Celcultuurmedium
Gekweekte cellen vereisen een nauwgezette omgevingscontrole voor succesvolle groei en onderhoud. Een allesomvattende aanpak omvat het waarborgen van steriliteit, voedingsstoffenvoorziening, pH-stabiliteit en temperatuurregeling.
Steriele omstandigheden en toevoer van voedingsstoffen
Om besmetting te voorkomen en de levensvatbaarheid van de cellen te garanderen, is een steriele omgeving van cruciaal belang. Dit wordt meestal bereikt door aseptische technieken en gespecialiseerde apparatuur zoals afzuigkappen met laminaire stroming. Voedingsstoffen worden geleverd via kweekmedia, die een mengsel van essentiële ingrediënten bevatten, waaronder:
- Anorganische zouten: Vitaal voor het handhaven van de osmotische balans en het leveren van noodzakelijke ionen voor cellulaire activiteiten.
- Koolhydraten: Dienen als energiebron; glucose is de meest gebruikte suiker.
- Aminozuren: de bouwstenen van eiwitten; sommige zijn essentieel en kunnen niet door cellen worden aangemaakt.
- Vitaminen: Doen dienst als co-factoren voor enzymatische reacties; B-vitamines zijn essentieel voor celstofwisseling.
- Vetzuren en Lipiden: Essentiële componenten voor de integriteit en functie van celmembranen.
- Eiwitten en Peptiden: In serumvrije media vervangen deze de groeifactoren en bindende eiwitten die gewoonlijk door serum worden geleverd.
- Serum: Vaak opgenomen als bron van groeifactoren, hoewel serumvrije alternatieven steeds populairder worden om de variabiliteit en het contaminatierisico te verminderen.
- stabiliteit van pH en temperatuur: Cellen hebben meestal een pH-bereik van 7,2-7,4 nodig voor optimale groei. Dit wordt geregeld door buffersystemen, die gebaseerd kunnen zijn op CO2/bicarbonaat of chemisch kunnen worden bereikt met middelen zoals HEPES. De temperatuur wordt rond 37°C gehouden om fysiologische omstandigheden na te bootsen.
Media Varianten en optimalisatie
In de loop der jaren zijn er verschillende basismedia ontwikkeld voor specifieke celtypen:
- Gebalanceerde zoutoplossingen: Vormen de basis van complexere mediaformules.
- Basale media, zoals Minimum Essential Medium (MEM), worden gebruikt voor primaire culturen en diploïde cellen.
- Complexe media: Zoals RPMI 1640, geschikt voor een breder scala aan zoogdiercellen.
- Serumvrije media: Op maat gemaakt voor specifieke toepassingen, waardoor het risico op besmetting door dierlijke componenten wordt verkleind.
Bereiding van media en kwaliteitscontrole
Media kunnen intern worden bereid uit essentiële ingrediënten of worden gekocht als kant-en-klare oplossingen. Kwaliteitscontrole omvat het verzekeren van de afwezigheid van verontreinigingen en de juiste concentratie van ingrediënten. Reconstitutie van poedervormige media vereist water van hoge kwaliteit en bereide media moeten worden gesteriliseerd, meestal door filtratie.
Serumgebruik en veiligheidsoverwegingen
Het gebruik van serum, met name foetaal runderserum (FBS), is gebruikelijk vanwege de rijke inhoud van groeifactoren. Vanwege de bezorgdheid over ziekten zoals BSE worden echter strenge test- en inkoopprotocollen gevolgd om de veiligheid te garanderen.
Richtlijnen en trends in regelgeving
Regelgeving geeft richting aan materialen die afkomstig zijn van dieren in culturen en benadrukt het belang van herkomst en testen. De trend om dergelijke materialen waar mogelijk te elimineren wordt weerspiegeld in de ontwikkeling van serumvrije en dierproefvrije media-alternatieven.
Tot slot spelen celkweekmedia een fundamentele rol in de groei en het onderhoud van cellen in vitro. Elk onderdeel wordt zorgvuldig geselecteerd en geoptimaliseerd om de in vivo omgeving na te bootsen, zodat de cellen kunnen groeien, overleven en functioneren.
