Células P19 - Investigação sobre o carcinoma embrionário utilizando células P19
A P19 é uma linha celular de carcinoma embrionário murino. É amplamente utilizada na investigação biomédica, principalmente para o estudo da biologia do desenvolvimento, da biologia das células estaminais, da diferenciação celular e da triagem de fármacos. Como as células P19 possuem capacidade de diferenciação, podem ser úteis na investigação de processos biológicos complexos, tais como a formação de tecidos e o desenvolvimento embrionário precoce. Neste artigo, iremos abordar os fundamentos das células P19 derivadas de ratos.
- Meio de crescimento
- Meio DMEM/Ham's F12 contendo 5% de soro fetal bovino, 3,1 g/L de glicose, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio, 15 mM de HEPES e 1,2 g/L de NaHCO₃ é utilizado para cultivar células P19.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação relatado para a linha celular P19 é de aproximadamente 2 a 3 dias.
- Tipo de crescimento
- A linha celular de carcinoma embrionário P19 é aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomendar P19
- Características gerais e origem das células P19
- Informações sobre o cultivo das células P19
- Linha celular P19: vantagens e desvantagens
- Aplicações de investigação das células P19
- Adquira hoje a sua linha celular P19
- Células P19: Publicações de investigação
- Recursos para a linha celular P19: protocolos, vídeos e muito mais
- Explorar a linha celular P19: Perguntas frequentes
- Referências
- Perguntas frequentes
Características gerais e origem das células P19
É essencial conhecer as características gerais e a origem de uma linha celular antes de começar a trabalhar com ela. Esta secção abordará o seguinte: O que é a linha celular P19? Qual é o tamanho da célula P19? Qual é a origem das células P19?
- A P19 é um tipo de células de carcinoma embrionário pluripotentes, originalmente obtidas a partir de um teratocarcinoma desenvolvido num rato C3H/He. A linha celular foi estabelecida pela primeira vez em 1982 por McBurney e Rogers.
- As células P19 podem crescer continuamente num meio de cultura suplementado com soro. Podem ser diferenciadas noutros tipos de células quando expostas a fármacos não tóxicos, tais como o ácido retinóico e o dimetilsulfóxido (DMSO) [1].
- Estas células de carcinoma de rato apresentam uma morfologia de tipo epitelial.
- A linha celular P19 apresenta um cariótipo masculino euploide (n=40; XY).
Informações sobre a cultura de células P19
A linha celular P19 é amplamente cultivada em laboratórios de investigação devido às suas características únicas. A sua cultura é fácil e simples de gerir. Esta secção apresenta todas as informações essenciais de que necessita para manter e desenvolver uma cultura de células P19. Iremos abordar: Qual é o tempo de duplicação das células P19? Como se cultiva a linha celular P19? A P19 é uma linha celular aderente?
Pontos-chave para a cultura de células P19
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação relatado para a linha celular P19 é de aproximadamente 2 a 3 dias.
Adesiva ou em suspensão:
A linha celular de carcinoma embrionário P19 é aderente.
Rácio de subcultura:
As células P19 devem ser subcultivadas a cada 48 horas, devendo ser mantida uma proporção de divisão de 1:10 para estas células. As células aderentes são lavadas com solução salina tamponada com fosfato 1X e incubadas com Accutase até que as células se dissociem. As células são adicionadas ao meio de cultura e colhidas por centrifugação. As células recolhidas são cuidadosamente ressuspensas e distribuídas por novos frascos.
Meio de crescimento:
Meio DMEM/Ham’s F12 contendo 5% de soro fetal bovino, 3,1 g/L de glicose, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio, 15 mM de HEPES e 1,2 g/L de NaHCO₃ é utilizado para a cultura de células P19.
Condições de crescimento:
É essencial uma incubadora humidificada, regulada para 37 °C com um fornecimento de 5% de CO₂, para o crescimento e a cultura da linha celular de carcinoma embrionário P19.
Armazenamento:
Os frascos de células P19 congeladas devem ser armazenados a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador ou na fase de vapor de azoto líquido, para manter a viabilidade das células a longo prazo.
Processo de congelação e meio:
Podem ser utilizados os meios CM-1 ou CM-ACF para congelar as células P19, utilizando um método de congelação lenta que protege as células de qualquer choque e preserva a sua viabilidade.
Processo de descongelação:
As células P19 congeladas podem ser descongeladas num banho-maria a 37 °C, agitando rapidamente o frasco durante 40 a 60 segundos. Adiciona-se meio fresco às células e estas são centrifugadas para remover os elementos do meio de congelação. O sedimento celular é novamente ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco para crescimento.
Nível de biossegurança:
São necessárias instalações laboratoriais de nível de biossegurança 1 para a linha celular P19.
Linha celular P19: Vantagens e desvantagens
Esta secção irá abordar as vantagens e desvantagens da linha celular P19.
Vantagens
- Potencial de diferenciação: As células P19 podem diferenciar-se em vários tipos celulares, incluindo cardiomiócitos, neurónios e células microgliais. Para a diferenciação, requerem fármacos não tóxicos, tais como o ácido retinóico e o dimetilsulfóxido (DMSO). O ácido retinóico induz o desenvolvimento de neurónios, microglia e astrócitos, enquanto o DMSO inicia o desenvolvimento de cardiomiócitos com batimento cardíaco e células do músculo liso. Assim, as células P19 são úteis no estudo da diferenciação celular e dos processos de desenvolvimento.
