„Neuro-2a“ ląstelių linija
„Neuro-2a“ yra pelių kilmės nervinių ląstelių linija, plačiai naudojama neuromokslų tyrimuose. Dažniausiai šios ląstelės naudojamos nervų sistemos vystymosi, diferenciacijos, neurotoksinio poveikio, ląstelių signalizacijos kelių ir aksonų augimo tyrimams. Be to, jos naudojamos vaistų kūrimui ir atrankai.
Šiame straipsnyje aptariami svarbūs „Neuro-2a“ neuroblastomos ląstelių aspektai, kurie gali būti naudingi prieš pradedant su jomis dirbti. Jame daugiausia bus aptariama:
- Bendrieji „Neuro-2a“ ląstelių požymiai ir kilmė
- Informaciją apie „Neuro-2a“ ląstelių linijos kultivavimą
- Neuro-2a ląstelių linijos privalumus ir trūkumus
- Neuro-2a ląstelių linijos taikymą moksliniuose tyrimuose
- Moksliniai straipsniai, kuriuose aptariamos „Neuro-2a“ ląstelės
- Ištekliai, susiję su Neuro-2a ląstelėmis: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Bendrieji Neuro-2a ląstelių požymiai ir kilmė
Šioje straipsnio dalyje bus aptarta Neuro-2a ląstelių linijos istorija ir pagrindinės charakteristikos, kurias būtina žinoti prieš pradedant su ja dirbti. Čia sužinosite: Kas yra Neuro-2a ląstelių linija? Kokia yra Neuro-2a ląstelių linijos kilmė? Kas yra „Neuro-2a“ ląstelių diferenciacija? Koks yra „Neuro-2a“ ląstelės dydis? Kokia yra „Neuro-2a“ ląstelių morfologija?
- „Neuro-2a“ ląstelės kilusios iš albinosinės pelės (A kamieno) savaiminio naviko (neuroblastomos). Ląstelių liniją sukūrė R.J. Klebe ir F.H. Ruddle.
- „Neuro-2a“ neuroblastomos ląstelės pasižymi neuronine ir ameboidine kamieninių ląstelių morfologija.
- Neuro-2a ląstelių aukštis yra 12 mikrometrų [1].
- Neuro-2a ląstelių chromosomų skaičius gali svyruoti nuo 59 iki 193, o modalinis skaičius yra 95. Šių neuroblastomos ląstelių kariotipas yra nestabilus ir svyruoja nuo 94 iki 98 chromosomų.
Informacija apie „Neuro-2a“ ląstelių linijos auginimą
„Neuro-2a“ ląstelės plačiai naudojamos neuromokslų tyrimų laboratorijose. Prieš pradėdami dirbti su šiomis ląstelėmis, turėtumėte susipažinti su žemiau pateikta būtina informacija apie ląstelių kultūrą. Tai gali padėti jums lengviau susidoroti su šia užduotimi. Sužinosite: kas yra „Neuro-2a“ ląstelių kultūros terpė? Kaip auginti „Neuro-2a“ ląsteles? Koks yra „Neuro-2a“ ląstelių dauginimosi laikas? Koks yra „ Neuro-2a “ ląstelių sėjimo tankis? Koks yra „Neuro-2a“ ląstelių kultivavimo protokolas? Kas yra „Neuro-2a“ ląstelių terpė?
Pagrindiniai „Neuro-2a“ ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
„Neuro-2a“ ląstelių dauginimosi laikas yra maždaug 70 valandų.
Adhezinės ar suspensinės:
„Neuro-2a“ yra adhezyvinė ląstelių linija.
Sėjimo tankis:
Optimalus Neuro-2a ląstelių linijos sėjimo tankis yra 1 x 10⁴ ląstelių/cm². Prieš sėjimą ląstelės nuplaunamos fosfato buferiniu tirpalu be magnio ir kalcio (1x). Vėliau įpilamas perėjimo tirpalas („Accutase“), o ląstelės inkubuojamos 8–10 minučių kambario temperatūroje. Po ląstelių atskyrimo įpilama šviežia terpė, o ląstelės centrifuguojamos. Surinktas ląstelių nuosėdas atsargiai resuspenduojamas, o ląstelės supilamos į auginimo indą.
Auginimo terpė:
Neuro-2a ląstelėms kultivuoti naudojama EMEM terpė. Ji sudėtyje turi 10 % FBS, 2 mM L-glutamino, 1,5 g/l NaHCO₃, EBSS, 1 mM natrio piruvato ir NEAA, užtikrinančių idealias ląstelių augimo sąlygas. Terpę reikia keisti 1–2 kartus per savaitę.
