Volume: 100 ml
Opslag: ≤ –15 °C
Steriliteit: Steriel gefilterd
Stabiele glutamineoplossing (L-Alanyl-L-Glutamine, 200 mM) is een zeer stabiele dipeptidevorm van L-glutamine, ontworpen als directe vervanging voor conventionele L-glutamine in celkweekmedia. L-glutamine is een essentieel aminozuur en een belangrijke energiebron voor gekweekte cellen, en speelt een cruciale rol in celgroei, metabolisme en eiwitsynthese.
Toepassing en voordelen
In standaard vloeibare media wordt L-glutamine bij 37 °C relatief snel afgebroken, wat leidt tot de vorming van toxische bijproducten zoals ammoniumionen die de levensvatbaarheid van cellen en de experimentele resultaten negatief kunnen beïnvloeden. Stabiele glutamine overwint deze beperking door een niet-afbreekbare dipeptidevorm te bieden die intact blijft in kweekomstandigheden.
Cellen splitsen de dipeptidebinding enzymatisch om L-glutamine vrij te maken wanneer dat nodig is, waardoor een continue verse toevoer wordt gegarandeerd en de ophoping van schadelijke afvalproducten wordt voorkomen. Dit maakt de oplossing bijzonder voordelig voor langdurige celculturen en groeisystemen met een hoge dichtheid.
Samenstelling en gebruik
De L-Alanyl-L-Glutamine-oplossing wordt bereid in water van celkweekkwaliteit met een concentratie van 200 mM en wordt steriel gefilterd voor toepassingen die gevoelig zijn voor besmetting. Het kan direct worden verdund in complete media volgens de experimentele vereisten. Bewaar bij ≤ –15 °C en vermijd herhaalde vries-dooicycli om de productstabiliteit te behouden.
Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Inhoud: 100 ml
Opslag: +2 °C tot +8 °C
Steriliteit: Steriel gefilterd
HEPES-bufferoplossing (1 M), ook bekend als N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethaansulfonzuur, is een zwitterionisch organisch bufferingsmiddel dat veel wordt gebruikt in celkweekmedia. Het is ontworpen om stabiele pH-waarden te handhaven binnen het fysiologische bereik van 6,7 tot 8,6, waardoor een optimale celfunctie tijdens in-vitro-toepassingen wordt ondersteund.
Toepassing en voordelen
HEPES biedt betrouwbare buffercapaciteit in celkweeksystemen, met name wanneer cellen buiten een CO₂-incubator worden behandeld. De toevoeging van 10-25 mM HEPES aan kweekmedia zorgt voor een verbeterde pH-stabiliteit tijdens langdurige manipulatieperioden, waardoor consistente experimentele omstandigheden kunnen worden gehandhaafd.
Deze buffer is membraanondoorlatend, heeft minimale invloed op biochemische reacties en vertoont een sterke chemische en enzymatische stabiliteit. Deze eigenschappen maken het geschikt voor een breed scala aan celkweek
- en biochemische toepassingen.
Samenstelling en gebruik
De oplossing wordt geleverd als een 1 M concentraat, bereid in water van celkweekkwaliteit, en is steriel gefilterd voor gebruik in omgevingen die gevoelig zijn voor besmetting. Het kan worden verdund tot de gewenste werkconcentratie, afhankelijk van de toepassingsvereisten. Bewaren bij +2 °C tot +8 °C en hanteren onder aseptische omstandigheden om de integriteit van het product te behouden.
Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Inhoud: 50 ml
Bewaring: +2 °C tot +8 °C
Steriliteit: Steriel gefilterd
D-(+)-glucose-oplossing (dextrose-oplossing) is een steriel, gebruiksklaar supplement dat de natuurlijk voorkomende suiker D-(+)-glucose bevat, een centraal onderdeel van het celmetabolisme. Glucose is betrokken bij essentiële biologische processen zoals energieproductie, glycosylatie en de vorming van glycanen die bijdragen aan de celstructuur en -functie.
Toepassing en voordelen
Deze glucoseoplossing wordt veel gebruikt als supplement in celkweekmedia en in tal van cellulaire en moleculaire biologische toepassingen. Als primaire koolstof
- en energiebron ondersteunt glucose de celgroei, proliferatie en metabolische activiteit. Door zijn betrokkenheid bij biosynthetische routes is het ook van cruciaal belang voor het behoud van een normale cellulaire fysiologie en experimentele consistentie.
Samenstelling en gebruik
De oplossing wordt geleverd in een hoge concentratie van 250 g/l glucose, waardoor deze flexibel kan worden verdund in kweekmedia volgens de experimentele vereisten. De oplossing is steriel gefilterd om geschikt te zijn voor toepassingen waarbij besmetting een risico vormt. Bewaar bij +2 °C tot +8 °C en behandel aseptisch om de productkwaliteit en stabiliteit te behouden.
Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Inhoud: 10 ml
Opslag: +2 °C tot +8 °C
Steriliteit: Steriel gefilterd
Insuline-Transferrine-Selenium (ITS) Oplossing (100x) is een chemisch gedefinieerd supplement dat is ontworpen voor een breed scala aan celkweektoepassingen. Het wordt meestal gebruikt als additief voor basale celkweekmedia om de celgroei te ondersteunen onder omstandigheden met verminderd serum of zonder serum.
Toepassing en voordelen
Ons ITS-supplement levert essentiële componenten die nodig zijn voor de optimale werking van serumvrije media. Door conventionele voedingsmedia aan te vullen met ITS kan de behoefte aan foetaal runderserum (FBS) voor het routinematig onderhoud van veel cellijnen aanzienlijk worden verminderd. Dit helpt de variabiliteit die gepaard gaat met het gebruik van serum te minimaliseren, terwijl een consistente celgroei en levensvatbaarheid behouden blijven.
Insuline ondersteunt de opname en het metabolisme van belangrijke voedingsstoffen door de cellen, transferrine bevordert het ijzertransport en selenium draagt bij aan de antioxidantafweer en enzymatische activiteit. Samen bevorderen deze componenten een evenwichtig celmetabolisme en een verbeterde reproduceerbaarheid in gedefinieerde kweeksystemen.
Samenstelling en gebruik
Insuline-Transferrine-Selenium (ITS) wordt geleverd als een 100x geconcentreerde oplossing in Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) zonder fenolrood. Voor standaardtoepassingen verdunt u het 1:100 in het geschikte basismedium om de aanbevolen werkconcentratie te bereiken. Bewaar bij +2 °C tot +8 °C en hanteer onder aseptische omstandigheden om de productstabiliteit en steriliteit te behouden.
Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Volume: 5 ml
Opslag: +2 °C tot +8 °C
Steriliteit: Steriel gefilterd
Recombinant humaan insulineoplossing is een chemisch gedefinieerd supplement dat vaak wordt gebruikt voor de kweek van zoogdiercellijnen, waaronder Chinese hamsterovariumcellen (CHO-cellen). Deze oplossing van celkweekkwaliteit bevat recombinant humaan insuline dat tot expressie is gebracht in Saccharomyces cerevisiae, wat een hoge zuiverheid en consistente prestaties bij onderzoekstoepassingen garandeert.
Toepassing en voordelen
Insuline wordt routinematig toegevoegd aan serumvrije en chemisch gedefinieerde media om de celgroei en productiviteit te bevorderen. Als belangrijk regulerend hormoon ondersteunt insuline de opname, het gebruik en de opslag van glucose, aminozuren en vetzuren door de cellen. Het remt ook de afbraak van glycogeen, eiwitten en lipiden, wat bijdraagt aan een verbeterde levensvatbaarheid van de cellen en metabolische stabiliteit in kweeksystemen. De chemisch gedefinieerde formulering ondersteunt de reproduceerbaarheid en minimaliseert variabiliteit in gevoelige celkweekprocessen.
Biologische eigenschappen en gebruik
Insuline is een polypeptidehormoon met twee ketens dat van nature wordt geproduceerd door de β-cellen van de pancreaseilandjes. Het heeft een molecuulgewicht van ongeveer 5.800 Da. De α
- en β-ketens zijn verbonden door twee disulfidebindingen tussen de ketens, en de α-keten bevat één disulfidebinding binnen de keten. Voor celkweektoepassingen moet de oplossing onder aseptische omstandigheden worden behandeld en bij +2 °C tot +8 °C worden bewaard om de stabiliteit en prestaties te behouden.
Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Inhoud: 100 ml
Bewaring: +2 °C tot +8 °C
Steriliteit: Steriel gefilterd
Natriumpyruvaatoplossing (100 mM) is een steriel, gebruiksklaar supplement dat is ontwikkeld om een extra, gemakkelijk toegankelijke energiebron voor celkweekmedia te bieden. Natriumpyruvaat speelt een belangrijke rol in het cellulaire energiemetabolisme en ondersteunt de groei van metabolisch actieve en snel prolifererende cellen, zoals tumorcellen. Suppletie kan de levensvatbaarheid van cellen verbeteren en helpen de metabolische stabiliteit in kweeksystemen te behouden.
Toepassing en voordelen
Deze oplossing wordt veel gebruikt in routinematige celculturen om media te verrijken met pyruvaat en optimale groeiomstandigheden te bevorderen. Het ondersteunt de ATP-productie, kan oxidatieve stress helpen verminderen en draagt bij aan een verbeterde metabolische prestatie van gekweekte cellen. Het product wordt vervaardigd in water van celkweekkwaliteit en is steriel gefilterd, waardoor een consistente kwaliteit en reproduceerbaarheid in onderzoeksworkflows wordt gegarandeerd.
Gebruik en compatibiliteit
De aanbevolen eindconcentratie voor de meeste celkweektoepassingen is 1 mM natriumpyruvaat, te verkrijgen door de 100 mM voorraadoplossing 1:100 te verdunnen in compleet kweekmedium. De oplossing is compatibel met een breed scala aan basismedia en zoogdiercellijnen. Bewaren bij +2 °C tot +8 °C en beschermen tegen besmetting om de productstabiliteit te behouden.
Alleen voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Volume: 100 ml Opslag: ≤-15°C Steriliteit: Steriel gefilterd
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is een steriel, gebruiksklaar concentraat dat is ontworpen om de risico's van microbiële besmetting in celkweken en aanverwante laboratoriumtoepassingen te verminderen. Deze 100x-oplossing bevat een beproefde combinatie van penicilline, streptomycine en amfotericine B, die een breed spectrum antimicrobiële activiteit biedt tegen Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën, gisten en filamenteuze schimmels. De formulering is geschikt voor gebruik in eukaryote celculturen, bacteriële media en andere besmettingsgevoelige systemen, ter ondersteuning van schone en consistente laboratoriumwerkzaamheden.
Toepassing en voordelen Deze oplossing is geoptimaliseerd voor routinematige onderzoeksprotocollen en wordt veel gebruikt om aseptische omstandigheden in celkweekworkflows te handhaven. Het biedt betrouwbare prestaties in contaminatiegevoelige omgevingen en helpt onderzoekers het risico van microbiële overgroei te verminderen zonder de gezondheid van de cellen of de experimentele reproduceerbaarheid in gevaar te brengen. De steriel gefilterde formulering elimineert de noodzaak voor extra solubilisatiestappen, ondersteunt een gestroomlijnde mediabereiding en vermindert de variabiliteit in dagelijkse labprocedures.
Gebruik en compatibiliteit Om standaard werkconcentraties te bereiken, verdunt u de oplossing 1:100 in uw volledige kweekmedium. Het product is compatibel met een breed scala aan zoogdiercellijnen en basismedia. Door de consistente beschikbaarheid van de voorraad profiteren onderzoekers van een betrouwbare leveringscontinuïteit en vereenvoudigde logistieke planning. De oplossing moet worden bewaard bij ≤ -15 °C en worden beschermd tegen herhaalde vries-dooicycli om de stabiliteit te behouden. Alleen voor onderzoek. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
Volume: 100 ml Opslag: +2°C tot +8°C Steriliteit: Steriel gefilterd
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) is een steriel supplement ontworpen om de celgroei en levensvatbaarheid in zoogdiercelkweeksystemen te verbeteren. De formulering komt overeen met een 100x concentraat van de niet-essentiële aminozuren die voorkomen in standaard Minimum Essential Medium (MEM), waardoor directe aanvulling van basismedia met minimale voorbereiding mogelijk is.
Toepassing en voordelen Dit supplement biedt een extra aminozuurpool voor snel prolifererende cellen of voor cellijnen die het vermogen hebben verloren om niet-essentiële aminozuren de novo te synthetiseren. Door de metabolische belasting van biosynthese te verlichten, ondersteunt het verbeterde groeikinetiek, verlengde levensvatbaarheid en grotere experimentele consistentie, vooral in culturen die gevoelig zijn voor voedingsstoffen of culturen met een hoge dichtheid.
Samenstelling en gebruik De oplossing bevat glycine, L-alanine, L-asparagine, L-asparaginezuur, L-glutaminezuur, L-proline en L-serine. Het is compatibel met MEM en de meeste andere standaardmedia. Verdun voor gebruik 1:100 in het uiteindelijke kweekmedium. Dit product is steriel gefilterd en klaar voor gebruik zonder extra stappen. Alleen voor onderzoek. Niet voor gebruik in diagnostische of therapeutische procedures. Niet voor gebruik bij mensen of dieren.
