P19 ląstelės – embrioninės karcinomos tyrimai naudojant P19 ląsteles
P19 yra pelių embrioninės karcinomos ląstelių linija. Ji plačiai naudojama biomedicininiuose tyrimuose, daugiausia vystymosi biologijos, kamieninių ląstelių biologijos, ląstelių diferenciacijos ir vaistų atrankos srityse. Kadangi P19 ląstelės turi diferenciacijos gebėjimą, jos gali būti naudingos tiriant sudėtingus biologinius procesus, pavyzdžiui, audinių formavimąsi ir ankstyvą embriono vystymąsi. Šiame straipsnyje aptarsime pelių kilmės P19 ląstelių pagrindinius aspektus.
- Auginimo terpė
- DMEM/Ham's F12 terpė, kurioje yra 5 % veršelių serumo, 3,1 g/l gliukozės, 1,6 mM L-glutamino, 1,0 mM natrio piruvato, 15 mM HEPES ir 1,2 g/l NaHCO₃, naudojama P19 ląstelių kultūrai auginti.
- Padvigubėjimo laikas
- P19 ląstelių linijos dauginimosi laikas yra maždaug 2–3 dienos.
- Augimo tipas
- P19 embrioninės karcinomos ląstelių linija yra adhezyvinė.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- „Cytion“ — Užsisakykite P19
- P19 ląstelių bendrosios charakteristikos ir kilmė
- P19 ląstelių auginimo informacija
- P19 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- P19 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
- Įsigykite P19 ląstelių liniją jau šiandien
- P19 ląstelės: moksliniai straipsniai
- Ištekliai, susiję su P19 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- P19 ląstelių linijos tyrinėjimas: dažnai užduodami klausimai
- Nuorodos
- Dažnai užduodami klausimai
P19 ląstelių bendrosios charakteristikos ir kilmė
Prieš pradedant dirbti su ląstelių linija, būtina žinoti jos bendrąsias charakteristikas ir kilmę. Šiame skyriuje bus aptariama: Kas yra P19 ląstelių linija? Koks yra P19 ląstelės dydis? Kokia yra P19 ląstelių kilmė?
- P19 – tai pluripotentinių embrioninių karcinomų ląstelių tipas, iš pradžių gautas iš teratokarcinomos, išsivysčiusios C3H/He pelėje. Ląstelių liniją pirmą kartą 1982 m. sukūrė McBurney ir Rogers.
- P19 ląstelės gali nuolat augti kultūrinėje terpėje, papildytoje serumu. Jos gali diferencijuotis į kitus ląstelių tipus, kai veikiama netoksiniais vaistais, tokiais kaip retinoinė rūgštis ir dimetilsulfoksidas (DMSO) [1].
- Šios pelių karcinomos ląstelės pasižymi epitelio tipo morfologija.
- P19 ląstelių linija turi euploidinį vyrišką kariotipą (n = 40; XY).
Informacija apie P19 ląstelių auginimą
P19 ląstelių linija dėl savo unikalių savybių plačiai auginama mokslinių tyrimų laboratorijose. Jos auginimas yra lengvas ir nesudėtingas. Šiame skyriuje pateikta visa pagrindinė informacija, reikalinga P19 ląstelių kultūros palaikymui ir auginimui. Sužinosime: koks yra P19 ląstelių dauginimosi laikas? Kaip auginti P19 ląstelių liniją? Ar P19 yra adhezyvinė ląstelių linija?
Pagrindiniai P19 ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
P19 ląstelių linijos dauginimosi laikas yra maždaug 2–3 dienos.
Adhezyvinė ar suspensinė:
P19 embrioninės karcinomos ląstelių linija yra adhezyvinė.
Subkultivavimo santykis:
P19 ląstelės turėtų būti subkultivuojamos kas 48 valandas, o šių ląstelių padalijimo santykis turėtų būti išlaikomas 1:10. Adhezinės ląstelės nuplaunamos 1X fosfato buferiniu tirpalu ir inkubuojamos su „Accutase“, kol ląstelės atsiskiria. Į ląsteles įpilama auginimo terpės, o ląstelės surenkamos centrifugavimo būdu. Surinktos ląstelės atsargiai resuspenduojamos ir išpilamos į naujus kolbelius.
Auginimo terpė:
DMEM/Ham's F12 terpė, kurioje yra 5 % veršelių serumo, 3,1 g/l gliukozės, 1,6 mM L-glutamino, 1,0 mM natrio piruvato, 15 mM HEPES ir 1,2 g/l NaHCO₃, naudojama P19 ląstelių kultūrai auginti.
