Accutase-oplossing voor het losmaken van cellen met EDTA en fenolrood – 100 ml

Accutase is een gebruiksklare, steriel gefilterde celafhechtingsoplossing die is ontworpen als een zacht alternatief voor trypsine/EDTA voor het losmaken van hechtende zoogdiercellen van standaard plastic weefselkweekmateriaal en met adhesie gecoate oppervlakken. Het combineert proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit in een uitgebalanceerde zoutoplossing om een effectieve maar gecontroleerde dissociatie te bieden, waarbij eiwitten op het celoppervlak behouden blijven en een hoge levensvatbaarheid na passage en snelle herhechting worden ondersteund.

De Accutase-formule is gebaseerd op Dulbecco's fosfaatgebufferde zoutoplossing (DPBS) met EDTA en fenolrood als visuele pH-indicator. De enzymen zijn van niet-zoogdierlijke en niet-bacteriële oorsprong, waardoor Accutase bijzonder geschikt is voor stamcelonderzoek, vaccinworkflows en elke toepassing waarbij verontreinigingen van dierlijke of microbiële oorsprong tot een minimum moeten worden beperkt. De oplossing remt zichzelf bij 37 °C, zodat er na het losmaken geen neutraliserend reagens of serumhoudend medium nodig is – cellen kunnen direct in vers medium worden overgebracht.

Belangrijkste kenmerken

Kant-en-klare 1x steriel gefilterde vloeistof – verdunning of reconstitutie is niet nodig
Gecombineerde proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit voor zachte dissociatie
Elke batch is gestandaardiseerd op een gedefinieerde dissociatieactiviteit voor consistentie tussen de verschillende partijen
Enzymen van niet-zoogdierlijke en niet-bacteriële oorsprong
Auto-inhibitie bij 37 °C – geen neutraliserende oplossing nodig
Geformuleerd in Dulbecco’s PBS met EDTA
Fenolrood toegevoegd als visuele pH-indicator
pH 6,8 – 7,8


Typische toepassingen
Accutase dissocieert op milde wijze een breed scala aan hechtende en gevoelige celtypen, waaronder menselijke embryonale stamcellen (hESCs), menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs), neurale stamcellen, primaire neuronen en routinematig gekweekte hechtende lijnen zoals HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 en A549. Typische toepassingen zijn onder meer:

Routinematige subcultuur en passage van hechtende zoogdiercellen
Zachte dissociatie van afzonderlijke cellen van hESC's, iPSC's en andere gevoelige lijnen
Monstervoorbereiding voor flowcytometrie en FACS-analyse
Analyse van celoppervlaktemarkers waarbij de integriteit van het epitoop van belang is
Testen op celmigratie, proliferatie en apoptose
Rusttoestandtesten door serumuitputting en oncogeentransfectiestudies
Migratietests voor tumorcellen en neurale crestcellen
Opschaling van de productie in bioreactor-workflows

Voor routinewerkzaamheden brengt u ongeveer 10 ml Accutase per 75 cm2 kweekoppervlak aan en incubeert u dit gedurende 5–10 minuten bij kamertemperatuur. De optimale incubatietijd moet voor elke cellijn worden bepaald en mag niet langer zijn dan een uur. Spoel de cellaag vóór toevoeging af met een Ca2+/Mg2+-vrije zoutoplossing, zoals DPBS zonder calcium en magnesium, om restserum en tweewaardige kationen te verwijderen.

Behandeling en opslag
Bewaar de ongeopende fles ingevroren bij -15 °C of lager. Ontdooi bij kamertemperatuur of 's nachts bij +2 °C tot +8 °C. Ontdooi Accutase niet in een waterbad van 37 °C, aangezien verhoogde temperaturen de enzymactiviteit verminderen. Na ontdooien kan de oplossing maximaal 2 maanden worden bewaard bij +2 °C tot +8 °C; bewaar niet bij kamertemperatuur. Verwarm het reagens niet voor op 37 °C vóór gebruik – voeg het direct toe aan gewassen cellen bij kamertemperatuur. Voor een lange houdbaarheid wordt het verdelen in porties voor eenmalig gebruik aanbevolen om herhaalde ontdooicycli te voorkomen. Werk altijd onder aseptische omstandigheden.

Kwaliteit
Vervaardigd volgens strenge kwaliteitsnormen. Elke batch Accutase wordt steriel gefilterd en getest op steriliteit, pH, uiterlijk en dissociatieactiviteit om consistente, reproduceerbare prestaties van batch tot batch te garanderen.

Productspecificaties



Specificatie
Details



ProducttypeReagens voor celafhechting / dissociatie
FormaatSteriel gefilterde vloeistof, gebruiksklaar
Inhoud100 ml
Werkconcentratie1x (gebruiksklaar)
EnzymactiviteitGecombineerd proteolytisch en collagenolytisch
EnzymherkomstNiet-zoogdier en niet-bacterieel
BuffersysteemDulbecco’s PBS met EDTA
pH-indicatorFenolrood
pH-bereik6,8 – 7,8
UiterlijkHeldere, lichtrode tot oranje oplossing
Opslagtemperatuur-15 °C of lager
Stabiliteit na ontdooienTot 2 maanden bij +2 °C tot +8 °C
Aanbevolen gebruiksvolume~10 ml per 75 cm² kweekoppervlak
Typische incubatietijd5 – 10 minuten bij kamertemperatuur
VerzendvoorwaardenIngevroren op droogijs
Beoogd gebruikUitsluitend voor onderzoek en verdere productie



Formulering (samenstelling per liter)



Bestanddeel
Concentratie (mg/l)




Anorganische zouten

Natriumchloride (NaCl)8000,00
Dinatriumwaterstoffosfaat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumchloride (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenofosfaat (KH2PO4)200,00

Overige componenten

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenolrood3,00
Gepatenteerd enzymmengsel (proteolytische en collagenolytische activiteit)1x



Accutase is een geregistreerd handelsmerk van Innovative Cell Technologies, Inc.