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Wat zit er in EMEM?
EMEM is een aangepaste versie van Eagle's minimaal essentiële medium en bevat Earle's Balanced Salt Solution, niet-essentiële aminozuren, L-glutamine, natriumpyruvaat en natriumbicarbonaat. Het is belangrijk om te weten dat dit niveau van natriumbicarbonaat bedoeld is voor gebruik bij 5% CO2 in de lucht. Om de effectiviteit te behouden, wordt aanbevolen om het medium te bewaren bij 2°C tot 8°C in het donker wanneer het niet wordt gebruikt.
Waar wordt EMEM voor gebruikt?
Eagle's minimaal essentieel medium (EMEM) is een celkweekmedium dat cellen in weefselkweek kan onderhouden. Het medium bevat hogere concentraties aminozuren, waardoor de eiwitsamenstelling van gekweekte zoogdiercellen nauwkeuriger kan worden benaderd. EMEM kan worden gebruikt om verschillende cellen te kweken, waaronder fibroblasten, menselijke leverkankercellijn (HepG2) cellen en menselijke foetale hersenprogenitor-afgeleide astrocytcellen (PDA). Het wordt meestal gebruikt in aanwezigheid van foetaal runderserum (FBS), kalfs
- of paardensera.
Waarin verschilt EMEM van andere celkweekmedia?
Hoewel EMEM en Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) enkele overeenkomsten hebben, verschillen ze ook. Beide media hebben geen eiwitten en bevatten de aminozuren, zouten, glucose en vitaminen die nodig zijn om een cel van energie te voorzien en in stand te houden in de weefselkweek. De DMEM-formulering is echter aangepast om tot vier keer meer vitaminen en aminozuren en twee tot vier keer meer glucose te bevatten dan EMEM. Het is vermeldenswaard dat EMEM ook verschilt van de originele MEM formulering.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Eenmaal geopend, bewaar bij 4°C en gebruik binnen 6-8 weken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet boven 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
L-Arginine HCl
126.00
L-Cystine 2 HCl
31.30
L-Glutamine
292.00
L-Histidine HClH2O
42.00
L-Isoleucine
52.00
L-Leucine
52.00
L-Lysine HCl
72.50
L-Methionine
15.00
L-Fenylalanine
32.00
L-Threonine
48.00
L-Tryptofaan
10.00
L-Tyrosine 2 Na 2H2O
51.90
L-Valine
46.00
Vitaminen
Choline Chloride
1.00
Vitaminen
D-Calcium Pantothenaat
1.00
Foliumzuur
1.00
myo-Inositol
2.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxaal HCl
1.00
Riboflavine
0.10
Thiamine HCl
1.00
Anorganische zouten
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganische zouten
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andere componenten
D-glucose
1000.00
Andere componenten
Fenolrood natriumzout
11.00
De belangrijkste kenmerken van Freeze Medium CM-1 zijn:
Brede compatibiliteit: Effectief voor een breed scala aan celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en gevestigde cellijnen.
Hoge levensvatbaarheid: Geoptimaliseerd voor maximaal herstel en levensvatbaarheid van de cellen na ontdooiing, voor betrouwbare experimentele resultaten.
Gebruiksklaar: Gemakkelijk bereid en gesteriliseerd voor onmiddellijke toepassing, waardoor de voorbereidingstijd korter wordt en het risico op besmetting kleiner.
Verbeterde stabiliteit: Behoudt consistente prestaties onder standaard cryoconserveringsomstandigheden, waardoor reproduceerbare resultaten worden gegarandeerd.
Lange houdbaarheid: CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
CM-1 gebruiken voor het invriezen van cellen
Volg deze stappen om CM-1 te gebruiken voor het invriezen van zowel adherente als suspensiecellen
Voor adherente cellen, wassen en losmaken van het kweeksubstraat. Voor suspensiecellen gaat u direct door naar de volgende stap.
Tel de cellen om er zeker van te zijn dat ze de juiste concentratie hebben.
Centrifugeer de cellen om ze te pelleteren en resuspendeer ze vervolgens in CM-1 diepvriesmedium.
Breng de geresuspendeerde cellen over in cryovaatjes.
Gebruik een methode voor langzaam invriezen voordat de cellen worden overgebracht naar langdurige opslag
Methode
Beschrijving
Stappen
❄️
Handmatig invriezen
Een stapsgewijze methode waarbij de temperatuur geleidelijk wordt verlaagd om de levensvatbaarheid van de cellen te garanderen
1️⃣ Plaats cellen in vriesmedium in een vriezer van 4°C gedurende 40 minuten.
2️⃣ Breng de cellen over naar een vriezer van -80°C gedurende 24 uur.
3️⃣ Bewaar de cellen in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring
❄️
Mr. Frosty gebruiken
Een handig apparaat voor het gecontroleerd invriezen van cellen zonder elektrische voeding
1️⃣ Bereid cellen voor in cryovials met vriesmedium.
2️⃣ Plaats cryovials in Mr. Frosty container.
3️⃣ Bewaar bij -80°C gedurende 24 uur alvorens over te hevelen naar vloeibare stikstof
❄️
Vriezer met gecontroleerde snelheid
Een zeer nauwkeurige vriezer van Thermo Fisher of andere fabrikanten, ontworpen voor gecontroleerde temperatuurverlaging
1️⃣ Programmeer het apparaat om de temperatuur geleidelijk te laten dalen.
2️⃣ Plaats de geprepareerde cellen in de vriezer.
3️⃣ Breng de cellen na de vriescyclus over in vloeibare stikstof
Bewaar de cryovials bij temperaturen lager dan -130°C of in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring.
Ingrediënten
Bevat FBS, DMSO, Glucose, Zouten
Buffercapaciteit: pH = 7,2 tot 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 biedt een betrouwbare oplossing voor cryopreservatie en zorgt voor een hoge levensvatbaarheid en functionaliteit van de cellen na ontdooien voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen.
Ham's F-12K (Kaighn's) medium is zorgvuldig geformuleerd om de omstandigheden voor celkweek te optimaliseren. Het heeft een verrijkte samenstelling en biedt verhoogde gehaltes aan essentiële componenten zoals aminozuren en natriumpyruvaat, evenals extra elementen zoals putrescine, thymidine, hypoxanthine en zink. Deze toevoegingen stellen onderzoekers in staat om het medium aan te vullen met minimaal serum of gedefinieerde componenten voor specifieke celtypes, waardoor precieze experimentele omstandigheden mogelijk worden.