Auginimo sąlygos:
P19 embrioninės karcinomos ląstelių linijos auginimui ir kultivavimui būtinas drėkinamas inkubatorius, nustatytas 37 °C temperatūrai su 5 % CO₂ tiekimu.
Laikymas:
Užšaldyti P19 ląstelių mėgintuvėliai turėtų būti laikomi žemesnėje nei -150 °C temperatūroje šaldiklyje arba skysto azoto garų fazėje, siekiant išlaikyti ląstelių gyvybingumą ilgesnį laiką.
Užšaldymo procesas ir terpė:
P19 ląsteles galima užšaldyti naudojant CM-1 arba CM-ACF terpes ir taikant lėto užšaldymo metodą, kuris apsaugo ląsteles nuo šoko ir išsaugo jų gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Užšaldytas P19 ląsteles galima atšildyti 37 °C vandens vonioje, greitai maišant mėgintuvėlį 40–60 sekundžių. Į ląsteles įpilama šviežios terpės ir jos centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės elementai. Ląstelių suspensija vėl suskystinama, o ląstelės supilamos į naują kolbą augimui.
Biologinio saugumo lygis:
P19 ląstelių linijai reikalingos 1 lygio biologinio saugumo laboratorijos sąlygos.
P19 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
Šiame skyriuje bus aptariami P19 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.
Privalumai
- Diferenciacijos potencialas: P19 ląstelės gali diferencijuotis į įvairius ląstelių tipus, įskaitant kardiomiocitus, neuronus ir mikroglijos ląsteles. Jų diferenciacijai reikalingi netoksiški vaistai, tokie kaip retinoinė rūgštis ir dimetilsulfoksidas (DMSO). Retinoinė rūgštis skatina neuronų, mikroglijos ir astroglijos vystymąsi, o DMSO inicijuoja plakančių kardiomiocitų ir lygiųjų raumenų ląstelių vystymąsi. Taigi, P19 ląstelės yra naudingos tiriant ląstelių diferenciaciją ir vystymosi procesus.
- Modelio sistema: Pluripotentinė embrioninė karcinomos ląstelių linija P19 yra vertingas modelis ankstyvojo embriono vystymosi tyrimams. Mokslininkai naudoja P19 ląsteles, siekdami išsiaiškinti ląstelių signalizacijos kelius bei šiuose procesuose dalyvaujančius ląstelinio ir molekulinio lygmens mechanizmus.
Trūkumai
- Pelių kilmė: P19 yra pelių embrioninės karcinomos ląstelių linija. Todėl tyrimų, kuriuose naudojamos šios ląstelės, rezultatai gali ne visiškai atitikti žmogaus biologiją ir procesus.
P19 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
P19 ląstelės turi keletą mokslinių pritaikymų dėl savo diferenciacijos gebėjimo ir svarbos vystymosi biologijai bei kamieninių ląstelių tyrimams. Kai kurie svarbūs P19 embrioninės karcinomos ląstelių mokslinių tyrimų pritaikymai apima:
- Ląstelių diferenciacijos tyrimai: Kaip žinoma, P19 ląstelės gali diferencijuotis į neuronus, mikroglijos ląsteles, lygiųjų raumenų ląsteles ir kardiomiocitus; todėl jos plačiai naudojamos ląstelių diferenciacijos procesams tirti. Be to, jos padeda tirti nervų ir širdies vystymąsi bei juos lemiančius mechanizmus. 2018 m. atliktas tyrimas parodė, kad reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) nukreipia P19 ląstelių diferenciaciją į konkrečius ląstelių tipus ir užkerta kelią kitų tipų indukcijai [3]. Kitas tyrimas nagrinėjo retinoinės rūgšties reguliuojamą nervų ląstelių diferenciacijos procesą ir nustatė PI3K/Akt/GSK3β signalinio kelio dalyvavimą [4].
- Vystymosi biologija: P19 ląstelės yra neįkainojamas modelis ankstyvojo embriono vystymosi tyrimams. Jos padeda mokslininkams suprasti sudėtingus biologinius procesus, pavyzdžiui, audinių formavimąsi embriono vystymosi metu. Tyrime, kuriame buvo naudojamos P19 ląstelės, buvo tirti molekuliniai veiksniai, prisidedantys prie skilvelių pertvaros defekto (VSD) susidarymo. Tyrimo rezultatai parodė, kad ilga nekoduojanti RNR SNHG6 prisideda prie VSD susidarymo, neigiamai reguliuodama miRNA-101 ir aktyvuodama Wnt/β-katenino kelią [5].
