NIH-3T3 ląstelės: fibroblastų tyrimų pažanga ir NIH-3T3 taikymo sritys
NIH-3T3 ląstelių linija, 1962 m. Niujorko universiteto medicinos mokykloje Howardo Greeno ir Džordžo Todaro sukurta iš 17 dienų amžiaus Šveicarijos albinų pelių embriono audinio, tapo pagrindiniu biomedicininių tyrimų ištekliu. NIH-3T3 ląstelės, pripažintos dėl savo didelio jautrumo leukemijos ir sarkomos virusų židinių susidarymui, yra svarbus įrankis daugybei mokslinių tyrimų, įskaitant virusinės onkologijos tyrimus, genų ekspresijos analizę ir ląstelių augimo dinamikos tyrinėjimus. Pavadinimas „3T3“ atspindi ląstelių kultivavimo metodą, reiškiantį „3 dienų perkėlimo“ intervalą su pradiniu pasėjimo tankiu 3 × 10^5 ląstelių, ir pabrėžia standartizuotas sąlygas, kuriomis šios ląstelės buvo pirmą kartą kultivuotos ir padaugintos.
- Auginimo terpė
- Žr. produkto puslapį
- Padvigubėjimo laikas
- Žr. produkto puslapį
- Augimo tipas
- Adhezinis
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- „Cytion“ — Užsisakykite NIH-3T3
Įvairios NIH-3T3 ląstelių morfologijos ir taikymo sritys
Viena iš pagrindinių NIH-3T3 ląstelių savybių yra jų morfologinis prisitaikymas, kuris labai skiriasi priklausomai nuo kultūros konfluencijos. Esant mažesniam tankiui, šios fibroblastų ląstelės turi verpstės formos, pavienės ląstelės struktūrą, o pasiekus konfluenciją, jos virsta tankiais, sūkuriais primenančiais modeliais. NIH-3T3 ląstelės, kurių vidutinis skersmuo yra apie 18 μm, yra universalus modelis išsamiems ląstelių biologijos tyrimams, pradedant audinių atsinaujinimo mechanizmais ir baigiant sudėtingais ląstelių ciklo reguliavimo keliais.
Informacija apie auginimą
Pagrindinė informacija apie kultūravimą:
Populiacijos padvigubėjimo laikas: Maždaug 20 valandų.
Augimo tipas: adhezinės kultūros.
Sėjimo tankis: rekomenduojamas – 3–4 x 10^4 ląstelių/cm^2.
Auginimo terpė: DMEM arba Ham's F12, papildyta 5 % FBS ir 2,5 mM L-glutaminu.
Auginimo sąlygos: Laikyti 37 °C temperatūroje drėgname inkubatoriuje su 5 % CO₂.
Laikymas: Laikyti temperatūroje žemiau -195 °C skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo metodas: naudokite CM-1 arba CM-ACF terpę; taikykite lėto užšaldymo metodą (1 °C temperatūros kritimas).
Atšildymo protokolas: greitas atšildymas 37 °C vandens vonioje, po to centrifugavimas, siekiant pašalinti užšaldymo terpę, ir vėl suspendavimas auginimo terpėje.
Biologinio saugumo lygis: Kultivavimui reikalingas 1 biologinio saugumo lygis.
Šveicarijos albinosinė pelė laboratorijoje.
NIH 3T3 ląstelių naudojimo privalumai ir trūkumai
Privalumai
Transfekcijos efektyvumas: NIH-3T3 ląstelės, žinomos dėl aukšto transfekcijos efektyvumo, puikiai tinka tiek laikinos, tiek stabilios genų ekspresijos tyrimams, nes su jomis galima taikyti įvairias transfekcijos technikas.
Nauda kaip maitinančiojo sluoksnio: Šios ląstelės dažnai naudojamos kaip maitinančiojo sluoksnio pagrindas bendroms kultūroms su tokiomis ląstelėmis kaip keratinocitai ir kamieninės ląstelės, nes išskiria augimo faktorius, skatinančius bendrai kultivuojamų ląstelių augimą.