Met name Ham's F-12K (Kaighn's) medium bevat geen eiwitten of groeifactoren. Bijgevolg is aanvulling met groeifactoren en foetaal runderserum (FBS) vaak noodzakelijk, waardoor onderzoekers het medium kunnen aanpassen aan de vereisten van hun specifieke cellijnen. Voor optimale prestaties moet de concentratie FBS zorgvuldig worden geoptimaliseerd voor elke cellijn, om optimale groei en functionaliteit te garanderen.
Om de fysiologische pH te handhaven, maakt Ham's F-12K (Kaighn's) medium gebruik van een natriumbicarbonaat buffersysteem (2,5 g/L), waardoor een gecontroleerde 5-10% CO2 omgeving nodig is tijdens de kweek. Dit zorgt ervoor dat de pH van het medium binnen het ideale bereik blijft voor celgroei en levensvatbaarheid
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37°C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium behalve het basismedium is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
135,24
Koper(II)sulfaat x 5H2O
0,00
IJzer(II)sulfaat x 7H2O
0,83
Magnesiumchloride x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfaat x 7H2O
394,49
Kaliumchloride
283,29
Kaliumdiwaterstoffosfaat
58,52
Natriumchloride
7597,20
dinatriumwaterstoffosfaatwatervrij
115,02
Zinksulfaat x 7H2O
0,14
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
1260,00
Hypoxanthine
4,08
DL-α liponzuur
0,21
Fenol rood
3,00
Putrescine x 2HCl
0,32
Natriumpyruvaat
220,00
NaHCO3
2500,00
Thymidine
0,73
Aminozuren
L-Alanine
17,82
L-Arginine x HCl
421,40
L-Asparagine x H2O
30,02
L-Asparaginezuur
26,62
L-Cysteïne x HCl x H2O
70,24
L-Glutamine
292,20
L-Glutaminezuur
29,42
Glycine
15,01
L-Histidine x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucine
7,87
L-Leucine
26,24
L-Lysine x HCl
73,04
L-Methionine
8,95
L-Fenylalanine
9,91
L-proline
69,06
L-Serine
21,02
L-Threonine
23,82
L-Tryptofaan
4,08
L-Tyrosine
10,87
L-Valine
23,42
Vitaminen
D(+)-Biotine
0,07
D-Calcium pantothenaat
0,48
Choline chloride
13,96
Foliumzuur
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamide
0,04
Pyridoxine x HCl
0,06
Riboflavine
0,04
Thiamine x HCl
0,34
Vitamine B12
1,36
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelgebruikte bufferoplossing in biologisch en chemisch onderzoek. Het speelt een cruciale rol bij het handhaven van de pH-balans en osmolariteit tijdens verschillende experimentele procedures, waaronder weefselverwerking en celkweek. Onze PBS-oplossing is zorgvuldig geformuleerd met hoogzuivere ingrediënten om stabiliteit en betrouwbaarheid bij elk experiment te garanderen. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS benaderen die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een werkconcentratie van 1X bevat het:
8000 mg/L natriumchloride (NaCl)
200 mg/L Kaliumchloride (KCl)
1150 mg/L Watervrij natriumfosfaat dibasisch (Na2HPO4)
200 mg/L Watervrij monobasisch kaliumfosfaat (KH2PO4)
Deze samenstelling zorgt voor een optimale pH-waarde en ionenbalans, geschikt voor een breed scala aan biologische toepassingen.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor verschillende toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. PBS-oplossingen met EDTA zijn effectief voor het losmaken van vastzittende en samengeklonterde cellen. Tweewaardige metalen zoals zink mogen echter niet aan PBS worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, waaronder SARS-CoV-2.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +25°C, beschermd tegen licht.
Eenmaal geopend, bewaren bij 2°C tot 25°C en binnen 24 maanden gebruiken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Zouten
Kaliumchloride
200
Kaliumfosfaat monobasisch watervrij
200
Natriumchloride
8000
Watervrij natriumfosfaat dibasisch
1150
In eerste instantie ontworpen om de groei van menselijke leukemische cellen te ondersteunen in zowel suspensie
- als monolaagculturen, heeft RPMI 1640 Medium zich ontwikkeld door aanpassingen door onderzoekers en commerciële leveranciers om geschikt te worden voor een breed scala aan zoogdiercellen. Het is uitzonderlijk compatibel met cellijnen zoals HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyten en carcinomen.
RPMI 1640 Medium onderscheidt zich van andere celkweekmedia door zijn unieke samenstelling. Het bevat een aanzienlijke hoeveelheid fosfaat, aminozuren en vitaminen. Het bevat met name biotine, vitamine B12 en PABA, die afwezig zijn in Eagle's Minimal Essential Medium of Dulbecco's Modified Eagle Medium. Bovendien vertoont RPMI 1640 Medium significant verhoogde concentraties vitamine inositol en choline. Het bevat echter geen eiwitten, lipiden of groeifactoren. Daarom is aanvulling met 10% foetaal runderserum (FBS) vaak nodig om optimale omstandigheden voor celgroei te creëren.
Het buffersysteem van RPMI 1640 Medium is gebaseerd op natriumbicarbonaat en vereist een omgeving met 5-10% CO2 om een fysiologisch geschikte pH te handhaven. De toevoeging van het reductiemiddel glutathion onderscheidt dit medium verder van andere.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Na opening bewaren bij 4 °C en binnen 6-8 weken gebruiken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
Glycine
10.00
L-Alanyl-L-Glutamine
434.40
L-Arginine
200.00
L-AsparagineH2O
56.82
L-Asparaginezuur
20.00
L-Cystine 2HCl
65.20
L-Glutaminezuur
20.00
L-Histidine HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-proline
20.00
L-Isoleucine
50.00
L-Leucine
50.00
L-Lysine HCl
40.00
L-Methionine
15.00
L-Fenylalanine
15.00
L-Proline
20.00
L-Serine
30.00
L-Threonine
20.00
L-Tryptofaan
5.00
L-Tyrosine 2Na 2H2O
28.83
L-Valine
20.00
Vitaminen
p-Amino Benzoëzuur
1.00
D-Biotine
0.20
Choline Chloride
3.00
D-Calcium Pantothenaat
0.25
Foliumzuur
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxine HCl
1.00
Riboflavine
0.20
Thiamine HCl
1.00
Vitamine B12
0.005
Anorganische zouten
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Andere componenten
D-glucose
2000.00
L-Glutathion Verminderd
1.00
Fenolrood natriumzout
5.30
Deze unieke formulering combineert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding. De toevoeging van L-glutamine verbetert de samenstelling nog verder.
DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een verhoogde concentratie aminozuren en vitaminen vergeleken met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op Ham's F-10 medium en biedt een aanvullende set essentiële componenten.
Om optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een typische concentratie van 5-10%. Deze toevoeging is nodig omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de ontwikkeling van cellen.
DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Voor het kweken van cellen in DMEM:Ham's F12, of elk medium dat het bicarbonaat-buffersysteem gebruikt, is een gecontroleerde CO2-omgeving van 5-10% nodig om de juiste pH-niveaus te handhaven.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Na opening bewaren bij 4°C en binnen 6-8 weken gebruiken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
Glycine
18.75
L-Alanine
4.45
L-Arginine HCl
147.50
L-Asparagine H₂O
7.50
L-Asparaginezuur
6.65
L-Cysteïne HCl H₂O
17.56
L-Cystine 2 HCl
31.29
L-Glutaminezuur
7.35
L-Glutamine
365.00
L-Histidine HCl H₂O
31.48
L-Isoleucine
54.47
L-Leucine
59.05
L-Lysine HCl
91.25
L-Methionine
17.24
L-Fenylalanine
35.48
L-Proline
17.25
L-Serine
26.25
L-Threonine
53.45
L-Tryptofaan
9.02
L-Tyrosine Dinatriumzout
48.10
L-Valine
52.85
Vitaminen
D-Biotine
0.0035
Choline Chloride
8.98
D-Calcium Pantothenaat
2.24
Foliumzuur
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamide
2.02
Pyridoxine HCl
0.031
Pyridoxaal HCl
2.00
Riboflavine
0.219
Thiamine HCl
2.17
Vitamine B12
0.68
Anorganische zouten
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Andere componenten
D-glucose
3151.00
Hypoxanthine
2.40
HEPES
3574.50
Linolzuur
0.042
Liponzuur
0.105
Fenolrood natriumzout
8.63
Putrescine 2 HCl
0.081
Natriumpyruvaat
55.00
Thymidine
0.365
- 0,02 bij 20-25 °C. Elke partij is getest op steriliteit en de afwezigheid van mycoplasma en bacteriën. Bewaring Bewaar gekoeld bij +2 °C tot +8 °C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37 °C vermindert de kwaliteit van het product. Verwarm het medium niet tot meer dan 37 °C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons). Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en verwarm deze op kamertemperatuur. De houdbaarheid van alle media, met uitzondering van het basismedium, is 6 tot 8 weken vanaf de datum van opening. Samenstelling Bestanddelen mg/L Anorganische zoutenCalciumchloride x 2H2O132,00 Magnesiumsulfaat97,67 Kaliumchloride400,00 Natriumchloride6.460,00 Dinatriumwaterstoffosfaat (watervrij)504,00 Overige componentenD(+)-glucose (watervrij)3.000,00 Glutathion (gereduceerd)0,50 Vleespeptone600,00 Fenolrood natriumzout11,00 AminozurenL-alanine13,36 L-arginine x HCl42,14 L-asparagine x H2O45,03 L-asparaginezuur19,97 L-Cysteïne x HCl x H2O31,75 L-glutamine (stabiel)219,15 L-glutaminezuur22,07 Glycine7,51 L-Histidine x HCl x H2O20,96 L-hydroxyproline19,67 L-Isoleucine39,36 L-Leucine39,36 L-lysine x HCl36,54 L-methionine14,92 L-fenylalanine16,52 L-proline17,27 L-serine26,28 L-threonine17,87 L-tryptofaan3,06 L-Tyrosine dinatriumbrood26,10 L-valine17,57 Vitaminenp-Aminobenzoëzuur1,00 Ascorbinezuur0,56 D(+)-biotine0,20 D-calciumpantothenaat0,20 Cholinechloride5,00 Foliumzuur10,0 Myo-inositol36,00 Nicotinamide0,50 Nicotinezuur0,50 Pyridoxal HCl0,50 Pyridoxine HCl0,50 Riboflavine0,20 Thiamine HCl0,20 Vitamine B122,00
Medium 199 biedt een scala aan toepassingen in het veld. Het kan het cumulus-oocytcomplex (COC) effectief in stand houden en de in vitro rijping van oöcyten ondersteunen. Daarnaast wordt het gebruikt bij het spoelen van aspiratielijnen tijdens het verzamelen van eicellen van Duitse Holstein-koeien. Bovendien dient Medium 199 als een uitstekend medium voor de kweek van cardiale endotheelcellen afkomstig van ratten. Deze toepassingen tonen de veelzijdigheid en aanpasbaarheid van Medium 199 aan verschillende experimentele behoeften.
Geschiedenis
De ontwikkeling van medium 199 in de jaren 1950 betekende een belangrijke vooruitgang op het gebied van weefselkweekmedia. Vóór de introductie waren veel kweekmedia afhankelijk van dierlijke producten en weefselextracten. Morgan en collega's brachten echter een revolutie teweeg door een volledig gedefinieerde voedingsbron voor celculturen te formuleren. Door hun experimenten met verschillende combinaties van vitamines, aminozuren en andere factoren ontdekten ze de uitzonderlijke groeibevorderende eigenschappen van Medium 199.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium behalve het basismedium is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
264,92
IJzer(III)nitraat x 9H2O
0,72
Magnesiumsulfaat
97,67
Kaliumchloride
400,00
Natriumacetaat x 3H2O
82,95
Natriumchloride
6,800.00
Natriumdiwaterstoffosfaat x H2O
140,00
Andere componenten
Adenine sulfaat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholesterol
0,20
2'-Deoxyribose
0,50
D(+)-Glucose watervrij
1,000.00
Glutathion (rood.)
0,05
Guanine x HCl
0,30
Hypoxanthine
0,30
Fenol rood
10,00
D-Ribose
0,50
Thymine
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xanthine
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminozuren
L-Alanine
25,00
L-Arginine x HCl
70,00
L-Asparaginezuur
30,00
L-Cysteïne x HCl x H2O
0,10
L-Cystine
20,00
L-Glutamine stabiel
149,00
L-Glutaminezuur
67,00
Glycine
50,00
L-Histidine x HCl x H2O
21,88
L-Hydroxyproline
10,00
L-Isoleucine
20,00
L-Leucine
60,00
L-Lysine x HCl
70,00
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
25,00
L-Proline
40,00
L-Serine
25,00
L-Threonine
30,00
L-Tryptofaan
10,00
L-Tyrosine
40,00
L-Valine
25,00
Vitaminen
4-Amino benzoëzuur
0,05
Ascorbinezuur
0,05
D(+)-Biotine
0,01
Calciferol
0,10
D-Calcium pantothenaat
0,01
Choline chloride
0,50
Foliumzuur
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadion
0,01
Nicotinezuur
0.025
Nicotinamide
0.025
Pyridoxaal x HCl
0.025
Pyridoxol x HCl
0.025
Riboflavine
0,01
DL-α-tocoferolfosfaat dinatriumzout
0,01
Thiamine x HCl
0,01
Vitamine A-acetaat
0,14
IMDM is zeer geschikt voor snel groeiende celculturen met een hoge dichtheid, waaronder Jurkat-, COS-7
- en macrofaagcellen. De verschillende modificaties van IMDM die beschikbaar zijn voor een reeks celkweektoepassingen kunnen worden gevonden met behulp van de media selector tool. Vloeibare media leveren essentiële voedingsstoffen voor alle celkweektoepassingen. Elk van onze hoogwaardige celkweekmedia wordt geproduceerd volgens de oorspronkelijk gepubliceerde formule of modificaties die nodig zijn voor consistente prestaties en stabiliteit van het kweekmedium.
