NCI-H1299-cellen: Onderzoek en klinische implicaties van NCI-H1299 longkankercellen
NCI-H1299 is een geïmmortaliseerde menselijke niet-kleincellige longkankercellijn die veel wordt gebruikt in immuunoncologisch, kanker- en geneesmiddelenonderzoek. Bovendien gebruikten onderzoekers deze cellen om de gevoeligheid voor geneesmiddelen, onderliggende signaalwegen en moleculaire mechanismen met betrekking tot longkanker te onderzoeken. Daarnaast worden deze cellen gebruikt om virale infecties zoals SARS-CoV-2 te bestuderen.
Algemene kenmerken en oorsprong van NCI-H1299 cellen
Het eerste wat je moet weten over een cellijn is zijn oorsprong en algemene eigenschappen, omdat deze je helpen bij het bedenken van het gebruik ervan in je onderzoek. In dit gedeelte van het artikel leer je belangrijke informatie over de oorsprong en de eigenschappen van NCI-H1299. Zoals, wat zijn NCI-H1299 longkankercellen? Wat voor soort cel is NCI-H1299? Wat is de grootte van NCI-H1299 cellen? Wat is het verschil tussen A549 en NCI-H1299?
- De NCI-H1299 cellijn is afkomstig van een lymfekliermetastase van de long van een 43-jarige Kaukasische mannelijke patiënt met kanker.
- Deze cellen hebben een homozygote gedeeltelijke deletie van het p53-gen; ze brengen het p53-eiwit dus niet tot expressie. Gebrek aan expressie van het NCI-H1299 p53-eiwit draagt bij aan de proliferatieve neiging van H1299 longkankercellen.
- Naast p53 hebben deze geïmmortaliseerde cellen naar verluidt de NCI-H1299 KRAS-mutatie, die verantwoordelijk is voor hun groei, proliferatie, migratie en invasie-eigenschappen.
- Het karyotype van NCI-H1299 is bijna diploïd.
- NCI-H1299 cellen hebben een epitheelcelachtige morfologie.
- Deze cellen zijn afgeplat en hebben een dikte van minder dan 5 µm.
NCI-H1299 en A549
NCI-H1299 en A549 zijn cellijnen voor niet-kleine longkanker. NCI-H1299 cellen zijn agressiever en gevoeliger dan A549. Beide hebben relatief vergelijkbare mutaties, zoals KRAS. In tegenstelling tot NCI-H1299-cellen brengen A549-cellen echter het P53-gen tot expressie.
Informatie over kweken
Het onderhouden van een celkweek is niet eenvoudig totdat je alle belangrijke informatie erover weet, waaronder: Wat is de verdubbelingstijd van NCI-H1299? Wat is de zaaidichtheid van NCI-H1299? Wat is NCI-H1299 celmedia? Hoe kweek je NCI-H1299 cellijnen? In dit gedeelte vindt u de antwoorden op al deze vragen over het kweken van NCI-H1299 cellen.
Belangrijke punten voor het kweken van NCI-H1299-cellen
|
Verdubbelingstijd: |
De verdubbelingstijd van NCI-H1299 varieert tussen 22-30 uur. |
|
Adherent of in suspensie: |
NCI-H1299 is een adherente cellijn. |
|
Sub-kweek Ratio: |
NCI-H1299 cellen worden gesubcultiveerd in een aanbevolen verhouding van 1:3 tot 1:6. Voor het zaaien worden adherente cellen gewassen met 1x PBS en geïncubeerd met Accutase passaging-oplossing gedurende 8 tot 10 minuten bij omgevingstemperatuur. Losgekomen cellen worden toegevoegd met verse kweekmedia en gecentrifugeerd. De celpellet wordt vervolgens geresuspendeerd en de cellen worden in nieuwe kolven met groeimedium gegoten. |
|
Groeimedium: |
RPM1 1640 is een ideaal NCI-H1299 celmedium. Het is aangevuld met 10% foetaal runderserum, 4500 mg/L glucose, 2,0 mM L-glutamine, 1 mM natriumpyruvaat, 1500 mg/L NaHCO3 en 10 mM HEPES. De media moeten 2 tot 3 keer per week worden ververst. |
|
Groeicondities: |
NCI-H1299 longkankercelculturen worden onderhouden in een vochtige incubator bij 37°C met 5% CO2. |
|
Opslag: |
De NCI-H1299 cellijn kan worden opgeslagen in de dampfase van vloeibare stikstof of ultra-lage temperatuur vriezers bij een temperatuur onder -150 ° C voor de lange termijn. |
|
Invriesproces en -medium: |
CM-1 of CM-ACF zijn invriesmedia voor NCI-H1299 cellen. De cellen worden bevroren met behulp van een langzaam vriesproces dat slechts een temperatuurdaling van 1 graad per minuut toestaat om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen. |