DMEM onderscheidt zich van andere media door zijn unieke samenstelling. Het bevat een indrukwekkende verviervoudiging van de aminozuur
- en vitamineconcentratie in vergelijking met het originele Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM werd oorspronkelijk ontwikkeld met lage glucose (1 g/L) en natriumpyruvaat, maar wordt vaak gebruikt met hogere glucosewaarden, al dan niet met natriumpyruvaat. DMEM bevat met name geen eiwitten, lipiden of groeifactoren, waardoor aanvulling noodzakelijk is. Voor optimale groei wordt DMEM vaak aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS). Daarnaast maakt DMEM gebruik van een natriumbicarbonaat buffersysteem, waarbij een omgeving van 5-10% CO2 nodig is om een fysiologische pH te handhaven.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) staat hoog aangeschreven onder de gedefinieerde media voor cel
- en weefselkweek en voorziet in de groeibehoeften van verschillende aanhangende celfenotypen. Het overtreft het originele Eagle's Medium, ontwikkeld in de jaren 1950 voor het kweken van kippeneieren, door de verbeterde aanvullende formulering die bekend staat als Dulbecco's modificatie. Deze modificatie verhoogt het gehalte aan geselecteerde aminozuren en vitaminen aanzienlijk, tot wel vier keer in vergelijking met het oorspronkelijke medium.
Op het gebied van celkweek speelt DMEM een essentiële rol als groeimedium voor verschillende celtypen, waaronder primaire cellen, stamcellen en getransformeerde cellen. Onderzoekers gebruiken de aangepaste versie van DMEM ook voor een breed scala aan onderzoekstoepassingen, zoals het ontdekken van medicijnen, weefselmanipulatie en het bestuderen van celsignaalroutes.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Na opening bewaren bij 4 °C en binnen 6-8 weken gebruiken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
Glycine
30.00
L-Arginine HCl
84.00
L-Cystine 2 HCl
62.57
L-Glutamine
584.00
L-Histidine HClH2O
42.00
L-Isoleucine
105.00
L-Leucine
105.00
L-Lysine HCl
146.00
L-Methionine
30.00
L-Fenylalanine
66.00
L-Serine
42.00
L-Threonine
95.00
L-Tryptofaan
16.00
L-Tyrosine 2 Na 2H2O
103.79
L-Valine
94.00
Vitaminen
Choline chloride
4.00
D-Calcium Pantothenaat
4.00
Foliumzuur
4.00
myo-Inositol
7.20
Nicotinamide
4.00
Pyridoxaal HCl
4.00
Riboflavine
0.40
Thiamine HCl
4.00
Anorganische zouten
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Andere componenten
D-glucose
4500.00
Fenolrood natriumzout
15.90
Natriumpyruvaat
110.00
Wat zit er in EMEM?
EMEM is een aangepaste versie van Eagle's minimaal essentiële medium en bevat Earle's Balanced Salt Solution, niet-essentiële aminozuren, L-glutamine, natriumpyruvaat en natriumbicarbonaat. Het is belangrijk om te weten dat dit niveau van natriumbicarbonaat bedoeld is voor gebruik bij 5% CO2 in de lucht. Om de effectiviteit te behouden, wordt aanbevolen om het medium te bewaren bij 2°C tot 8°C in het donker wanneer het niet wordt gebruikt.
Waar wordt EMEM voor gebruikt?
Eagle's minimaal essentieel medium (EMEM) is een celkweekmedium dat cellen in weefselkweek kan onderhouden. Het medium bevat hogere concentraties aminozuren, waardoor de eiwitsamenstelling van gekweekte zoogdiercellen nauwkeuriger kan worden benaderd. EMEM kan worden gebruikt om verschillende cellen te kweken, waaronder fibroblasten, menselijke leverkankercellijn (HepG2) cellen en menselijke foetale hersenprogenitor-afgeleide astrocytcellen (PDA). Het wordt meestal gebruikt in aanwezigheid van foetaal runderserum (FBS), kalfs
- of paardensera.
Waarin verschilt EMEM van andere celkweekmedia?