IMDM vs. DMEM
IMDM bevat kaliumnitraat in plaats van ijzer-nitraat en HEPES en natriumpyruvaat. De extra componenten in IMDM maken het geschikter voor gespecialiseerde celtypes en specifieke toepassingen dan DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM en RPMI hebben verschillende formuleringen die relevant kunnen zijn voor PMA/ionomycine stimulatie. Een belangrijk verschil is de concentratie Ca2+. Terwijl RPMI 0,42 mM Ca2+ bevat, bevat IMDM 1,49 mM.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2 H2O
219,00
Kaliumchloride
330,00
Kaliumnitraat
0.076
Watervrij magnesiumsulfaat
97,73
Natriumchloride
4,505.00
Natriumdiwaterstoffosfaat watervrij
109,00
Natriumseleniet
0,02
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvaat
110,00
Fenol rood
15,00
Aminozuren
L-Alanine
25,00
L-Arginine x HCl
84,00
L-Asparagine x H2O
25,00
L-Asparaginezuur
30,00
L-Cystine x 2HCl
91,24
L-Glutamine
584,00
L-Glutaminezuur
75,00
Glycine
30,00
L-Histidine x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucine
104,80
L-Leucine
104,80
L-Lysine x HCl
146,20
L-Methionine
30,00
L-Fenylalanine
66,00
L-Proline
40,00
L-Serine
42,00
L-Threonine
95,20
L-Tryptofaan
16,00
L-Tyrosine x 2Na
104,20
L-Valine
93,60
Vitaminen
D(+)-Biotine
0.013
D-Calcium pantothenaat
4,00
Choline chloride
4,00
Foliumzuur
4,00
myo-Inositol
7,20
Celkweekmedia: Een overzicht
Op het gebied van de biowetenschappen is celkweek een van de belangrijkste methodologieën. Het verwijderen van cellen, weefsels of organen uit een dier of plant en het vervolgens implanteren van deze cellen, weefsels of organen in een kunstmatige omgeving die gunstig is voor hun overleving en/of groei is wat wordt bedoeld met de term "celkweek" De fundamentele omgevingsbehoeften voor een optimale celontwikkeling zijn een gecontroleerde temperatuur, een substraat voor celhechting, een geschikt groeimedium en een incubator die de optimale pH-waarde en osmolaliteit handhaaft. Cellen moeten aan deze voorwaarden voldoen om optimaal te kunnen groeien.
De selectie van een geschikt groeimedium voor in vitro kweken is de fase in de celkweek die zowel het meest kritisch als het meest vitaal is. Een groeimedium, ook wel bekend als kweekmedium, is een vloeistof of gel die is samengesteld om de ontwikkeling van organismen op microscopische, cellulaire of plantaardige schaal te stimuleren. Het medium dat wordt gebruikt voor het kweken van cellen bevat vaak een voldoende toevoer van energie en stoffen die de celcyclus regelen. De belangrijkste componenten van een kweekmedium zijn aminozuren, vitamines, anorganische zouten, glucose en serum. Het serum wordt aan het medium toegevoegd omdat het fungeert als een bron van groeifactoren, hormonen en hechtingsfactoren. Naast het leveren van voedingsstoffen draagt het medium ook bij aan het op peil houden van de pH en de osmolaliteit.
Soorten medium gebruikt in celkweek
Zowel menselijke als dierlijke cellen kunnen worden gekweekt in een kunstmatig of synthetisch medium of een volledig natuurlijk medium dat is aangevuld met natuurlijke elementen. Hieronder geven we een overzicht van de verschillende momenteel beschikbare mediatypen.
Natuurlijke media
Alleen biologische vloeistoffen die in hun natuurlijke staat bestaan, kunnen worden aangetroffen in natuurlijke media. Natuurlijke media zijn zeer nuttig en gemakkelijk voor het kweken van een grote verscheidenheid aan dierlijke celtypes. Het gebrek aan inzicht in de precieze componenten waaruit natuurlijke media bestaan, is de belangrijkste factor die bijdraagt aan de lage herhaalbaarheid van resultaten die met natuurlijke media worden verkregen.
Kunstmatige media
De bereiding van kunstmatige of synthetische media omvat de toevoeging van voedingsstoffen (zowel organische als anorganische), serumeiwitten, koolhydraten, cofactoren, vitaminen en zouten, evenals O2- en CO2-gasfasen [1].
Er zijn verschillende soorten kunstmatige media ontwikkeld om een of meer van de volgende functies te vervullen: 1) Onmiddellijke overleving (een gebalanceerde zoutoplossing met een precieze pH en osmotische druk). 2) Langdurige overleving (een gebalanceerde zoutoplossing aangevuld met verschillende formuleringen van organische chemicaliën en/of serum). 3) Onbepaalde ontwikkeling. 4) Gespecialiseerde functies.
Er zijn vier verschillende classificaties voor kunstmatige media:
Serumhoudende media
Het meest voorkomende supplement in mediums die gebruikt worden voor het kweken van dierlijke cellen is foetaal runderserum. Het wordt toegevoegd aan het kweekmedium als een goedkope aanvulling om de best mogelijke groeicondities te bereiken. Het serum fungeert niet alleen als transporteur of chelator voor onstabiele of in water onoplosbare voedingsstoffen, hormonen en groeifactoren, proteaseremmers en andere stoffen, maar bindt en neutraliseert ook schadelijke moleculen.
Serumvrij medium
De aanwezigheid van serum in de media heeft een aantal nadelen en kan leiden tot grote interpretatiefouten in immunologisch onderzoek [2, 3]. Er zijn verschillende serumvrije media ontwikkeld [4, 5]. Deze media zijn over het algemeen specifiek samengesteld om de kweek van een enkel celtype te ondersteunen, zoals Knockout Serum Replacement en Knockout DMEM van Thermo Fisher Scientific, en mTESR-medium van Stem Cell Technologies [6], voor stamcellen [7].