- Vaistų tyrimai: P19 pelių embrioninės karcinomos ląstelių linija taip pat naudojama potencialių vaistų kandidatų atrankai. Viename tyrime buvo naudojami diferencijuoti P19 ląstelių neuronai ir tiriamas sintetinio L-Dopa bei Mucuna pruriens sėklų vandeninio ekstrakto neuroprotektyvus acetilcholinoesterazės slopinamasis poveikis. Rezultatai parodė, kad augalinis ekstraktas, palyginti su L-Dopa, davė daug žadančių rezultatų [6].
Įsigykite P19 ląstelių liniją jau šiandien
P19 ląstelės: Moksliniai straipsniai
Šioje straipsnio dalyje bus aptarti keli įdomūs moksliniai straipsniai, kuriuose nagrinėjamos P19 ląstelės.
Šis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Oncology Reports“ 2017 m. Tyrime buvo iškelta hipotezė, kad hipofizės lytiniai hormonai skatina teratokarcinomos ląstelių linijų, įskaitant P19 ląsteles, adheziją, proliferaciją ir migraciją.
Ilgas nekoduojantis RNR uc.4 veikia ląstelių diferenciaciją per TGF-beta signalizacijos kelią
Šiame 2018 m. žurnale „Experimental & Molecular Medicine“ paskelbtame straipsnyje, naudojant P19 ląsteles, buvo tirta ilgos nekoduojančios RNR uc.4 funkcija. Tyrimo rezultatai parodė, kad uc.4 veikia ląstelių diferenciaciją, moduliuodama TGF-beta signalizacijos kelią.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2018 m. žurnale „Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine“. Tyrimas parodė, kad natūralus smegenų audinio ekstraktas ir trimatė ląstelių kultūra gali paspartinti P19 embrioninės karcinomos ląstelių diferenciaciją į nervines ląsteles.
Šis tyrimas buvo paskelbtas 2020 m. žurnale „Journal of Ethnopharmacology“. Tyrime buvo pateikta hipotezė, kad Cichorium intybus L. lapų ekstraktas gali indukuoti P19 embrioninės karcinomos ląstelių diferenciaciją į insulino gaminančias kasos β ląsteles.
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Molecules“ (2022 m.). Šiame tyrime buvo tiriamas Mucuna pruriens sėklų ekstrakto neuroprotektyvusis ir acetilcholinoesterazės slopinamasis poveikis P19 ląstelių neuronams.
Ištekliai apie P19 ląstelių liniją: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami keli ištekliai apie P19 ląsteles.
- P19 ląstelių neuronų diferenciacijos protokolas: šiame straipsnyje pateikiamas P19 ląstelių neuronų diferenciacijos protokolas ir kita naudinga informacija apie P19 ląstelių diferenciaciją.
- P19 ląstelių transfekcija: Ši nuoroda padės susipažinti su P19 ląstelių transfekcijos protokolu.
Šioje nuorodoje pateikiamas P19 ląstelių kultivavimo protokolas.
- P19 ląstelės: šioje svetainėje pateikiama visa naudinga informacija apie P19 ląstelių liniją, įskaitant jos kultivavimo sąlygas, P19 ląstelių terpę, ląstelių dalijimą ir daug daugiau.
P19 ląstelių linijos tyrimas: Dažniausiai užduodami klausimai
Literatūra
- McBurney, M.W., P19 embrioninės karcinomos ląstelės. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135–40.
- Bressler, J. ir kt., P19 embrioninės karcinomos ląstelių linija: modelis genų ir aplinkos sąveikos tyrimams. „Cell Culture Techniques“, 2011: p. 223–240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey ir G. Rödel, „Mitochondrijų reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) reguliuoja pelių pluripotentinių P19 ląstelių diferenciaciją“. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180–191.
- Fu, F. ir kt., „All-trans-retinoidinė rūgštis indukuoja P19 ląstelių diferenciaciją į neuronus, dalyvaujančius PI3K/Akt/GSK3β signalizacijos kelyje“. „Journal of Cellular Biochemistry“, 2020. 121(11): p. 4386–4396.
- Jiang, Y. ir kt., Ilga nekoduojanti RNR SNHG6 prisideda prie skilvelių pertvaros defekto susidarymo per neigiamą miR-101 reguliavimą ir Wnt/β-katenino kelio aktyvaciją. „Die Pharmazie – An International Journal of Pharmaceutical Sciences“, 2019. 74(1): p. 23–28.
- Kamkaen, N. ir kt., „Mucuna pruriens“ sėklų vandeninis ekstraktas, palyginti su sintetinės L-dopos preparatu, pasižymėjo geresniais neuroprotektyviniais ir acetilcholinoesterazės slopinimo poveikiais. „Molecules“, 2022 m. 27(10): p. 3131.