Linha celular Neuro-2a
A Neuro-2a é uma linha celular neural derivada de ratinho amplamente utilizada na investigação em neurociência. Estas células são utilizadas principalmente para estudar o desenvolvimento neural, a diferenciação, a neurotoxicidade, as vias de sinalização celular e o crescimento axonal. Além disso, são utilizadas para fins de desenvolvimento e triagem de fármacos.
Este artigo centra-se em aspetos importantes das células de neuroblastoma Neuro-2a que o poderão ajudar antes de iniciar o trabalho com elas. Abordará principalmente:
- Características gerais e origem das células Neuro-2a
- Informações sobre a cultura da linha celular Neuro-2a
- Vantagens e desvantagens da linha celular Neuro-2a
- Aplicações de investigação da linha celular Neuro-2a
- Publicações de investigação que abordam as células Neuro-2a
- Recursos para as células Neuro-2a: protocolos, vídeos e muito mais
Características gerais e origem das células Neuro-2a
Esta parte do artigo abordará o contexto e as características básicas da linha celular Neuro-2a que é essencial conhecer antes de trabalhar com ela. Aqui, irá aprender: O que é a linha celular Neuro-2a? Qual é a origem da linha celular Neuro-2a ? O que é a diferenciação celular das células Neuro-2a? Qual é o tamanho de uma célula Neuro-2a? Qual é a morfologia das células Neuro-2a?
- As células Neuro-2a tiveram origem num tumor espontâneo (neuroblastoma) de um rato albino (linha A). A linha celular foi estabelecida por R.J. Klebe e F.H. Ruddle.
- As células de neuroblastoma Neuro-2a apresentam uma morfologia de células estaminais neuronais e amebóides.
- O tamanho das células Neuro-2a é de 12 micrómetros de altura [1].
- O número de cromossomas das células Neuro-2a pode variar entre 59 e 193, com um número modal de 95. O cariótipo destas células de neuroblastoma é instável, variando entre 94 e 98 cromossomas.
Informações sobre o cultivo da linha celular Neuro-2a
As células Neuro-2a são amplamente utilizadas em laboratórios de investigação em neurociência. Antes de trabalhar com estas células, deve familiarizar-se com as informações essenciais sobre cultura celular mencionadas abaixo. Isto poderá ajudá-lo a facilitar o processo. Ficará a saber: O que é um meio de cultura celular Neuro-2a ? Como se cultivam as células Neuro-2a? Qual é o tempo de duplicação das células Neuro-2a? Qual é a densidade de sementeira das Neuro-2a ? Qual é o protocolo de cultura das células Neuro-2a? Quais são os meios de cultura das células Neuro-2a?
Pontos-chave para a cultura de células Neuro-2a
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células Neuro-2a é de aproximadamente 70 horas.
Adesivas ou em suspensão:
A Neuro-2a é uma linha celular aderente.
Densidade de siembra:
A densidade de sementeira celular otimizada para a linha celular Neuro-2a é de 1 x 10⁴ células/cm². Para a sementeira, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato, isenta de magnésio e cálcio (1x). Posteriormente, é adicionada uma solução de passagem (Accutase) e as células são incubadas durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Após a dissociação celular, é adicionado meio fresco e as células são centrifugadas. O sedimento celular recolhido é cuidadosamente ressuspenso e as células são transferidas para um recipiente de cultura para crescimento.
Meio de crescimento:
Utiliza-se EMEM para a cultura de células Neuro-2a. Contém 10% de FBS, 2 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃, EBSS, 1 mM de piruvato de sódio e NEAA para um crescimento celular ideal. O meio deve ser substituído 1 a 2 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As culturas de Neuro-2a são mantidas numa incubadora humidificada a 37 °C, ligada a um fornecimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
As células devem ser armazenadas a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa ou na fase de vapor de azoto líquido para armazenamento a longo prazo.
Processo de congelação e meio:
Utilizam-se os meios CM-1 ou CM-ACF para congelar as células Neuro-2a. As células são congeladas através de um processo de congelação lenta que permite apenas uma descida de 1 °C por minuto. Isto protege as células do choque térmico e mantém a sua viabilidade.
Processo de descongelação:
Para descongelar as culturas congeladas, o frasco é colocado num banho-maria a 37 °C durante 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. Em seguida, adiciona-se meio de cultura e as células são submetidas a centrifugação. Esta etapa ajuda a remover os componentes do meio de congelação. O sedimento celular é então ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco cheio de meio de cultura. Posteriormente, as células são colocadas numa incubadora a 37 °C durante um mínimo de 24 horas.
Nível de biossegurança:
É obrigatório que o manuseamento e a manutenção das culturas de Neuro-2a sejam realizados em laboratórios com nível de biossegurança 1.
- Vantagens e desvantagens da linha celular Neuro-2a
- Aplicações de investigação da linha celular Neuro-2a
- Informações sobre o cultivo da linha celular Neuro-2a
- Características gerais e origem das células Neuro-2a
- 5. Publicações de investigação que incluem as células Neuro-2a
- Recursos para as células Neuro-2a: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Vantagens e desvantagens da linha celular Neuro-2a
As células Neuro-2a apresentam algumas vantagens e desvantagens que as distinguem de outras linhas celulares neuronais. Aqui estão listados alguns prós e contras notáveis destas células.
Vantagens
As vantagens da linha celular de neuroblastoma murino Neuro-2a são:
-
Fácil de manter:
A linha celular Neuro-2a não está associada a procedimentos complexos ou intrincados de cultura celular. São fáceis de cultivar e manter em laboratórios de investigação.