Bovendien bevatten deze media bepaalde hoeveelheden gezuiverde groeifactoren, lipoproteïnen en andere eiwitten, die normaal gesproken door het serum worden geleverd [8]. Deze media worden vaak "gedefinieerde cultuurmedia" genoemd omdat de componenten waaruit deze media bestaan goed bekend zijn.
Chemisch gedefinieerde media
Deze media bevatten ultrazuivere anorganische en organische componenten die niet zijn verontreinigd door enige vorm van besmetting. Ze kunnen ook zuivere eiwittoevoegingen bevatten, zoals groeifactoren.
de genetische modificatie van bacteriën of gist, samen met de toevoeging van bepaalde vetzuren, vitaminen, cholesterol en aminozuren, resulteert in de productie van hun componenten [9].
Eiwitvrije media
Eiwitvrije media zijn media die helemaal geen eiwitten bevatten en in plaats daarvan alleen niet-eiwitelementen. In vergelijking met media met toegevoegd serum, bevordert het gebruik van media zonder toegevoegd eiwit de celproliferatie en eiwitexpressie en maakt het gemakkelijker om producten te zuiveren die worden gegenereerd in een downstreamproces [10-12]. Eiwit is niet opgenomen in formuleringen zoals MEM en RPMI-1640. Indien nodig kan echter een eiwitsupplement worden toegediend.
Kweekmedium en de basiscomponenten
Commerciële kweekmedia kunnen worden gekocht als poeder of vloeistof en bevatten vaak een verscheidenheid aan voedingsstoffen zoals aminozuren, glucose, zouten, vitaminen en andere voedingssupplementen.
De behoeften aan deze componenten zijn verschillend voor elke cellijn en deze variaties zijn verantwoordelijk voor het grote aantal verschillende formuleringen van media. Elk component is verantwoordelijk voor een bepaalde functie, die in de volgende paragrafen wordt beschreven:
Buffersystemen
Om optimale groeicondities te handhaven, moet de pH worden geregeld, wat vaak wordt gedaan door een van de twee buffersystemen:
Natuurlijk buffersysteem
De CO2/H2CO3-verhouding in de atmosfeer is gelijk aan die van het medium, waardoor een natuurlijk buffermechanisme ontstaat. Om hun natuurlijke buffermechanisme te behouden, moeten culturen in een luchtomgeving met 5-10% CO2 worden gehouden, wat vaak wordt bereikt door een CO2-incubator te gebruiken. Een van de beste dingen aan het gebruik van een natuurlijke buffer is hoe goedkoop en veilig het is.
HEPES
Chemisch bufferen met het zwitterion HEPES heeft een groter buffervermogen in het pH-bereik van 7,2-7,4 en heeft geen gereguleerde gasvormige omgeving nodig. Voor bepaalde celtypen kan een grotere dosis HEPES schadelijk zijn. Media die HEPES bevatten zijn ook veel gevoeliger voor de fototoxische effecten van fluorescerend licht [13].
Fenolrood
De pH-indicator fenolrood wordt vaak opgenomen in commercieel verkrijgbaar kweekmedium, waardoor de pH continu kan worden gecontroleerd. Door het uitzetten van de cellen veroorzaken de metabolieten die door deze cellen worden geproduceerd een verschuiving in de pH en dus een kleurverandering van het medium. Fenolrood heeft een dubbel effect op de kleur van een medium: het wordt geel bij een zure pH en paars bij een alkalische pH. pH 7,4, de optimale waarde voor celkweek, zorgt ervoor dat het medium fluorescerend rood wordt.
Maar fenolrood heeft een paar nadelen: Ten eerste is fenolrood in staat om de werking van een aantal steroïdhormonen te simuleren, voornamelijk oestrogeen [14]. Daarom wordt bij het bestuderen van oestrogeengevoelige cellen, zoals borstweefsel, een medium zonder fenolrood aanbevolen. De natrium-kaliumbalans wordt verstoord door de aanwezigheid van fenolrood in verschillende serumvrije formuleringen. Het toevoegen van serum of boviene hypofyse hormoon aan de media kan dit effect tegengaan [15]. Ten derde wordt detectie in flowcytometrische experimenten gehinderd door de aanwezigheid van fenolrood.
Anorganische zouten
Media die anorganische zouten bevatten, zoals natrium-, kalium- en calciumionen, helpen het osmotisch evenwicht in stand te houden en het membraanpotentiaal te reguleren.
Aminozuren
Aangezien aminozuren de fundamentele bestanddelen zijn van eiwitten, zijn ze een essentieel bestanddeel van elk celgroeimedium dat ooit is bedacht. Omdat cellen bepaalde aminozuren niet zelf kunnen produceren, is het belangrijk dat het kweekmedium essentiële aminozuren bevat. Ze zijn nodig voor de celdeling en de concentratie waarin ze aanwezig zijn bepaalt de maximale celdichtheid die bereikt kan worden. Met name L-glutamine, een essentieel aminozuur, is van cruciaal belang.
L-glutamine functioneert als een secundaire energiebron voor het metabolisme en draagt stikstof bij aan de productie van NAD, NADPH en nucleotiden. Omdat L-glutamine een instabiel aminozuur is dat na verloop van tijd verandert in een vorm die cellen niet kunnen gebruiken, moet het aan het medium worden toegediend.
Daarnaast kunnen niet-essentiële aminozuren aan het medium worden toegevoegd om de aminozuren bij te vullen die tijdens het groeiproces zijn verbruikt. De groei van de cellen wordt gestimuleerd en hun levensvatbaarheid verhoogd als het groeimedium wordt aangevuld met niet-essentiële aminozuren.
Koolhydraten
Koolhydraten in de vorm van suikers zijn de belangrijkste energiebron. Veel media bevatten ook maltose en fructose naast de meer gebruikelijke suikers glucose en galactose.
Eiwitten en peptiden
Albumine, transferrine en fibronectine zijn de meest gebruikte eiwitten en peptiden. Ze zijn vooral belangrijk in media die geen serum bevatten. Albumine, transferrine, aprotinine, fetuin en fibronectine zijn enkele van de eiwitten die gevonden kunnen worden in serum, dat een rijke voorraad eiwitten is.
Albumine is het belangrijkste eiwit in bloed en heeft als functie het binden en transporteren van verschillende stoffen, waaronder water, zouten, vrije vetzuren, hormonen en vitaminen, tussen verschillende organen en cellen. Het vermogen van albumine om zich te hechten aan chemische stoffen maakt het een effectieve kandidaat voor het verwijderen van schadelijke stoffen uit het medium waarin cellen worden gekweekt.
Aprotinine is een beschermende stof in celkweeksystemen, omdat het stabiel is bij neutrale en zure pH-waarden en bestand is tegen hoge temperaturen en de vernietiging door proteolytische enzymen. Het kan een aantal serineproteasen remmen, waaronder trypsine.