Kamieninių ląstelių tyrimai: NIH-3T3 ląstelės yra pirmenybinis pasirinkimas kamieninių ląstelių tyrimuose, siekiant sukelti pluripotentiškumą be genetinės modifikacijos ir užtikrinti palankią aplinką kamieninių ląstelių diferenciacijai.
Kultūros stabilumas: NIH-3T3 ląstelės žinomos dėl savo stabilumo ir retų savaiminės transformacijos atvejų. Tačiau tam tikromis sąlygomis arba po sąlyčio su tam tikrais onkogenais ar mutagenais NIH-3T3 ląstelės gali patirti spontanišką transformaciją. Ši transformacija gali lemti vėžinių savybių atsiradimą, pavyzdžiui, nekontroliuojamą augimą, kontaktinio slopinimo praradimą ir gebėjimą formuoti navikus, kai jos įšvirkščiamos į jautrius šeimininkus.
Trūkumai
Nenuoseklus ląstelių dydis: pailgos, verpstės formos NIH-3T3 ląstelių morfologija gali skirtis, o tai apsunkina vaizdų analizę atliekant tyrimus.
Jautrumas infekcijoms: Šios ląstelės yra linkusios užsikrėsti bakterinėmis ir mikoplazminėmis infekcijomis, jei jos nėra laikomos griežtomis aseptinėmis sąlygomis, o tai gali turėti įtakos eksperimento patikimumui.
NIH-3T3 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
DNR transfekcijos tyrimai: NIH-3T3 ląstelių atsparumas jas daro idealias įvairių genų įvedimui ir jų funkcijų tyrimui, kaip parodė tyrimai, kuriuose buvo nagrinėjami tokie baltymai kaip NAB2-STAT6 ir jų vaidmuo ląstelių procesuose.
Ląsteliniai tyrimai: jų patikimumas apima įvairius tyrimus, įskaitant gyvybingumo, apoptozės ir židinių formavimosi tyrimus, suteikiančius įžvalgų apie ląstelių reakcijas skirtingomis eksperimentinėmis sąlygomis.
Ląstelių ciklo tyrimai: galimybė lengvai manipuliuoti šios ląstelių linijos ląstelių ciklu reguliuojant serumo koncentraciją leidžia ją naudoti kaip veiksmingą modelį ląstelių ciklo reguliavimui ir jo sutrikimams ligų kontekste tirti.
Pagerinkite savo mokslinius tyrimus naudodami NIH-3T3 ląsteles
Svarbiausių tyrimų, kuriuose naudojama fibroblastų ląstelių linija NIH 3T3, apžvalga
NIH-3T3 ląstelių linija buvo itin svarbi daugelyje mokslinių tyrimų projektų, apimančių įvairius ląstelių biologijos aspektus. Toliau pateikiami keli reikšmingi tyrimai, kuriuose buvo naudojamos šios ląstelės:
- NAB2-STAT6 junginio baltymo tyrimas: Šis tyrimas, paskelbtas žurnale „Biochemical and Biophysical Research Communications“, gilinasi į tai, kaip NAB2-STAT6 junginio baltymas veikia NIH-3T3 ląsteles, ypač jo vaidmenį skatinant ląstelių augimą ir migraciją per EGR-1 reguliavimą.
- APOBEC3 ir pelių leukemijos viruso tyrimas: Šiame žurnale „Virology“ paskelbtame tyrime nagrinėjama AKV pelių leukemijos viruso hipermutacija NIH-3T3 ląstelėse, kuriose ekspresuojamas pelių APOBEC3 genas.
- Epigenetinių vaistų antimetastazinio potencialo vertinimas: Šiame „Oncotargets and Therapy“ žurnale paskelbtame tyrime vertinamas hidralazino ir valproinės rūgšties antimetastazinis poveikis RAS transformuotoms NIH-3T3 ląstelėms.
- Baicaleino poveikis NIH-3T3 ląstelių proliferacijai ir kolageno sintezei: Šiame tyrime, naudojant NIH-3T3 ląsteles, nagrinėjama, kaip baicaleinas veikia ląstelių proliferaciją ir kolageno gamybą, moduliuodamas miR-9/insulino tipo augimo faktoriaus-1 ašį.