-
Modelo de célula neuronal in vitro:
A Neuro-2a é um modelo de célula neuronal prático, amplamente utilizado por investigadores em estudos sobre o desenvolvimento e a diferenciação dos neurónios.
Desvantagens
As desvantagens das células Neuro-2a são:
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Origem murina:
As células Neuro-2a são de origem murina, pelo que os investigadores devem ter cuidado ao extrapolar resultados de estudos baseados em ratos para a saúde e as doenças humanas, uma vez que a biologia dos ratos e dos seres humanos pode diferir significativamente.
Aplicações de investigação da linha celular Neuro-2a
As células Neuro-2a oferecem muitas aplicações no campo da investigação em neurociência. Apresentam-se aqui algumas utilizações promissoras desta linha celular:
- Desenvolvimento neural: A Neuro-2a é um modelo de célula neuronal in vitro amplamente utilizado para estudar o desenvolvimento neuronal e processos relacionados, tais como a diferenciação, o crescimento axonal e a formação de sinapses. Um estudo realizado em 2020 utilizou células Neuro-2a para explorar o papel do microRNA-124 na diferenciação de células neuronais induzida pelo ácido retinóico [2]. Outro estudo investigou a expressão do recetor gama do ácido retinóico (RARG) e do miRNA-124 na linha celular de neuroblastoma (N2A). Este estudo propôs que o RARG é alvo do miR-124 e suprime o crescimento dos neuritos [3].
- Neurotoxicidade: As células Neuro-2a também são utilizadas para avaliar os efeitos tóxicos de fármacos, produtos químicos ou fatores ambientais nas células neurais. Por exemplo, um estudo conduzido por Zhihong Yin e colegas investigou a neurotoxicidade do bisfenol A (BPA), um produto químico ambiental, utilizando células Neuro-2a. Observaram que o BPA reprime a diferenciação e a proliferação das células neuronais, ao perturbar a sua integridade celular e sináptica [4].
- Triagem de fármacos: As células Neuro-2a são igualmente utilizadas para avaliar as atividades terapêuticas de vários fármacos, compostos e produtos naturais. Por exemplo, um estudo utilizou células Neuro-2a para analisar o potencial antioxidante do extrato da planta Ginkgo biloba. Além disso, a investigação sugeriu que este extrato provoca uma diminuição da agregação de Aβ e pode constituir um potencial tratamento para a doença de Alzheimer [5].
5. Publicações científicas que abordam as células Neuro-2a
Aqui estão alguns artigos de investigação interessantes que abordam a linha celular Neuro-2a.
Este estudo, publicado no *Journal of Natural Medicines* em 2018, investigou os efeitos terapêuticos das alcamidas isoladas da pimenta branca (P. nigrum) nas células neuronais Neuro-2a.
Esta investigação, publicada na revista *Acta Biochimica et Biophysica Sinica* em 2020, propôs que o gene Nkx2.1 desempenha um papel importante no desenvolvimento do cérebro de ratos, regulando a cascata de sinalização Shh.
Este artigo, publicado na revista «Toxicology and Industrial Health» (2023), propôs que o bisfenol A, uma substância química ambiental, desencadeia neurotoxicidade nas células neuro-2a e perturba a sua função sináptica e citoesquelética.
Este artigo, publicado na revista «Pharmaceuticals» (2021), propôs que um fármaco, a hexarelina, modula as cascatas PI3K/AKT e MAPK em células de neuroblastoma (Neuro-2a) e inibe a apoptose das células Neuro-2a induzida pelo peróxido de hidrogénio.
Este artigo de investigação publicado na revista «Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine» (2021) propôs que o extrato de frutos de Emblica officinalis suprime a neuroinflamação nas células Neuro-2a e, por conseguinte, pode ser benéfico para doenças neuroinflamatórias.
Recursos para as células Neuro-2a: protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se os recursos online disponíveis sobre as células Neuro-2a. Incluem o protocolo de cultura e transfecção das células Neuro-2a.
- Protocolo de transfecção de Neuro-2a: A Neuro-2a é um hospedeiro adequado para transfecção. Esta ligação irá orientá-lo relativamente ao protocolo de transfecção desta linha celular. A eficiência da transfecção da Neuro-2a varia de reagente para reagente.
A ligação seguinte contém o protocolo de cultura de células Neuro-2a.
- Protocolo de cultura celular Neuro-2a: Esta ligação irá ajudá-lo a conhecer o protocolo de subcultura das células Neuro-2a.
- Células Neuro-2a: O site contém informações abrangentes sobre os meios de cultura das células Neuro-2a, a densidade de sementeamento e os protocolos para subcultura e manuseamento de culturas criopreservadas e proliferativas.
Referências
- Lulevich, V., et al., A mecânica de células individuais proporciona um meio sensível e quantitativo para investigar as interações entre o péptido beta-amilóide e as células neuronais. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., Papel do miR-124 na regulação da diferenciação das células Neuro-2A induzida pelo ácido retinóico. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., O recetor gama do ácido retinóico é alvo do microRNA-124 e inibe o crescimento dos neuritos. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., A exposição ao bisfenol A induziu neurotoxicidade e está associada às sinapses e ao citoesqueleto nas células Neuro-2A. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., O extrato de Ginkgo biloba (EGb) inibe o stress oxidativo em células Neuro-2A que sobreexpressam APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.