Auginimo sąlygos:
„Neuro-2a“ kultūros auginamos 37 °C drėgname inkubatoriuje, prijungtame prie 5 % CO₂ tiekimo.
Laikymas:
Ląstelės ilgam laikymui turi būti laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje itin žemos temperatūros elektriniame šaldiklyje arba skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
Neuro-2a ląstelėms užšaldyti naudojamos CM-1 arba CM-ACF terpės. Ląstelės užšaldomos taikant lėto užšaldymo procesą, kurio metu temperatūra krinta tik 1 °C per minutę. Tai apsaugo ląsteles nuo šoko ir išsaugo jų gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Norint atšildyti užšaldytas kultūras, kolba 40–60 sekundžių laikoma 37 °C vandens vonioje, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Tada įpilama auginimo terpės, o ląstelės centrifuguojamos. Šis etapas padeda pašalinti užšaldymo terpės komponentus. Po to ląstelių nuosėdos vėl suspenduojamos, o ląstelės perkeliamos į naują kolbą, pripildytą auginimo terpės. Vėliau ląstelės ne mažiau kaip 24 valandas laikomos inkubatoriuje 37 °C temperatūroje.
Biologinio saugumo lygis:
Neuro-2a kultūrų tvarkymui ir priežiūrai privaloma naudoti 1 lygio biologinio saugumo laboratorijos sąlygas.
- Neuro-2a ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
- Neuro-2a ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose
- Neuro-2a ląstelių linijos auginimo informacija
- Neuro-2a ląstelių bendrosios savybės ir kilmė
- 5. Moksliniai straipsniai apie „Neuro-2a“ ląsteles
- Ištekliai, susiję su „Neuro-2a“ ląstelėmis: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
Neuro-2a ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
„Neuro-2a“ ląstelės turi tam tikrų privalumų ir trūkumų, kurie jas išskiria iš kitų neuroninių ląstelių linijų. Čia išvardyti kai kurie svarbiausi šių ląstelių privalumai ir trūkumai.
Privalumai
Neuro-2a pelių neuroblastomos ląstelių linijos privalumai yra šie:
-
Lengva prižiūrėti:
Neuro-2a ląstelių linija nereikalauja sudėtingų ar painių ląstelių kultivavimo procedūrų. Jas lengva kultivuoti ir prižiūrėti mokslinių tyrimų laboratorijose.
-
In vitro neuronų ląstelių modelis:
„Neuro-2a“ yra patogus neuroninių ląstelių modelis, kurį mokslininkai plačiai naudoja neuronų vystymosi ir diferenciacijos tyrimuose.
Trūkumai
„Neuro-2a“ ląstelių trūkumai yra šie:
-
Pelių kilmė:
„Neuro-2a“ yra pelių kilmės, todėl mokslininkai turėtų būti atsargūs, ekstrapoliuodami pelių tyrimų rezultatus į žmogaus sveikatą ir ligas, nes pelių ir žmogaus biologija gali labai skirtis.
Neuro-2a ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose
„Neuro-2a“ ląstelės turi daug pritaikymo galimybių neuromokslų tyrimų srityje. Čia aptariami keli perspektyvūs šios ląstelių linijos panaudojimo būdai:
- Nervų sistemos vystymasis: „Neuro-2a“ yra in vitro neuronų ląstelių modelis, plačiai naudojamas neuronų vystymosi ir susijusių procesų, tokių kaip diferenciacija, aksonų augimas ir sinapsių formavimasis, tyrimams. 2020 m. atliktame tyrime „Neuro-2a“ ląstelės buvo panaudotos siekiant ištirti mikroRNR-124 vaidmenį retinoinės rūgšties indukuotoje neuronų ląstelių diferenciacijoje [2]. Kituose tyrimuose buvo tiriamas Neuro-2a retinoinės rūgšties receptoriaus gama (RARG) ir miRNA-124 ekspresija neuroblastomos ląstelių linijoje (N2A). Šiame tyrime buvo iškelta hipotezė, kad miR-124 veikia RARG ir slopina neuritų augimą [3].
- Neurotoksinis poveikis: „Neuro-2a“ taip pat naudojama vaistų, cheminių medžiagų ar aplinkos veiksnių toksiniam poveikiui nervinėms ląstelėms įvertinti. Pavyzdžiui, Zhihong Yin ir jo bendradarbių atliktame tyrime, naudojant „Neuro-2a“ ląsteles, buvo tiriamas aplinkos cheminės medžiagos bisfenolio A (BPA) neurotoksinis poveikis. Jie pastebėjo, kad BPA slopina neuronų ląstelių diferenciaciją ir proliferaciją, sutrikdydamas jų ląstelinį ir sinapsinį vientisumą [4].