- Riboflavino trūkumo ir navikų susidarymo tyrimas: Šiame tyrime pateikiami duomenys apie tai, kaip riboflavino trūkumas NIH-3T3 ląstelėse prisideda prie navikų susidarymo, skatindamas ląstelių proliferaciją ir sutrikdydamas ląstelių ciklo genų reguliavimą.
Būtini ištekliai NIH-3T3 ląstelių tyrimams
Mokslininkams, norintiems dirbti su NIH-3T3 ląstelėmis, siūloma įvairių išteklių, padedančių atlikti ląstelių kultivavimą ir eksperimentus:
- Sferoidų formavimas NIH-3T3 ląstelėse: Šiame vaizdo įraše pateikiamas išsamus sferoidų formavimo aprašymas – tai 3D ląstelių kultivavimo technika, kurios metu NIH-3T3 ląstelės sujungiamos į grupes, taip sukuriant fiziologiškai tinkamesnį tyrimų modelį.
- NIH-3T3 ląstelių augimo stebėjimas: Naudojant „JuLI Br“ gyvų ląstelių vaizdavimo sistemą, šiame vaizdo įraše užfiksuota NIH-3T3 ląstelių augimo dinamika per 65 valandas, parodant ląstelių proliferaciją realiuoju laiku.
Šie ištekliai skirti padėti jūsų moksliniams tyrimams su NIH-3T3 ląstelėmis, suteikiant pagrindą sėkmingiems eksperimentams ir atradimams.
Dažniausiai užduodami klausimai apie NIH-3T3 ląsteles
Literatūra
- Rahimi, A.M., M. Cai ir S. Hoyer-Fender, „NIH3T3 fibroblastų ląstelių linijos heterogeniškumas“. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C. ir kt., „Pirmasis NIH 3T3 ląstelių linijos molekulinis citogenetinis aukštos skiriamosios gebos apibūdinimas, atliktas naudojant pelių daugiaspalvį dažymą“. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306–312.
- Wang, H.-X. ir kt., „Įvairių maitinančių ląstelių sluoksnių, naudojamų kartu su 3T3 fibroblastais, lyginamoji analizė triušių limbo kamieninių ląstelių kultivavimui“. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z. ir kt., Neuroninių ląstelių diferenciacija iš NIH/3T3 fibroblastų nustatytomis sąlygomis. „Development, growth & differentiation“, 2011. 53(3): p. 357–365.
- Park, Y.-S. ir kt., NAB2-STAT6 jungtinis baltymas tarpininkauja ląstelių proliferacijai ir onkogeninei progresijai per EGR-1 reguliavimą. „Biochemical and Biophysical Research Communications“, 2020. 526(2): p. 287–292.
- Mattsson, M., „Sloppymerase™ ekspresija NIH/3T3 ląstelėse: klaidų linkusios jungtinės polimerazės universalumo tyrimas“. 2021 m.
- Sahinturk, V. ir kt., Akrilamidas NIH/3T3 fibroblastų ląstelėse sukelia citotoksiškumą per apoptozę. „Toxicology and Industrial Health“, 2018. 34(7): p. 481–489.
- Lusi, E.A. ir F. Caicci, Pirmojo žmogaus retro-giganto viruso atradimas: jo morfologijos, retrovirusinės kinazės ir gebėjimo sukelti navikus pelėms aprašymas. „bioRxiv“, 2019: p. 851063.
- Endo, M. ir kt., E2F1–Ror2 signalizacija tarpininkauja koordinuotam transkripcijos reguliavimui, skatinančiam G1/S fazių perėjimą bFGF stimuliuotuose NIH/3T3 fibroblastuose. „The FASEB Journal“, 2020. 34(2): p. 3413–3428.
- Long, L. ir kt., Riboflavino trūkumas skatina navikų susidarymą HEK293T ir NIH3T3 ląstelėse, palaikydamas ląstelių proliferaciją ir reguliuodamas su ląstelių ciklu susijusių genų transkripciją. „The Journal of Nutrition“, 2018 m. 148(6): p. 834–843.