Raji ląstelės – naujos žinios apie limfomą

Raji ląstelės, kurias 1963 m. R.J.V. Pulvertaftas pirmą kartą išskyrė iš Burkitto limfomos atvejo, tapo limfomos ir imunologijos tyrimų pagrindu. Šios ląstelės, pasižyminčios limfoblastams būdinga išvaizda ir dideliu CD19 ekspresijos lygiu (CD19 yra pagrindinis B ląstelių receptorių signalizacijos reguliatorius), yra itin svarbios gilinantis į limfomos sudėtingumą ir bandant naujas terapines strategijas. Kaip neprisitvirtinančios ląstelės, besidauginančios laisvai plūduriuojančiuose agregatuose, Raji ląstelės ypač vertinamos dėl savo naudingumo vertinant imunoterapinius metodus, įskaitant jų taikymą tiriant bispecifinius antikūnus, skirtus ne Hodžkino B ląstelių limfomos gydymui. Be to, jų BCMA ekspresija daro jas nepakeičiamas dauginės mielomos tyrimuose, o tai pabrėžia jų plačią pritaikomybę ir lemiamą vaidmenį vėžio tyrimų pažangai.

Raji ląstelių linijos charakteristikų ir kilmės apžvalga

Prieš pradedant tyrimus, labai svarbu suprasti ląstelių linijos pagrindines savybes ir kilmę. Šiame skyriuje pateikiama informacija apie Raji ląsteles, įskaitant jų kilmę, morfologiją ir pagrindines savybes.

• Raji ląstelių linija, gauta iš 11 metų amžiaus Nigerijos berniuko, sergančio Burkitto limfoma, kairės viršutinės žandikaulio dalies, buvo sukurta R.J.V. Pulvertaft 1963 m. ir suteikia unikalią galimybę tirti B ląstelių limfomas.
• Raji ląstelės gerai auga suspensijos kultūrose, paprastai sudarančios grupes, kurių dydis ir tankis gali skirtis, o tai rodo jų prisitaikymo gebėjimus in vitro.
• Šias ląsteles išskiria mažas skersmuo (5–8 μm), gausi citoplazma ir unikaliai įdubęs branduolys, dėl kurių jos pasižymi išskirtine limfoblastams būdinga morfologija.
• Turėdamos stabilų kariotipą ir diploidinį chromosomų skaičių, Raji ląstelės yra nuoseklus modelis genetiniams tyrimams vėžio mokslinių tyrimų srityje.

Raji ląstelių auginimas

Norint įvaldyti tokios ląstelių linijos kaip Raji ląstelės kultivavimą, būtina gerai susipažinti su jų specifiniais kultivavimo reikalavimais. Svarbiausi aspektai, į kuriuos reikia atsižvelgti, yra ląstelių dvigubėjimo laikas, tinkamiausios kultūrinės terpės, augimo pobūdis (suspensinis arba adhezinis), optimalus sėjimo tankis ir būtinos biologinio saugumo priemonės.

Pagrindiniai Raji ląstelių auginimo aspektai

• Populiacijos padvigubėjimo laikas: Raji ląstelių populiacijos padvigubėjimo laikas yra maždaug 23,2 valandos, todėl būtina reguliariai stebėti ląstelių būklę, siekiant išlaikyti optimalų ląstelių sveikumą.

• Augimo pobūdis: Raji ląstelės paprastai dauginasi suspensijoje, formuodamos dinamiškus klasterius, kurie pabrėžia jų limfoblastų pobūdį.

• Sėjimo tankis: siekiant užtikrinti optimalų augimą, pradinis sėjimo tankis turi būti 1–2 × 10⁵ ląstelių/ml. Kadangi Raji ląstelės auga suspensijoje, joms nereikia atskyrimo tirpalų – jos tiesiog praskiedžiamos tiesiai į auginimo terpę iki pageidaujamo tankio.

• Kultūrinė terpė: Rekomenduojama Raji ląstelių terpė yra RPMI 1640, praturtinta 2,0 mM L-glutaminu, 2,0 g/l L-gliukozės, 2,0 g/l NaHCO₃ ir 10 % veršelių serumo (FBS), siekiant užtikrinti intensyvų ląstelių augimą.

• Optimalios augimo sąlygos: Raji ląstelės geriausiai auga kontroliuojamoje aplinkoje 37 °C temperatūroje su 5 % CO₂ drėkinamame inkubatoriuje, atkartojančiame jų fiziologines sąlygas.

• Ląstelių saugojimas: Ilgalaikiam saugojimui Raji ląstelės laikomos skysto azoto garų fazėje, esant temperatūrai žemiau -150 °C, taip užtikrinant ilgalaikį ląstelių gyvybingumą.

• Užšaldymo protokolas: Naudojant CM-1 arba CM-ACF kaip užšaldymo terpę, Raji ląstelės geriausiai išsaugomos taikant laipsnišką atšaldymo procesą, siekiant sumažinti ląstelių stresą ir išlaikyti gyvybingumą.

