NIH-3T3-cellen: Vooruitgang in fibroblastonderzoek en toepassingen van NIH-3T3
De NIH-3T3 cellijn, die in 1962 door Howard Green en George Todaro aan de New York University School of Medicine werd ontwikkeld uit het weefsel van een 17-dagen oud Zwitsers Albino muisembryo, is een fundamentele bron van biomedisch onderzoek geworden. De NIH-3T3 cellen, die bekend staan om hun grote ontvankelijkheid voor de vorming van focussen van leukemievirussen en sarcomavirussen, dienen als essentieel hulpmiddel voor een groot aantal wetenschappelijke onderzoeken, waaronder virale oncologiestudies, genexpressieanalyse en de verkenning van cellulaire groeidynamiek. De "3T3"-nomenclatuur weerspiegelt de celkweekmethode en duidt op een interval van "3 dagen overdracht" met een initiële zaaidichtheid van 3 × 10 ^ 5 cellen, wat de gestandaardiseerde omstandigheden benadrukt waaronder deze cellen voor het eerst werden gekweekt en uitgebreid.
Diverse morfologieën en toepassingen van NIH-3T3 cellen
Een van de kenmerkende eigenschappen van NIH-3T3 cellen is hun morfologische aanpassingsvermogen, dat aanzienlijk varieert met de confluentie van de kweek. Bij lagere dichtheden vertonen deze fibroblasten een spoelvormige, solitaire celstructuur, die zich ontwikkelt tot dichte, wervelende patronen naarmate de populatie confluentie bereikt. Met een gemiddelde diameter van ongeveer 18 μm bieden NIH-3T3 cellen een veelzijdig model voor diepgaande celbiologische studies, variërend van weefselherstelmechanismen tot de ingewikkelde paden van celcyclusregulatie.
Informatie kweken
Belangrijkste kweekgegevens:
Populatieverdubbeling Tijd: Ongeveer 20 uur.
Groeitype: Adherente culturen.
Zaaidichtheid: Aanbevolen: 3 tot 4 x 10^4 cellen/cm^2.
Groeimedium: DMEM of Ham's F12, aangevuld met 5% FBS en 2,5 mM L-glutamine.
Groeicondities: Handhaven bij 37 °C in een bevochtigde incubator met 5% CO2.
Opslag: Bewaren bij temperaturen onder -195 °C in de dampfase van vloeibare stikstof.
Invriesmethode: Gebruik CM-1 of CM-ACF medium; gebruik een langzame vriesmethode (1 ° C temperatuurdaling).
Ontdooien Protocol: snelle opwarming in een 37 ° C waterbad, gevolgd door centrifugatie om vriesmedium te verwijderen, dan resuspensie in groeimedium.
Bioveiligheidsniveau: Voor het kweken is een instelling op bioveiligheidsniveau 1 vereist.
Zwitserse albinomuis in een laboratorium.
Voor- en nadelen van het gebruik van NIH 3T3-cellen
Voordelen
Transfectie efficiëntie: NIH-3T3 cellen staan bekend om hun hoge transfectiesnelheden en zijn uitstekend geschikt voor zowel voorbijgaande als stabiele genexpressiestudies, waarbij een verscheidenheid aan transfectietechnieken mogelijk is.
Nut voor voedende lagen: Deze cellen dienen vaak als een ondersteunende voedingslaag voor co-culturen met cellen zoals keratinocyten en stamcellen, dankzij het vrijkomen van groeifactoren die de celgroei in de co-cultuur bevorderen.
Stamcelonderzoek: NIH-3T3 cellen hebben de voorkeur in stamcelonderzoek voor het induceren van pluripotentie zonder genetische modificatie en het bieden van een gunstige omgeving voor stamceldifferentiatie.
Kweekstabiliteit: NIH-3T3 cellen staan bekend om hun stabiliteit en lage frequentie van spontane transformatie. Onder bepaalde omstandigheden of na blootstelling aan specifieke oncogenen of mutagenen kunnen NIH-3T3-cellen echter een spontane transformatie ondergaan. Deze transformatie kan leiden tot de verwerving van kankereigenschappen zoals ongecontroleerde groei, verlies van contactinhibitie en het vermogen om tumoren te vormen wanneer ze in vatbare gastheren worden geïnjecteerd.
Nadelen
Inconsistente celgrootte: De langgerekte, spilachtige morfologie van NIH-3T3 cellen kan variëren, wat beeldanalyses in assays bemoeilijkt.
Infectiegevoeligheid: Deze cellen zijn gevoelig voor bacteriële en mycoplasma-infecties als ze niet worden onderhouden in strikte aseptische omstandigheden, wat de experimentele integriteit kan beïnvloeden.
Onderzoekstoepassingen van NIH-3T3 cellen
DNA-transfectiestudies: De robuustheid van NIH-3T3 cellen maakt ze ideaal voor het introduceren en bestuderen van de functie van verschillende genen, zoals aangetoond in onderzoek naar eiwitten zoals NAB2-STAT6 en hun rol in cellulaire processen.
