintes explicam diferentes métodos de transfecção utilizados para a linha celular RAW 264.7.

• Transfecção de células RAW 264.7: Este site fornece um protocolo para a transfecção de macrófagos RAW 264.7 utilizando um reagente de lipofectamina.
• Protocolo de transfecção: Este artigo publicado descreve um protocolo detalhado para a transfecção de células RAW 264.7.
• Método de transfecção eficiente para células RAW 264.7: Este documento descreve outra abordagem prática de transfecção utilizando células RAW 264.7.

Vídeos relacionados com a linha celular RAW 264.7

• Cultura de células RAW 264.7: Este vídeo explica o protocolo de passagem de células RAW 264.7.
• Método de transfecção: Este vídeo trata da transfecção de células RAW 264.7 com um gene repórter.

Perguntas frequentes essenciais sobre a linha celular RAW 264.7: perspetivas sobre a mimetização de macrófagos e a investigação sobre a osteoclastogénese

Referências

1. Taciak, B., et al., Avaliação da estabilidade fenotípica e funcional da linha celular RAW 264.7 através de passagens em série. PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
2. Wang, S., et al., Os macrófagos inflamatórios interrompem a maturação e a mineralização dos osteócitos através da regulação da via de sinalização Notch. Molecular Medicine, 2022. 28(1): p. 102.
3. Orekhov, A.N., et al., Diferenciação de monócitos e polarização de macrófagos. Vessel Plus, 2019. 3: p. 10.
4. Khabipov, A., et al., Polarização de macrófagos RAW 264.7 por células de cancro do pâncreas – um modelo para o estudo de macrófagos promotores de tumores. Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
5. Kang, C.-H., et al., As bactérias do ácido láctico inativadas pelo calor inibem a produção de óxido nítrico através da óxido nítrico sintase induzível e da ciclooxigenase-2 nas células RAW 264.7. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
6. Zhang, J., et al., Os polissacarídeos de Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induzem uma resposta imunitária na linha celular RAW264.7 através de uma via NF-κB/MAPK. RSC Advances, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
7. Trinh, T.A., et al., Efeito de uma formulação à base de ervas no reforço da resposta imunitária nos macrófagos RAW 264.7. Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.