• Raji ląstelių atšildymas: Atšildant ląsteles trumpai šildomos 37 °C vandens vonioje, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Atšildžius ląsteles, jos švelniai resuspenduojamos šviežioje auginimo terpėje ir arba centrifuguojamos, kad būtų pašalinta užšaldymo terpė, arba tiesiogiai perkeltos į naujus kolbelius, o po 24 valandų terpė pakeičiama, siekiant pašalinti bet kokius užšaldymo terpės likučius.

• Biologinio saugumo aspektai: Raji ląstelių kultivavimas reikalauja laikytis 1 biologinio saugumo lygio gairių, užtikrinančių saugų elgesį su ląstelėmis ir jų priežiūros praktiką laboratorijoje.

Šių pagrindinių kultivavimo praktikos principų supratimas ir taikymas palengvins sėkmingą Raji ląstelių auginimą ir išlaikymą, o tai leis jas veiksmingai naudoti limfomos tyrimuose ir kitose srityse.

Raji: novatoriški moksliniai laimėjimai

• Vėžio tyrimų įžvalgos: Kilusios iš Burkitto limfomos, Raji ląstelės yra nepakeičiamos vėžio tyrimų srityje, ypač analizuojant B ląstelių piktybinių navikų sudėtingumą. Šios ląstelės yra labai svarbios tiriant p53 geno mutacijų pasekmes, kurios yra daugelio vėžio formų progresavimo požymis. Šie tyrimai yra labai svarbūs siekiant atskleisti galimus atsparumo dabartiniams gydymo metodams mechanizmus ir sudaryti sąlygas naujų terapinių strategijų kūrimui. Dėl Raji ląstelių universalumo jų pritaikymas neapsiriboja tik Burkitto limfoma – jos suteikia platesnę perspektyvą hematologinių piktybinių navikų tyrimams ir praturtina mūsų onkologinio gydymo priemonių arsenalą.
• Imunologinės naujovės: Imunologijoje Raji ląstelių reikšmės negalima pervertinti, nes jos ekspresuoja pagrindines paviršiaus molekules, būtinas imuninės sistemos funkcionavimui. Naudojamos garsiajame Raji ląstelių tyrime, šios ląstelės leidžia pažvelgti į imuninių kompleksų ir B ląstelių sąveiką. Šių sąveikų supratimas yra būtinas norint išsiaiškinti vėžio ląstelių imuninio vengimo mechanizmus, taip prisidedant prie novatoriškų imunoterapijų ir vakcinų, skirtų leukemijai ir kitiems B ląstelių sutrikimams, kūrimo.

Mokslinio potencialo išlaisvinimas: geriausios „Raji“ ląstelių linijos jūsų laboratorijai

Svarbiausi tyrimai su Raji ląstelėmis

• Meloksikamo priešvėžinio potencialo tyrimas Raji ląstelėse: 2022 m. žurnale „International Journal of Dentistry“ paskelbtame tyrime nagrinėjamas meloksikamo poveikis Raji limfomos ląstelėms, parodant jo veiksmingumą slopinant ląstelių proliferaciją ir indukuojant apoptozę.
• Jėgų sujungimas: CD19 CAR-T ląstelės ir ibrutinibas prieš Raji ląsteles: Šiame 2020 m. žurnale „Cancer Science“ paskelbtame straipsnyje gilinamasi į CD19 CAR-T ląstelių terapijos ir vaisto ibrutinibo sinergetinį poveikį Raji ląstelėms, parodant sustiprintą priešlimfominį poveikį.
• Tikslinis lncRNA PVT1 veikimas Raji ląstelėse: strategija proliferacijai pažaboti 2019 m. žurnale „Oncology Letters“ paskelbtame tyrime atskleidžiama, kaip lncRNA PVT1 ekspresijos slopinimas gali veiksmingai sumažinti Raji ląstelių proliferaciją, suteikdamas įžvalgų apie ląstelių ciklo reguliavimą.
• JAK2/STAT3 signalo kelio sutrikdymas Raji ląstelėse: kelias proliferacijai slopinti 2018 m. žurnale „Medical Science Monitor“ paskelbtame tyrime daugiausia dėmesio skiriama JAK2/STAT3 signalo kelio slopinimo poveikiui Raji ląstelėse, atsižvelgiant į jo reikšmę proliferacijai, apoptozei ir oksidacinio streso valdymui.
• EBV patekimo į NK ląsteles iššifravimas: įžvalgos iš Raji ir NK ląstelių bendros kultūros Įdomus 2018 m. žurnale „Cellular Immunology“ paskelbtas straipsnis tiria Epštejno-Barro viruso patekimą į NK ląsteles nepriklausomai nuo CD21 receptoriaus, naudojant Raji ir NK ląstelių bendras kultūras, siekiant išsiaiškinti viruso ir ląstelių sąveiką.