Células NCI-H1299: Investigação e implicações clínicas das células de cancro do pulmão NCI-H1299

Informações sobre a cultura

Manter uma cultura de linha celular não é fácil até se conhecerem todas as informações essenciais sobre a mesma, incluindo: Qual é o tempo de duplicação da NCI-H1299? Qual é a densidade de sementeira da NCI-H1299? Qual é o meio de cultura das células NCI-H1299? Como se cultivam as linhas celulares NCI-H1299? Esta secção irá ajudá-lo a descobrir as respostas a todas estas perguntas sobre o cultivo de células NCI-H1299.

Pontos-chave para a cultura de células NCI-H1299

Tempo de duplicação:

O tempo de duplicação do NCI-H1299 varia entre 22 e 30 horas.

Adesivas ou em suspensão:

A NCI-H1299 é uma linha celular aderente.

Proporção de subcultivo:

As células NCI-H1299 são subcultivadas numa proporção recomendada de 1:3 a 1:6. Para a sementeira, as células aderentes são lavadas com PBS 1x e incubadas com solução de passagem Accutase durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. As células desprendidas são adicionadas a meios de cultura frescos e centrifugadas. O sedimento celular é então ressuspenso e as células são transferidas para novos frascos contendo meio de crescimento.

Meio de crescimento:

O RPM1 1640 é um meio ideal para as células NCI-H1299. É suplementado com 10% de soro fetal bovino, 4500 mg/L de glicose, 2,0 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio, 1500 mg/L de NaHCO₃ e 10 mM de HEPES. O meio deve ser renovado 2 a 3 vezes por semana.

Condições de crescimento:

As culturas de células de cancro do pulmão NCI-H1299 são mantidas numa incubadora humidificada a 37 °C com um fornecimento de 5% de CO₂.

Armazenamento:

A linha celular NCI-H1299 pode ser armazenada na fase de vapor de azoto líquido ou em congeladores de temperatura ultrabaixa a temperaturas inferiores a -150 °C a longo prazo.

Processo de congelação e meio:

O CM-1 ou o CM-ACF são meios de congelação para as células NCI-H1299. As células são congeladas através de um processo de congelação lenta que permite apenas uma diminuição de 1 grau na temperatura por minuto, de forma a proteger a viabilidade celular.

Processo de descongelação:

As células NCI-H1299 congeladas são agitadas rapidamente num banho-maria pré-aquecido a 37 graus Celsius durante 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. Às células descongeladas é adicionado meio fresco, podendo ser cultivadas diretamente em novos frascos ou centrifugadas. No primeiro caso, o meio deve ser substituído após 24 horas de incubação. A centrifugação ajuda a remover os componentes do meio de congelação. Posteriormente, as células colhidas são ressuspensas em meio fresco e transferidas para o novo frasco para cultura.

Nível de biossegurança:

É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear a cultura celular NCI-H1299.

Adquira a linha celular NCI-H1299: ferramentas de investigação de alta qualidade para o estudo da biologia do cancro do pulmão

Vantagens e desvantagens das células NCI-H1299

Tal como outras linhas celulares cancerígenas humanas, a NCI-H1299 também possui algumas características distintivas associadas a vantagens e desvantagens específicas. A seguir, resumimos algumas das mais significativas.

Vantagens

As principais vantagens da linha celular NCI-H1299 de cancro do pulmão de células não pequenas são:

• Modelo in vitro de cancro do pulmão

  As linhas celulares NCI-H1299 foram desenvolvidas a partir de metástases nos gânglios linfáticos de um carcinoma pulmonar e, por isso, apresentam propriedades relativamente semelhantes. Assim, estas células podem servir como modelo in vitro para investigar a biologia do cancro do pulmão, os mecanismos celulares e moleculares, bem como para selecionar e testar potenciais terapêuticas.

• Fácil de cultivar

  As células NCI-H1299 são fáceis de cultivar e manter num laboratório de investigação. Não existem requisitos nem procedimentos complexos para a cultura celular.