Assays op celbasis: Hun betrouwbaarheid strekt zich uit tot verschillende testen, waaronder levensvatbaarheid, apoptose en focusvormingstesten, die inzicht bieden in cellulaire reacties onder verschillende experimentele omstandigheden.
Celcyclusonderzoek: De eenvoudige celcyclusmanipulatie van de cellijn via serumniveaus maakt het een krachtig model voor het bestuderen van celcyclusregulatie en afwijkingen daarvan in ziektecontexten.
Verhoog uw onderzoek met NIH-3T3-cellen
Markering van belangrijke onderzoeken met de fibroblastcellijn NIH 3T3
De NIH-3T3 cellijn heeft een centrale rol gespeeld in talloze onderzoeksprojecten die verschillende facetten van de celbiologie omvatten. Hieronder staan enkele belangrijke onderzoeken waarbij deze cellen zijn gebruikt:
- Onderzoek naar het fusie-eiwit NAB2-STAT6: Deze studie, gepubliceerd in Biochemical and Biophysical Research Communications, onderzoekt hoe het fusie-eiwit NAB2-STAT6 NIH-3T3-cellen beïnvloedt, met name zijn rol in het bevorderen van celgroei en migratie via EGR-1-regulatie
- Onderzoek naar APOBEC3 en het Murine Leukemia Virus: Dit onderzoek in het tijdschrift Virology onderzoekt de hypermutatie van AKV-muurleukemievirus in NIH-3T3-cellen die het APOBEC3-gen van de muis tot expressie brengen
- Evaluatie van het antimetastatisch potentieel van epigenetische geneesmiddelen: In Oncotargets and Therapy evalueert dit onderzoek de antimetastatische effecten van hydralazine en valproïnezuur op RAS-getransformeerde NIH-3T3-cellen
- Invloed van Baicaleïne op de proliferatie en collageensynthese van NIH-3T3: Dit onderzoek maakt gebruik van NIH-3T3 cellen om te onderzoeken hoe Baicaleïne de celproliferatie en collageenproductie beïnvloedt via modulatie van de miR-9/insuline-achtige groeifactor-1 as
- Studie van Riboflavinedepletie en Tumorigenese: Deze studie presenteert bevindingen over hoe een tekort aan riboflavine in NIH-3T3 cellen bijdraagt aan tumorigenese door celproliferatie te bevorderen en celcyclusgenen te ontregelen
Essentiële bronnen voor NIH-3T3 celonderzoek
Voor onderzoekers die geïnteresseerd zijn in het werken met NIH-3T3 cellen, is een verscheidenheid aan middelen beschikbaar om de kweek en experimentele protocollen te begeleiden:
- Sferoïde Formatie in NIH-3T3 Cellen: Deze video geeft een gedetailleerde uitleg over het vormen van sferoïden, een 3D celkweektechniek waarbij NIH-3T3 cellen worden samengevoegd tot clusters, wat een fysiologisch relevanter model biedt voor studies
- Bewaking van NIH-3T3 celgroei: Door middel van het JuLI Br live cell imaging systeem, legt deze video de groeidynamiek van NIH-3T3 cellen vast gedurende 65 uur, waardoor real-time celproliferatie wordt getoond
Deze hulpmiddelen zijn bedoeld om uw onderzoeksinspanningen met NIH-3T3 cellen te ondersteunen en een basis te leggen voor succesvolle experimenten en ontdekkingen.
Veelgestelde vragen over NIH-3T3 cellen
Referenties
- Rahimi, A.M., M. Cai en S. Hoyer-Fender, Heterogeniteit van de NIH3T3 fibroblastcellijn. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., et al., First molecular cytogenetic high resolution characterization of the NIH 3T3 cell line by murine multicolor banding. Tijdschrift voor Histochemie & Cytochemie, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al., Comparative analysis of different feeder layers with 3T3 fibroblasts for culturing rabbits limbal stem cells. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Differentiatie van neuronale cellen uit NIH/3T3 fibroblasten onder gedefinieerde omstandigheden. Ontwikkeling, groei & differentiatie, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al., NAB2-STAT6 fusion protein mediates cell proliferation and oncogenic progression via EGR-1 regulation. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Expression of the Sloppymerase™ in NIH/3T3 Cells: Exploring the Versatility of an Error Prone Fusion Polymerase. 2021.
- Sahinturk, V., et al., Acrylamide oefent zijn cytotoxiciteit uit in NIH/3T3 fibroblastcellen door apoptose. Toxicologie en industriële gezondheid, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. and F. Caicci, Discovery of the First Human Retro-Giant Virus: Description of its morphology, retroviral kinase and ability to induce tumours in mice. bioRxiv, 2019: p. 851063.
- Endo, M., et al., E2F1-Ror2signaling mediates coordinated transcriptional regulation to promote G1/S phase transition inbFGF-stimulatedNIH/3T3 fibroblasts. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L., et al., Riboflavin Depletion Promotes Tumorigenesis in HEK293T and NIH3T3 Cells by Sustaining Cell Proliferation and Regulating Cell Cycle-Related Gene Transcription. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.