|
Ontdooiproces: |
Bevroren NCI-H1299 cellen worden snel geroerd in een voorverwarmd waterbad op 37 graden Celsius gedurende 40 tot 60 seconden tot er een klein stukje ijs overblijft. Ontdooide cellen worden toegevoegd met verse media en kunnen direct worden gekweekt in nieuwe kolven of worden gecentrifugeerd. In het eerste geval moet de media na 24 uur incubatie worden vervangen. Centrifugeren helpt bij het verwijderen van bevroren media-elementen. Daarna worden de geoogste cellen geresuspendeerd in vers medium en in de nieuwe kolf gedaan om te kweken. |
|
Bioveiligheidsniveau: |
Een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1 is vereist om met de NCI-H1299-celkweek om te gaan. |
NCI-H1299-cellijn kopen: hoogwaardig onderzoeksgereedschap voor onderzoek naar longkankerbiologie
Voordelen & nadelen van NCI-H1299 cellen
Net als andere menselijke kankercellijnen heeft ook NCI-H1299 een aantal onderscheidende eigenschappen die gepaard gaan met specifieke voor- en nadelen. Hierin hebben we een paar belangrijke samengevat.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van de NCI-H1299 niet-kleincellige longkankercellijn zijn:
-
In vitro longkankermodel
NCI-H1299 cellijnen zijn ontwikkeld uit lymfekliermetastasen van longcarcinoom en hebben dus relatief vergelijkbare eigenschappen. Daarom kunnen deze cellen dienen als een in vitro model voor het onderzoeken van de biologie van longkanker, cel- en moleculaire mechanismen en het screenen en testen van potentiële therapeutica.
-
Gemakkelijk te kweken
NCI-H1299 cellen zijn gemakkelijk te kweken en te onderhouden in een onderzoekslaboratorium. Er zijn geen omslachtige celkweekvereisten en -procedures.
-
NCI-H1299 P53 en NCI-H1299 KRAS-mutatie
NCI-H1299 cellen missen p53 genexpressie, waardoor cellen zich krachtig kunnen vermenigvuldigen. Bovendien bezitten ze een KRAS-mutatie die bijdraagt aan celgroei, proliferatie, invasie en migratie. Daarom gebruiken onderzoekers H1299-cellen om moleculaire mechanismen te onderzoeken die relevant zijn voor KRAS- en P53-mutaties.
Nadelen
De nadelen van NCI-H1299 cellen zijn:
-
Weefselspecificiteit
NCI-H1299 is afkomstig van longweefsel. Daarom is de toepasbaarheid meestal beperkt tot longcarcinoomonderzoek. Het is mogelijk dat het de heterogeniteit en algemene kenmerken van andere kankertypes niet volledig weergeeft.
Onderzoekstoepassingen van NCI-H1299 cellen
De NCI-H1299 cellijn wordt veel gebruikt in longkankeronderzoek. Enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn worden hier genoemd.
- Kankerbiologie: NCI-H1299 cellen dienen als een geweldig onderzoeksinstrument om de ontwikkeling en progressie van kanker en gerelateerde cel- en moleculaire mechanismen te onderzoeken. Deze cellen rusten bepaalde mutaties uit, waardoor onderzoekers verwant gedrag van kankercellen, signaalroutes en genexpressieprofielen kunnen onderzoeken. Verschillende studies hebben de NCI-H1299 niet-kleincellige longcarcinoomcellijn gebruikt om de biologie van longkanker te bestuderen. Een studie uit 2018 onderzocht bijvoorbeeld de signaalroute die betrokken is bij apoptose van longkankercellen met behulp van NCI-H1299-cellen. De onderzoekers ontdekten dat de PI3K/AKT-route bijdraagt aan celproliferatie en dat remming ervan kan leiden tot de dood van kankercellen [1]. Een ander onderzoek onderzocht de mechanismen die betrokken zijn bij de epitheliale-naar-mesenchymale overgang (EMT) van NCI-H1299. Deze studie stelde voor dat een extracellulair eiwit SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) bijdraagt aan NCI-H1299 EMT en migratie, en zo tumorigenese in cellen bevordert - het SPARC-eiwit fungeert als een mediator van TGF-β1-signalering [2].