- Vaistų atranka: „Neuro-2a“ ląstelės taip pat naudojamos įvairių vaistų, junginių ir natūralių produktų terapiniam aktyvumui įvertinti. Pavyzdžiui, viename tyrime, naudojant „Neuro-2a“ ląsteles, buvo tiriamas ginkgo biloba augalo ekstrakto antioksidacinis potencialas. Be to, tyrime buvo iškelta hipotezė, kad jis mažina Aβ agregaciją ir gali būti potencialus Alzhaimerio ligos gydymo būdas [5].
5. Moksliniai straipsniai, kuriuose nagrinėjamos „Neuro-2a“ ląstelės
Čia pateikiami keli įdomūs moksliniai straipsniai, kuriuose aptariama Neuro-2a ląstelių linija.
Šiame 2018 m. žurnale „Journal of Natural Medicines“ paskelbtame tyrime buvo tiriamas iš baltųjų pipirų (P. nigrum) išskirtų alkamidų terapinis poveikis „Neuro-2a“ neuroninėms ląstelėms.
Šiame 2020 m. žurnale „Acta Biochimica et Biophysica Sinica“ paskelbtame tyrime buvo iškelta hipotezė, kad Nkx2.1 genas atlieka svarbų vaidmenį pelių smegenų vystymuisi, reguliuodamas Shh signalų kaskadą.
Šis straipsnis, paskelbtas žurnale „Toxicology and Industrial Health“ (2023 m.), teigia, kad aplinkos cheminė medžiaga bisfenolis A sukelia neurotoksinį poveikį „Neuro-2a“ ląstelėse ir sutrikdo jų sinapsų bei citoskeleto funkcionavimą.
Šiame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Pharmaceuticals“ (2021 m.), teigiama, kad vaistas heksarelinas moduluoja PI3K/AKT ir MAPK kaskadą neuroblastomos ląstelėse (Neuro-2a) ir slopina vandenilio peroksido sukeltą Neuro-2a ląstelių apoptozę.
Šiame moksliniame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine“ (2021 m.), teigiama, kad „Emblica officinalis“ vaisių ekstraktas slopina neurouždegimą Neuro-2a ląstelėse ir todėl gali būti naudingas sergant neurouždegiminėmis ligomis.
Ištekliai apie „Neuro-2a“ ląsteles: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami internete prieinami ištekliai apie „Neuro-2a“ ląsteles. Juose rasite „Neuro-2a“ ląstelių kultivavimo ir transfekcijos protokolus.
- Neuro-2a transfekcijos protokolas: „Neuro-2a“ yra tinkamas transfekcijos šeimininkas. Ši nuoroda padės jums susipažinti su šios ląstelių linijos transfekcijos protokolu. „Neuro-2a“ transfekcijos efektyvumas skiriasi priklausomai nuo naudojamų reagentų.
Šioje nuorodoje pateikiamas Neuro-2a ląstelių kultivavimo protokolas.
- Neuro-2a ląstelių kultivavimo protokolas: Ši nuoroda padės susipažinti su Neuro-2a ląstelių subkultivavimo protokolu.
- „Neuro-2a“ ląstelės: Šioje svetainėje pateikiama išsami informacija apie „Neuro-2a“ ląstelių auginimo terpes, sėjimo tankį bei subkultivavimo ir kriokonservuotų bei proliferacinių kultūrų tvarkymo protokolus.
Nuorodos
- Lulevich, V., ir kt., Vienos ląstelės mechanika suteikia jautrią ir kiekybinę priemonę tirti amiloido-beta peptido ir neuroninių ląstelių sąveikas. „Proc Natl Acad Sci U S A“, 2010. 107(31): p. 13872–7.
- You, Q. ir kt., miR-124 vaidmuo reguliuojant retinoinės rūgšties indukuotą Neuro-2A ląstelių diferenciaciją. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133–1139.
- Su, X. ir kt., MikroRNR-124 veikia retinoinės rūgšties receptorių gama ir slopina neuritų augimą. „Neuropharmacology“, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z. ir kt., Bisfenolio A poveikis sukėlė neurotoksinį poveikį ir buvo susijęs su sinapsėmis bei citoskeletu Neuro-2A ląstelėse. „Toxicology in Vitro“, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L. ir kt., Ginkgo biloba ekstraktas (EGb) slopina oksidacinį stresą „Neuro 2A“ ląstelėse, kuriose pernelyg ekspresuojamas APPsw. „BioMed Research International“, 2019. 2019.