Hoewel EMEM en Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) enkele overeenkomsten hebben, verschillen ze ook. Beide media hebben geen eiwitten en bevatten de aminozuren, zouten, glucose en vitaminen die nodig zijn om een cel van energie te voorzien en in stand te houden in de weefselkweek. De DMEM-formulering is echter aangepast om tot vier keer meer vitaminen en aminozuren en twee tot vier keer meer glucose te bevatten dan EMEM. Het is vermeldenswaard dat EMEM ook verschilt van de originele MEM formulering.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Eenmaal geopend, bewaar bij 4°C en gebruik binnen 6-8 weken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet boven 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
L-Arginine HCl
126.00
L-Cystine 2 HCl
31.30
L-Glutamine
292.00
L-Histidine HClH2O
42.00
L-Isoleucine
52.00
L-Leucine
52.00
L-Lysine HCl
72.50
L-Methionine
15.00
L-Fenylalanine
32.00
L-Threonine
48.00
L-Tryptofaan
10.00
L-Tyrosine 2 Na 2H2O
51.90
L-Valine
46.00
Vitaminen
Choline Chloride
1.00
Vitaminen
D-Calcium Pantothenaat
1.00
Foliumzuur
1.00
myo-Inositol
2.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxaal HCl
1.00
Riboflavine
0.10
Thiamine HCl
1.00
Anorganische zouten
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganische zouten
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andere componenten
D-glucose
1000.00
Andere componenten
Fenolrood natriumzout
11.00
Een van de opmerkelijke voordelen is de mogelijkheid om de celgroei te ondersteunen zonder dat er serumsupplementen nodig zijn. Dit elimineert mogelijke interferentie veroorzaakt door serumcomponenten, waardoor consistente en betrouwbare experimentele resultaten worden gegarandeerd. Door een serumvrije kweekomgeving te bieden, biedt Ham's F-12 medium onderzoekers meer controle over hun onderzoeken.
Een andere belangrijke eigenschap van Ham's F-12 medium is de geschiktheid voor single-cell plating. Dit maakt het een uitstekende keuze voor een verscheidenheid aan cellijnen, waaronder CHO-cellen, longcellen en muis L-cellen. De geoptimaliseerde samenstelling van het medium vergemakkelijkt efficiënte aanhechting en groei van individuele cellen, waardoor homogene celculturen met verbeterde reproduceerbaarheid kunnen worden opgezet.
Bovendien is Ham's F-12 medium erkend als het medium bij uitstek voor de Clonal Toxicity Assay (CTA). Deze test speelt een cruciale rol bij het beoordelen van de cytotoxische effecten van stoffen op cellen. Door Ham's F-12 medium te gebruiken in de CTA kunnen onderzoekers nauwkeurig het effect van verschillende verbindingen of behandelingen op individuele cellen evalueren, wat waardevolle inzichten oplevert in toxicologische profielen.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium behalve het basismedium is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
44,00
Koper(II)sulfaat x 5H2O
0,00
IJzer(II)sulfaat x 7H2O
0,83
Magnesiumchloride x 6H2O
122,00
Kaliumchloride
223,65
Natriumchloride
7599,00
dinatriumwaterstoffosfaatwatervrij
142,04
Zinksulfaat x 7H2O
0,86
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
1801,60
Hypoxanthine
4,08
Linolzuur
0,08
DL-α liponzuur
0,21
Fenol rood
1,20
Putrescine x 2HCl
0,16
Natriumpyruvaat
110,00
Thymidine
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminozuren
L-Alanine
8,91
L-Arginine x HCl
210,70
L-Asparagine x H2O
15,01
L-Asparaginezuur
13,31
L-Cysteïne x HCl x H2O
35,12
L-Alanyl-L-Glutamine
217,30
L-Glutaminezuur
14,71
Glycine
7,51
L-Histidine x HCl x H2O
20,96
L-Isoleucine
3,94
L-Leucine
13,12
L-Lysine x HCl
36,54
L-Methionine
4,48
L-Fenylalanine
4,96
L-proline
34,53
L-Serine
10,51
L-Threonine
11,91
L-Tryptofaan
2,04
L-Tyrosine
5,44
L-Valine
11,71
Vitaminen
D(+)-Biotine
0,01
D-Calcium pantothenaat
0,24
Choline chloride
13,96
Foliumzuur
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamide
0,04
Pyridoxine x HCl
0,06
Riboflavine
0,04
Thiamine x HCl
0,34
Vitamine B12
1,36
Deze unieke formulering combineert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding. De toevoeging van L-glutamine verbetert de samenstelling nog verder.
DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een verhoogde concentratie aminozuren en vitaminen vergeleken met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op Ham's F-10 medium en biedt een aanvullende set essentiële componenten.
Om optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een typische concentratie van 5-10%. Deze toevoeging is nodig omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de ontwikkeling van cellen.
DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Voor het kweken van cellen in DMEM:Ham's F12, of elk medium dat het bicarbonaat-buffersysteem gebruikt, is een gecontroleerde CO2-omgeving van 5-10% nodig om de juiste pH-niveaus te handhaven.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Na opening bewaren bij 4°C en binnen 6-8 weken gebruiken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
Glycine
18.75
L-Alanine
4.45
L-Arginine HCl
147.50
L-Asparagine H₂O
7.50
L-Asparaginezuur
6.65
L-Cysteïne HCl H₂O
17.56
L-Cystine 2 HCl
31.29
L-Glutaminezuur
7.35
L-Glutamine
365.00
L-Histidine HCl H₂O
31.48
L-Isoleucine
54.47
L-Leucine
59.05
L-Lysine HCl
91.25
L-Methionine
17.24
L-Fenylalanine
35.48
L-Proline
17.25
L-Serine
26.25
L-Threonine
53.45
L-Tryptofaan
9.02
L-Tyrosine Dinatriumzout
48.10
L-Valine
52.85
Vitaminen
D-Biotine
0.0035
Choline Chloride
8.98
D-Calcium Pantothenaat
2.24
Foliumzuur
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamide
2.02
Pyridoxine HCl
0.031
Pyridoxaal HCl
2.00
Riboflavine
0.219
Thiamine HCl
2.17
Vitamine B12
0.68
Anorganische zouten
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Andere componenten
D-glucose
3151.00
Hypoxanthine
2.40
HEPES
3574.50
Linolzuur
0.042
Liponzuur
0.105
Fenolrood natriumzout
8.63
Putrescine 2 HCl
0.081
Natriumpyruvaat
55.00
Thymidine
0.365
Ham's F-12K (Kaighn's) medium is zorgvuldig geformuleerd om de omstandigheden voor celkweek te optimaliseren. Het heeft een verrijkte samenstelling en biedt verhoogde gehaltes aan essentiële componenten zoals aminozuren en natriumpyruvaat, evenals extra elementen zoals putrescine, thymidine, hypoxanthine en zink. Deze toevoegingen stellen onderzoekers in staat om het medium aan te vullen met minimaal serum of gedefinieerde componenten voor specifieke celtypes, waardoor precieze experimentele omstandigheden mogelijk worden.
Met name Ham's F-12K (Kaighn's) medium bevat geen eiwitten of groeifactoren. Bijgevolg is aanvulling met groeifactoren en foetaal runderserum (FBS) vaak noodzakelijk, waardoor onderzoekers het medium kunnen aanpassen aan de vereisten van hun specifieke cellijnen. Voor optimale prestaties moet de concentratie FBS zorgvuldig worden geoptimaliseerd voor elke cellijn, om optimale groei en functionaliteit te garanderen.