Fetuin is een glycoproteïne dat in hogere hoeveelheden kan worden gedetecteerd in het serum van foetale en pasgeboren dieren in vergelijking met volwassen serum. Daarnaast werkt het als een serineproteaseremmer. Het eiwit fibronectine is een essentieel onderdeel in het proces van celadhesie. Transferrine is een eiwit dat ijzer transporteert en verantwoordelijk is voor het leveren van ijzer aan de celmembranen.
Vetzuren en lipiden
Ze spelen een cruciale rol in serumvrij medium wanneer serum afwezig is.
Vitaminen
Talrijke vitaminen zijn noodzakelijk voor de ontwikkeling en de proliferatie van cellen. Vitaminen kunnen niet in voldoende hoeveelheden door cellen worden geproduceerd en zijn dus essentieel in weefselkweek als voedingssupplementen.
In de celkweek is het serum de primaire bron van vitamines; media worden echter ook behandeld met verschillende vitamines om ze geschikt te maken voor een specifiek celtype. Meestal worden de vitamines uit de B-groep gebruikt om de groei te stimuleren.
Sporenelementen
Chemische elementen zoals koper, zink, selenium en tricarbonzuur-tussenproducten staan bekend als sporenelementen. Sporenelementen worden vaak toegevoegd aan media die geen serum bevatten om de elementen te vervangen die gewoonlijk in serum aanwezig zijn. Deze elementen zijn belangrijke chemische componenten die nodig zijn voor een gezonde celontwikkeling. Veel biochemische reacties zijn afhankelijk van bepaalde micronutriënten, zoals enzymactiviteit.
Mediumsupplementen
Het volledige groeimedium dat wordt voorgesteld voor bepaalde cellijnen heeft extra componenten nodig die ontbreken in de basismedia en het serum. Deze voedingssupplementen ondersteunen de celgroei en de juiste metabolische functie.
Hoewel hormonen, groeifactoren en signaalmoleculen essentieel zijn voor de juiste proliferatie van bepaalde cellijnen, moeten de volgende voorzorgsmaatregelen altijd worden genomen: Aangezien de toevoeging van supplementen de osmolaliteit van het volledige groeimedium kan veranderen, wat de celontwikkeling kan remmen, is het altijd raadzaam om de osmolaliteit te controleren na het toevoegen van supplementen. Voor de meeste cellijnen ligt de optimale osmolaliteit tussen 260 en 320 mOSM/kg.
Antibiotica
Antibiotica worden vaak gebruikt om de ontwikkeling van bacteriële en schimmelverontreinigingen te remmen [16], hoewel ze niet essentieel zijn voor celgroei. Omdat antibiotica besmetting door mycoplasma en resistente bacteriën kunnen verbergen, wordt het routinematig gebruik ervan niet aanbevolen voor celkweek [17, 18].
Bovendien kunnen antibiotica het metabolisme van overgevoelige cellen verstoren. De penicilline-streptomycinecombinaties van Millipore-Sigma en Life Technologies worden vaak gebruikt. Plasmocine is gebruikt in de kweek van de glioomcellijnen TS603, TS516 en BT260 [19], en het is effectief gebleken in het verwijderen van mycoplasmabesmetting (20).
Serum
Albumines, groeifactoren en groeiremmers zijn allemaal aanwezig in serum. Serum is een van de belangrijkste bestanddelen van het celkweekmedium omdat het aminozuren, eiwitten, vitamines (vooral vetoplosbare vitamines zoals A, D, E en K), koolhydraten, lipiden, hormonen, groeifactoren, mineralen en sporenelementen bevat.
Serum van foetaal en kalfsrunderen wordt vaak gebruikt om de ontwikkeling van gekweekte cellen te bevorderen. Foetaal serum is een overvloedige bron van groeifactoren en is geschikt voor het klonen van cellen en de ontwikkeling van gevoelige cellen. Vanwege de verminderde groeibevorderende capaciteiten wordt kalfsserum gebruikt in contactinhibitie-experimenten. Normale groeimediums bevatten vaak 2% tot 10% serum. De toevoeging van serum aan een kweekmedium dient de volgende doelen [21]:
-
Het serum levert de essentiële voedingsstoffen voor cellen (zowel in oplossing als gebonden aan eiwitten).
-
Het serum bevat verschillende groeifactoren en hormonen die betrokken zijn bij groeibevordering en gespecialiseerde celactiviteit.
-
Het biedt veel bindende eiwitten, zoals albumine en transferrine, die andere chemische stoffen naar de cel transporteren. Zo brengt albumine bijvoorbeeld vetten, vitaminen, hormonen, enz. in de cellen.
-
Het levert ook eiwitten, zoals fibronectine, die de hechting van cellen aan het substraat vergroten. Daarnaast produceert het spreidende elementen die helpen bij celexpansie vóór deling.
-
Het levert proteaseremmers die proteolyse in cellen voorkomen.
-
Het bevat ook mineralen zoals Na+, K+, Zn2+ en Fe2+.
-
Het verhoogt de viscositeit van de media en beschermt zo de cellen tegen mechanische schade tijdens het schudden van de suspensiekweek.
-
Het is ook een buffer.
Referenties
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Voeding van dierlijke cellen in weefselkweek; eerste studies over een synthetisch medium. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Snelle adsorptie van een foetaal kalfsserum component door zoogdiercellen in cultuur. A potential source of artefacts in studies of antisera to cell-specific antigens. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Addition of serum to the medium used for preparation of cell suspensions as a possible source of artefacts in cell-mediated reactions studied by means of the popliteal lymph node test. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Commercial serum-free media: hybridoma growth and monoclonal antibody production. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Methods for growth of cultured cells in serum-free medium. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNA-free TDP-43 into anisotropic intranuclear liquid spherical shells. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-syndroom-geïnduceerde senescentie verstoort de nucleaire architectuur van neurale progenitors. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Complete replacement of serum by albumin, transferrin, and soybean lipid in cultures of lipopolysaccharide-reactive B lymphocytes. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematic improvement of a chemically-defined protein-free medium for hybridoma growth and monoclonal antibody production. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. A protein-free medium for the growth of hybridomas and other cells of the immune system. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serumvrije celkweek: een verenigende benadering. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Clonal growth of chinese hamster cell lines in protein-free media. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Ontwikkeling van serumvrije media. In: Master JRW, editor. Animal Cell culture, 3rd ed. Oxford:Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Use of antibiotics in cell culture media. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Spread and control of mycoplasmal infection of cell cultures. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Changing medium and passaging cell lines. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histone demethylase KDM6A senses oxygen directly to control chromatin and cell fate. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53