• Mutações P53 e KRAS nas células NCI-H1299

  As células NCI-H1299 não apresentam expressão do gene p53, o que permite que as células proliferem vigorosamente. Além disso, possuem uma mutação no gene KRAS que contribui para o crescimento, a proliferação, a invasão e a migração celular. Tendo isto em conta, os investigadores utilizam as células H1299 para investigar mecanismos moleculares relevantes para as mutações nos genes KRAS e p53.

Desvantagens

As desvantagens das células NCI-H1299 são:

• Especificidade tecidular

  As células NCI-H1299 têm origem no tecido pulmonar. Por conseguinte, a sua aplicabilidade limita-se, na sua maioria, à investigação do carcinoma pulmonar. Podem não representar plenamente a heterogeneidade e as características gerais de outros tipos de cancro.

Aplicações de investigação das células NCI-H1299

A linha celular NCI-H1299 é amplamente utilizada na investigação do cancro do pulmão. Mencionam-se aqui algumas aplicações promissoras desta linha celular.

• Biologia do cancro: as células NCI-H1299 constituem uma excelente ferramenta de investigação para estudar o desenvolvimento e a progressão do cancro, bem como os mecanismos celulares e moleculares associados. Estas células apresentam determinadas mutações, permitindo aos investigadores explorar comportamentos das células cancerosas, vias de sinalização e perfis de expressão génica relacionados. Vários estudos utilizaram a linha celular NCI-H1299 de carcinoma pulmonar de células não pequenas para estudar a biologia do cancro do pulmão. Por exemplo, um estudo realizado em 2018 investigou a via de sinalização envolvida na apoptose das células cancerígenas do pulmão utilizando células NCI-H1299. Os investigadores descobriram que a via PI3K/AKT contribui para a proliferação celular e que a sua inibição pode causar a morte das células cancerosas [1]. Da mesma forma, outro estudo investigou os mecanismos envolvidos na transição epitelial-mesenquimal (EMT) da linha NCI-H1299. Este estudo propôs que uma proteína extracelular, a SPARC (proteína secretada ácida e rica em cisteína), contribui para a EMT e a migração das células NCI-H1299, promovendo assim a tumorigénese nessas células — a proteína SPARC atua como mediadora da sinalização do TGF-β1 [2]. 

• Descoberta e triagem de fármacos: a NCI-H1299, uma linha celular de cancro do pulmão humano, é amplamente utilizada para avaliar a toxicidade e a eficácia de potenciais fármacos. Além disso, é utilizada por investigadores para estudar o mecanismo de ação de fármacos antitumorais. Estudos também utilizaram estas células para identificar possíveis alvos farmacológicos e mecanismos de resistência. Por exemplo, uma investigação conduzida por Xiao-Yun Shen e colegas analisou o potencial anticancerígeno do composto natural bruceína D (BD). Os resultados revelaram que a BD inibe significativamente a proliferação, a invasão e a migração das células NCI-H1299. Por conseguinte, pode ser considerada uma potencial terapia adjuvante para o tratamento do carcinoma pulmonar de células não pequenas [3]. De forma semelhante, um estudo avaliou os efeitos citotóxicos do xantohumol, isoladamente e em combinação com o fármaco quimioterapêutico cisplatina, nas células de cancro do pulmão NCI-H1299 [4].

Perguntas frequentes sobre a linha celular NCI-H1299

Referências

1. Gu, J., et al., Estudo da apoptose induzida pelo EGCG em células de cancro do pulmão através da inibição da via de sinalização PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
2. Sun, W., et al., A SPARC atua como mediadora do TGF-β1 na promoção da transição epitelial-mesenquimal em células de cancro do pulmão A549 e H1299. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
3. Shen, X.-Y., et al., Um estudo sobre o mecanismo de ação da bruceína D no tratamento de células H1299 de cancro do pulmão de células não pequenas. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
4. Long, B., et al., Efeitos citotóxicos do xantohumol e da sua combinação com a cisplatina em células H1299 de cancro do pulmão metastático humano. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.