P19 Cellen - Embryonaal carcinoom onderzoek met P19 cellen
P19 is een muriene embryonale carcinoom cellijn. Het wordt veel gebruikt in biomedisch onderzoek, voornamelijk voor het bestuderen van ontwikkelingsbiologie, stamcelbiologie, celdifferentiatie en het screenen van medicijnen. Omdat P19 cellen differentiatievermogen hebben, kunnen ze nuttig zijn bij het onderzoeken van complexe biologische processen zoals weefselvorming en vroege embryonale ontwikkeling. In dit artikel bespreken we de basisprincipes van muisafgeleide P19 cellen.
Algemene kenmerken en oorsprong van P19 cellen
Kennis over de algemene eigenschappen en oorsprong van een cellijn is essentieel voordat je ermee aan de slag gaat. In dit gedeelte wordt het volgende behandeld: Wat is een P19 cellijn? Wat is de grootte van de P19 cel? Wat is de oorsprong van P19 cellen?
- P19 is een soort pluripotente embryonale carcinoomcellen die oorspronkelijk verkregen zijn uit teratocarcinoom dat ontwikkeld is in een C3H/He muis. De cellijn werd voor het eerst vastgesteld in 1982 door McBurney en Rogers.
- P19 cellen kunnen continu groeien in een kweekmedium met serum. Ze kunnen worden gedifferentieerd in andere celtypen wanneer ze worden blootgesteld aan niet-giftige geneesmiddelen zoals retinoïnezuur en dimethylsulfoxide (DMSO) [1].
- Deze muiscarcinoomcellen hebben een epitheliale morfologie.
- De P19 cellijn heeft een euploïd mannelijk karyotype (n=40; XY).
Informatie over het kweken van P19 cellen
De P19 cellijn wordt veel gekweekt in onderzoekslaboratoria vanwege zijn unieke eigenschappen. Het kweken ervan is eenvoudig en beheersbaar. Deze sectie bevat alle belangrijke informatie die je nodig hebt om een P19 celkweek te onderhouden en te kweken. We zullen het weten: Wat is de verdubbelingstijd van P19 cellen? Hoe kweek je een P19 cellijn? Is P19 een adherente cellijn?
Belangrijke punten voor het kweken van P19 cellen
|
Verdubbelingstijd: |
De verdubbelingstijd van de P19 cellijn is ongeveer 2 tot 3 dagen. |
|
Aanhangend of in suspensie: |
P19 embryonaal carcinoom cellijn is adherent. |
|
Subcultuur verhouding: |
P19-cellen moeten om de 48 uur worden gesubcultiveerd en voor deze cellen moet een splitratio van 1:10 worden aangehouden. Adherente cellen worden gewassen met 1 X fosfaatbuffer zoutoplossing en geïncubeerd met Accutase totdat de cellen dissociëren. De cellen worden toegevoegd met kweekmedia en geoogst door middel van centrifugeren. De verzamelde cellen worden voorzichtig geresuspendeerd en in nieuwe kolven gedistribueerd. |
|
Groeimedium: |
DMEM/Ham's F12 media met 5% foetaal runderserum, 3,1 g/L glucose, 1,6 mM L-glutamine, 1,0 mM natriumpyruvaat, 15 mM HEPES en 1,2 g/L NaHCO3 wordt gebruikt om P19 cellen te kweken. |
|
Groeicondities: |
Een vochtige incubator ingesteld op 37°C met een 5% CO2 toevoer is essentieel voor het groeien en kweken van de P19 embryonale carcinoom cellijn. |
|
Opslag: |
Bevroren P19-celflacons moeten worden bewaard bij een temperatuur van minder dan -150°C in een vriezer of de dampfase van vloeibare stikstof om de levensvatbaarheid van de cellen op de langere termijn te behouden. |
|
Invriesproces en medium: |
CM-1 of CM-ACF media kunnen worden gebruikt om P19 cellen in te vriezen met behulp van een langzame invriesmethode die de cellen beschermt tegen schokken en hun levensvatbaarheid behoudt. |
|
Ontdooiproces: |
Bevroren P19 cellen kunnen worden ontdooid in een waterbad van 37°C door een flacon snel te schudden gedurende 40 tot 60 seconden. De cellen worden toegevoegd met verse media en gecentrifugeerd om bevroren media-elementen te verwijderen. Het celpallet wordt opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden in de nieuwe kolf gegoten om te groeien. |
|
Bioveiligheidsniveau: |
Biosafety level 1 laboratoriuminstellingen zijn vereist voor de P19 cellijn. |
P19-cellijn: Voordelen en nadelen
In dit gedeelte worden de voor- en nadelen van de P19 cellijn besproken.