Om de fysiologische pH te handhaven, maakt Ham's F-12K (Kaighn's) medium gebruik van een natriumbicarbonaat buffersysteem (2,5 g/L), waardoor een gecontroleerde 5-10% CO2 omgeving nodig is tijdens de kweek. Dit zorgt ervoor dat de pH van het medium binnen het ideale bereik blijft voor celgroei en levensvatbaarheid
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37°C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium behalve het basismedium is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
135,24
Koper(II)sulfaat x 5H2O
0,00
IJzer(II)sulfaat x 7H2O
0,83
Magnesiumchloride x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfaat x 7H2O
394,49
Kaliumchloride
283,29
Kaliumdiwaterstoffosfaat
58,52
Natriumchloride
7597,20
dinatriumwaterstoffosfaatwatervrij
115,02
Zinksulfaat x 7H2O
0,14
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
1260,00
Hypoxanthine
4,08
DL-α liponzuur
0,21
Fenol rood
3,00
Putrescine x 2HCl
0,32
Natriumpyruvaat
220,00
NaHCO3
2500,00
Thymidine
0,73
Aminozuren
L-Alanine
17,82
L-Arginine x HCl
421,40
L-Asparagine x H2O
30,02
L-Asparaginezuur
26,62
L-Cysteïne x HCl x H2O
70,24
L-Glutamine
292,20
L-Glutaminezuur
29,42
Glycine
15,01
L-Histidine x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucine
7,87
L-Leucine
26,24
L-Lysine x HCl
73,04
L-Methionine
8,95
L-Fenylalanine
9,91
L-proline
69,06
L-Serine
21,02
L-Threonine
23,82
L-Tryptofaan
4,08
L-Tyrosine
10,87
L-Valine
23,42
Vitaminen
D(+)-Biotine
0,07
D-Calcium pantothenaat
0,48
Choline chloride
13,96
Foliumzuur
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamide
0,04
Pyridoxine x HCl
0,06
Riboflavine
0,04
Thiamine x HCl
0,34
Vitamine B12
1,36
- 0,02 bij 20-25 °C. Elke partij is getest op steriliteit en de afwezigheid van mycoplasma en bacteriën. Bewaring Bewaar gekoeld bij +2 °C tot +8 °C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37 °C vermindert de kwaliteit van het product. Verwarm het medium niet tot meer dan 37 °C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons). Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en verwarm deze op kamertemperatuur. De houdbaarheid van alle media, met uitzondering van het basismedium, is 6 tot 8 weken vanaf de datum van opening. Samenstelling Bestanddelen mg/L Anorganische zoutenCalciumchloride x 2H2O132,00 Magnesiumsulfaat97,67 Kaliumchloride400,00 Natriumchloride6.460,00 Dinatriumwaterstoffosfaat (watervrij)504,00 Overige componentenD(+)-glucose (watervrij)3.000,00 Glutathion (gereduceerd)0,50 Vleespeptone600,00 Fenolrood natriumzout11,00 AminozurenL-alanine13,36 L-arginine x HCl42,14 L-asparagine x H2O45,03 L-asparaginezuur19,97 L-Cysteïne x HCl x H2O31,75 L-glutamine (stabiel)219,15 L-glutaminezuur22,07 Glycine7,51 L-Histidine x HCl x H2O20,96 L-hydroxyproline19,67 L-Isoleucine39,36 L-Leucine39,36 L-lysine x HCl36,54 L-methionine14,92 L-fenylalanine16,52 L-proline17,27 L-serine26,28 L-threonine17,87 L-tryptofaan3,06 L-Tyrosine dinatriumbrood26,10 L-valine17,57 Vitaminenp-Aminobenzoëzuur1,00 Ascorbinezuur0,56 D(+)-biotine0,20 D-calciumpantothenaat0,20 Cholinechloride5,00 Foliumzuur10,0 Myo-inositol36,00 Nicotinamide0,50 Nicotinezuur0,50 Pyridoxal HCl0,50 Pyridoxine HCl0,50 Riboflavine0,20 Thiamine HCl0,20 Vitamine B122,00
IMDM is zeer geschikt voor snel groeiende celculturen met een hoge dichtheid, waaronder Jurkat-, COS-7
- en macrofaagcellen. De verschillende modificaties van IMDM die beschikbaar zijn voor een reeks celkweektoepassingen kunnen worden gevonden met behulp van de media selector tool. Vloeibare media leveren essentiële voedingsstoffen voor alle celkweektoepassingen. Elk van onze hoogwaardige celkweekmedia wordt geproduceerd volgens de oorspronkelijk gepubliceerde formule of modificaties die nodig zijn voor consistente prestaties en stabiliteit van het kweekmedium.