- Sistema modelo: A linha celular pluripotente de carcinoma embrionário P19 constitui um modelo valioso para o estudo do desenvolvimento embrionário precoce. Os investigadores utilizam as células P19 para elucidar as vias de sinalização celular e os mecanismos celulares e moleculares envolvidos nestes processos.
Desvantagens
- Origem murina: A P19 é uma linha celular de carcinoma embrionário murino. Consequentemente, os resultados de estudos que utilizam estas células podem não ser totalmente aplicáveis à biologia e aos processos humanos.
Aplicações de investigação das células P19
As células P19 têm várias aplicações de investigação devido à sua capacidade de diferenciação e relevância para a biologia do desenvolvimento e a investigação com células estaminais. Algumas das aplicações de investigação importantes das células de carcinoma embrionário P19 incluem:
- Estudos de diferenciação celular: Como sabemos, as células P19 podem diferenciar-se em neurónios, células microgliais, células musculares lisas e cardiomiócitos; por isso, são amplamente utilizadas para estudar os processos de diferenciação celular. Além disso, ajudam a investigar o desenvolvimento neural e cardíaco e os mecanismos subjacentes. Um estudo realizado em 2018 descobriu que as espécies reativas de oxigénio (ROS) orientam a diferenciação das células P19 em tipos celulares específicos e impedem a indução de outros [3]. Outro estudo explorou o processo de diferenciação neural mediado pelo ácido retinóico e constatou o envolvimento da via de sinalização PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia do desenvolvimento: as células P19 constituem um modelo inestimável para o estudo do desenvolvimento embrionário precoce. Ajudam os investigadores a compreender processos biológicos complexos, tais como a formação de tecidos durante o desenvolvimento embrionário. A investigação utilizou células P19 e estudou os fatores moleculares que contribuem para a formação da comunicação interventricular (VSD). Os resultados revelaram que um ARN não codificante longo, o SNHG6, contribui para a VSD ao regular negativamente o miRNA-101 e ativar a via Wnt/β-catenina [5].
- Testes de fármacos: A linha celular de carcinoma embrionário de ratinho P19 também é utilizada para a triagem de potenciais candidatos a fármacos. Um estudo utilizou neurónios derivados de células P19 diferenciadas e investigou os efeitos neuroprotetores inibidores da acetilcolinesterase da L-Dopa sintética e do extrato aquoso de sementes de Mucuna pruriens. Os resultados mostraram que o extrato vegetal apresentou resultados promissores em comparação com a L-Dopa [6].
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Células P19: Publicações de investigação
Esta secção do artigo abordará algumas publicações de investigação interessantes sobre as células P19.
Este artigo foi publicado na revista «Oncology Reports» em 2017. O estudo propôs que as hormonas sexuais hipofisárias impulsionam a adesão, a proliferação e a migração das linhas celulares de teratocarcinoma, incluindo as células P19.
Esta publicação na revista Experimental & Molecular Medicine (2018) utilizou células P19 e estudou a função do ARN não codificante longo uc.4. Os resultados revelaram que o uc.4 afeta a diferenciação celular através da modulação da via de sinalização do TGF-beta.
Este artigo de investigação foi publicado em 2018 no «Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine». O estudo constatou que o extrato natural de tecido cerebral e a cultura celular 3D podem acelerar a diferenciação das células de carcinoma embrionário P19 em células neurais.
Este estudo foi publicado no Journal of Ethnopharmacology em 2020. O estudo sugeriu que o extrato de folhas de Cichorium intybus L. pode induzir a diferenciação das células do carcinoma embrionário P19 em células β pancreáticas produtoras de insulina.
Esta investigação foi publicada na revista «Molecules» (2022). Este estudo explorou os efeitos neuroprotetores e inibidores da acetilcolinesterase do extrato de sementes de Mucuna pruriens em neurónios da linha celular P19.
Recursos para a linha celular P19: protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos sobre as células P19.
- Protocolo de diferenciação neuronal das células P19: Este artigo contém o protocolo de diferenciação neuronal das células P19 e outras informações úteis sobre a diferenciação destas células.
- Transfecção de células P19: Esta ligação irá ajudá-lo a conhecer o protocolo de transfecção das células P19.
A ligação seguinte contém o protocolo de cultura das células P19.
- Células P19: Este site contém todas as informações úteis sobre a linha celular P19, incluindo as suas condições de cultura, meios de cultura para as células P19, divisão celular e muito mais.
Explorar a linha celular P19: Perguntas frequentes
Referências
- McBurney, M.W., Células de carcinoma embrionário P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., Linha celular de carcinoma embrionário P19: um modelo para estudar as interações gene-ambiente. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey e G. Rödel, «As ROS mitocondriais orientam a diferenciação das células P19 pluripotentes murinas». Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., O ácido retinóico todo-trans induz a diferenciação das células P19 em neurónios envolvidos na via de sinalização PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., O ARN não codificante longo SNHG6 contribui para a formação de comunicação interventricular através da regulação negativa do miR-101 e da ativação da via Wnt/β-catenina. Die Pharmazie — Revista Internacional de Ciências Farmacêuticas, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., O extrato aquoso de sementes de Mucuna pruriens apresentou melhores efeitos neuroprotetores e inibidores da acetilcolinesterase em comparação com a L-dopa sintética. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.