Voordelen
- Differentiatiepotentieel: P19 cellen kunnen differentiëren in verschillende celtypes, waaronder cardiomyocyten, neuronen en microgliale cellen. Ze hebben niet-giftige medicijnen nodig voor differentiatie, zoals retinoïnezuur en dimethylsulfoxide (DMSO). Retinoïnezuur induceert de ontwikkeling van neuronen, microglia en astroglia, terwijl DMSO de ontwikkeling van kloppende cardiomyocyten en gladde spiercellen initieert. P19 cellen zijn dus nuttig bij het bestuderen van celdifferentiatie en ontwikkelingsprocessen
- Modelsysteem: De pluripotente embryonale carcinoomcellijn P19 is een waardevol model voor het bestuderen van de vroege embryonale ontwikkeling. Onderzoekers gebruiken P19 cellen om celsignaalroutes en de cellulaire en moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij deze processen op te helderen
Nadelen
- Muriene oorsprong: P19 is een muriene embryonale carcinoom cellijn. Bijgevolg kunnen de bevindingen van studies met deze cellen niet volledig worden vertaald naar de menselijke biologie en processen
Onderzoekstoepassingen van P19 cellen
P19 cellen hebben verschillende onderzoekstoepassingen vanwege hun differentiatievermogen en relevantie voor ontwikkelingsbiologie en stamcelonderzoek. Enkele belangrijke onderzoekstoepassingen van P19 embryonale carcinoomcellen zijn:
- Celdifferentiatiestudies: Zoals we weten kunnen P19 cellen differentiëren in neuronen, microglialen, gladde spiercellen en cardiomyocyten; ze worden dus veel gebruikt om celdifferentiatieprocessen te bestuderen. Daarnaast helpt het onderzoek naar neurale en cardiale ontwikkeling en onderliggende mechanismen. Uit een onderzoek dat in 2018 werd uitgevoerd, bleek dat reactieve zuurstofsoorten (ROS) de differentiatie van P19-cellen in specifieke celtypen sturen en de inductie van andere voorkomen [3]. Een andere studie onderzocht het retinoïnezuur-gemedieerde neurale differentiatieproces en vond de betrokkenheid van de PI3K/Akt/GSK3β-signaleringsroute [4].
- Ontwikkelingsbiologie: P19 cellen zijn een model van onschatbare waarde voor het bestuderen van de vroege embryonale ontwikkeling. Ze helpen onderzoekers om complexe biologische processen te begrijpen, zoals weefselvorming tijdens de embryonale ontwikkeling. Het onderzoek gebruikte P19-cellen en bestudeerde de moleculaire factoren die bijdragen aan de vorming van ventrikelseptumdefecten (VSD). De bevindingen onthulden dat een lang niet-coderend RNA SNHG6 bijdraagt aan VSD door miRNA-101 negatief te reguleren en de Wnt/β-cateninepathway te activeren [5].
- Geneesmiddelenonderzoek: De P19 embryonale carcinoom cellijn van de muis wordt ook gebruikt om potentiële kandidaat-geneesmiddelen te screenen. Een onderzoek gebruikte gedifferentieerde P19 celneuronen en onderzocht de neuroprotectieve acetylcholinesteraseremmende effecten van synthetisch L-Dopa en waterig extract van Mucuna pruriens zaad. De resultaten toonden aan dat het plantenextract veelbelovende resultaten liet zien in vergelijking met L-Dopa [6].
Koop uw P19-cellijn vandaag nog
P19-cellen: Publicaties
In dit artikel worden enkele interessante onderzoekspublicaties met betrekking tot P19 cellen besproken.
Dit artikel werd in 2017 gepubliceerd in Oncology Reports. De studie stelde voor dat hypofyse-seksuele hormonen de adhesie, proliferatie en migratie van teratocarcinoomcellijnen aansturen, waaronder P19-cellen.
Het lang niet-coderende RNA uc. 4 beïnvloedt celdifferentiatie via de TGF-beta signaalroute
Deze publicatie in het tijdschrift Experimental & Molecular Medicine (2018) gebruikte P19-cellen en bestudeerde de functie van lang niet-coderend RNA uc.4. De bevindingen onthulden dat uc.4 celdifferentiatie beïnvloedt via modulatie van de TGF-bèta signaalroute.
Dit onderzoeksartikel werd in 2018 gepubliceerd in het Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Uit het onderzoek bleek dat natuurlijk hersenweefselextract en 3D-celkweek de differentiatie van P19 embryonale carcinoomcellen naar neurale cellen kan versnellen.
Deze studie werd in 2020 gepubliceerd in het Journal of Ethnopharmacology. Het onderzoek stelde dat Cichorium intybus L. bladextract differentiatie in P19 embryonale carcinoomcellen kan induceren tot insulineproducerende pancreatische β-cellen.
Dit onderzoek werd gepubliceerd in Molecules (2022). Deze studie onderzocht de neuroprotectieve en acetylcholinesterase remmende effecten van Mucuna pruriens zaadextract op P19 celneuronen.
Bronnen voor P19 cellijn: Protocollen, video's en meer
Hieronder volgen enkele bronnen over P19 cellen.
- P19 cellen neuronale differentiatie protocol: Dit artikel bevat P19 cellen neuronale differentiatie protocol en andere nuttige informatie over P19 cel differentiatie.
- P19 cellen transfectie: Deze link helpt je bij het leren van het P19 cel transfectie protocol.
De volgende link bevat de p19 celcultuur protocol.
- P19 cellen: Deze website bevat alle nuttige informatie over de P19 cellijn, met inbegrip van de cultuur voorwaarde, P19 cel media, celsplitsing, en nog veel meer.
De P19-cellijn verkennen: Veelgestelde vragen
Referenties
- McBurney, M.W., P19 embryonale carcinoomcellen. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 embryonale carcinoomcellijn: Een model om gen-omgevingsinteracties te bestuderen. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey, and G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinoïdezuur induceert de differentiatie van P19-cellen in neuronen die betrokken zijn bij de PI3K/Akt/GSK3β-signaleringsroute. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Lang niet-coderend RNA SNHG6 draagt bij aan de vorming van ventrikelseptaaldefecten via negatieve regulatie van miR-101 en activering van de Wnt/β-cateninepathway. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens seed aqueous extract improved neuroprotective and acetylcholinesterase inhibitory effects compared with synthetic L-dopa. Moleculen, 2022. 27(10): p. 3131.