IMDM vs. DMEM
IMDM bevat kaliumnitraat in plaats van ijzer-nitraat en HEPES en natriumpyruvaat. De extra componenten in IMDM maken het geschikter voor gespecialiseerde celtypes en specifieke toepassingen dan DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM en RPMI hebben verschillende formuleringen die relevant kunnen zijn voor PMA/ionomycine stimulatie. Een belangrijk verschil is de concentratie Ca2+. Terwijl RPMI 0,42 mM Ca2+ bevat, bevat IMDM 1,49 mM.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2 H2O
219,00
Kaliumchloride
330,00
Kaliumnitraat
0.076
Watervrij magnesiumsulfaat
97,73
Natriumchloride
4,505.00
Natriumdiwaterstoffosfaat watervrij
109,00
Natriumseleniet
0,02
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvaat
110,00
Fenol rood
15,00
Aminozuren
L-Alanine
25,00
L-Arginine x HCl
84,00
L-Asparagine x H2O
25,00
L-Asparaginezuur
30,00
L-Cystine x 2HCl
91,24
L-Glutamine
584,00
L-Glutaminezuur
75,00
Glycine
30,00
L-Histidine x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucine
104,80
L-Leucine
104,80
L-Lysine x HCl
146,20
L-Methionine
30,00
L-Fenylalanine
66,00
L-Proline
40,00
L-Serine
42,00
L-Threonine
95,20
L-Tryptofaan
16,00
L-Tyrosine x 2Na
104,20
L-Valine
93,60
Vitaminen
D(+)-Biotine
0.013
D-Calcium pantothenaat
4,00
Choline chloride
4,00
Foliumzuur
4,00
myo-Inositol
7,20
In eerste instantie ontworpen om de groei van menselijke leukemische cellen te ondersteunen in zowel suspensie
- als monolaagculturen, heeft RPMI 1640 Medium zich ontwikkeld door aanpassingen door onderzoekers en commerciële leveranciers om geschikt te worden voor een breed scala aan zoogdiercellen. Het is uitzonderlijk compatibel met cellijnen zoals HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyten en carcinomen.
RPMI 1640 Medium onderscheidt zich van andere celkweekmedia door zijn unieke samenstelling. Het bevat een aanzienlijke hoeveelheid fosfaat, aminozuren en vitaminen. Het bevat met name biotine, vitamine B12 en PABA, die afwezig zijn in Eagle's Minimal Essential Medium of Dulbecco's Modified Eagle Medium. Bovendien vertoont RPMI 1640 Medium significant verhoogde concentraties vitamine inositol en choline. Het bevat echter geen eiwitten, lipiden of groeifactoren. Daarom is aanvulling met 10% foetaal runderserum (FBS) vaak nodig om optimale omstandigheden voor celgroei te creëren.
Het buffersysteem van RPMI 1640 Medium is gebaseerd op natriumbicarbonaat en vereist een omgeving met 5-10% CO2 om een fysiologisch geschikte pH te handhaven. De toevoeging van het reductiemiddel glutathion onderscheidt dit medium verder van andere.
Kwaliteitscontrole
Steriel gefilterd
Opslag en houdbaarheid
Bewaren bij +2°C tot +8°C, beschermd tegen licht.
Na opening bewaren bij 4 °C en binnen 6-8 weken gebruiken.
Verzendomstandigheden
Omgevingstemperatuur
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Vermijd invriezen en frequente opwarming tot +37°C, omdat dit de kwaliteit van het product vermindert.
Verwarm het medium niet verder dan 37°C en gebruik geen ongecontroleerde warmtebronnen zoals magnetrons.
Als slechts een deel van het medium gebruikt wordt, verwijder dan de benodigde hoeveelheid en warm het op tot kamertemperatuur voor gebruik.
Samenstelling
Categorie
Bestanddelen
Concentratie (mg/L)
Aminozuren
Glycine
10.00
L-Alanyl-L-Glutamine
434.40
L-Arginine
200.00
L-AsparagineH2O
56.82
L-Asparaginezuur
20.00
L-Cystine 2HCl
65.20
L-Glutaminezuur
20.00
L-Histidine HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-proline
20.00
L-Isoleucine
50.00
L-Leucine
50.00
L-Lysine HCl
40.00
L-Methionine
15.00
L-Fenylalanine
15.00
L-Proline
20.00
L-Serine
30.00
L-Threonine
20.00
L-Tryptofaan
5.00
L-Tyrosine 2Na 2H2O
28.83
L-Valine
20.00
Vitaminen
p-Amino Benzoëzuur
1.00
D-Biotine
0.20
Choline Chloride
3.00
D-Calcium Pantothenaat
0.25
Foliumzuur
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxine HCl
1.00
Riboflavine
0.20
Thiamine HCl
1.00
Vitamine B12
0.005
Anorganische zouten
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Andere componenten
D-glucose
2000.00
L-Glutathion Verminderd
1.00
Fenolrood natriumzout
5.30