- Ontdekking en screening van geneesmiddelen: NCI-H1299, een menselijke longkankercellijn, wordt uitgebreid gebruikt om de toxiciteit en werkzaamheid van potentiële geneesmiddelen te beoordelen. Daarnaast wordt het door onderzoekers gebruikt om het werkingsmechanisme van anti-tumormedicijnen te onderzoeken. Studies hebben deze cellen ook gebruikt om mogelijke doelwitten van geneesmiddelen en resistentiemechanismen te identificeren. Xiao-Yun Shen en collega's onderzochten bijvoorbeeld het antikankerpotentieel van de natuurlijke verbinding bruceine D (BD). De bevindingen toonden aan dat BD de proliferatie, invasie en migratie van NCI-H1299-cellen aanzienlijk belemmert. Daarom kan het worden beschouwd als een potentiële adjuvante therapie voor de behandeling van niet-kleincellig longcarcinoom [3]. Evenzo evalueerde een onderzoek de cytotoxische effecten van xanthohumol alleen en in combinatie met cisplatine chemotherapeutisch middel op NCI-H1299 longkankercellen [4].
Onderzoekspublicaties met NCI-H1299-cellen
Enkele belangrijke en meest geciteerde onderzoekspublicaties over de NCI-H1299 longcarcinoomcellijn vindt u hier.
Dit artikel is gepubliceerd in het tijdschrift Human and Experimental Toxicology (2021). De studie stelde dat indool-3-carbinol apoptose induceert in H1299 via verhoging van het niveau van reactieve zuurstofspecies (ROS).
Dit onderzoek werd in 2018 gepubliceerd in het tijdschrift Cellular Physiology and Biochemistry. De onderzoeksresultaten onthulden dat de combinatie van cafeïnezuur en paclitaxel een synergetisch antikankereffect uitoefent in de niet-kleincellige longkanker cellijn, NCI-H1299.
Dit onderzoeksartikel is gepubliceerd in Molecular Medicine Reports (2018). De studie evalueerde het anti-tumor effect van tubeimoside-1, een triterpenoïde saponine, en onderliggende mechanismen in de NCI-H1299 cellijn.
Pristimerine induceert apoptose en remt proliferatie, migratie in H1299 longkankercellen
In dit artikel, gepubliceerd in het Journal of Cancer (2020), wordt voorgesteld dat Pristimerin, een natuurlijke verbinding, de proliferatie en migratie van NCI-H1299-cellen onderdrukt.
Mechanisme van VIPR1-gen dat menselijke longadenocarcinoom H1299-cellen reguleert
Deze studie in Medical Oncology (2019) onderzocht de mogelijke effecten van VIPR1-genoverexpressie op de NCI-H1299 adenocarcinoomcellijn.
Hulpmiddelen voor NCI-H1299-cellijn: Protocollen, video's en meer
Hier zijn enkele online bronnen met de NCI-H1299-cellen.
- NCI-H1299 transfectie: Deze video legt het protocol voor transiënte transfectie voor NCI-H1299 cellijnen uit.
- Subculturen van een adherente cellijn: Deze video helpt je bij het leren van een algemene subcultuurprocedure voor een adherente cellijn.
De volgende link bevat informatie over celkweek voor NCI-H1299-cellen.
- NCI-H1299 cellijn: Deze link kan je helpen meer te weten te komen over het NCI-H1299 cel passaging en transfectie protocol.
Veelgestelde vragen over de NCI-H1299-cellijn
Referenties
- Gu, J., et al., Study of EGCG induced apoptosis in lung cancer cells by inhibiting PI3K/Akt signaling pathway. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC fungeert als mediator van TGF-β1 bij het bevorderen van epitheliale-naar-mesenchymale transitie in A549 en H1299 longkankercellen. Biofactoren, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., Een studie naar het mechanisme van bruceïne D in de behandeling van niet-kleincellige longkanker H1299-cellen. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoxic Effects of Xanthohumol and Its Combination with Cisplatin on Human Metastatic Lung Cancer H1299 Cells. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.