Paskelbta: 2023 m. spalio 17 d. | Paskutinis peržiūrėjimas: 2026 m. gegužė
A431 ląstelės: kilmė, auginimo sąlygos ir taikymas moksliniuose tyrimuose
A431 yra žmogaus epidermoidinės karcinomos ląstelių linija, gauta iš 85 metų moters odos. Tai viena iš plačiausiai naudojamų ląstelių linijų biomedicininiuose tyrimuose, ypač vėžio biologijoje, imunoonkologijoje, dermatologijoje ir vaistų atradimuose. A431 ląstelės labai intensyviai perprodukcina epiderminio augimo faktoriaus receptorių (EGFR) – vienoje ląstelėje yra apie 2–3 milijonai receptorių, maždaug 20–50 kartų daugiau nei normaliose epitelio ląstelėse – todėl jos yra aukščiausio lygio in vitro modelis EGFR signalizacijos tyrimams ir EGFR taikinio terapijų, tokių kaip cetuksimabas ir erlotinibas, bandymams. A431 ląsteles galima įsigyti tik iš „Cytion“, jūsų nepriklausomo Europos ląstelių banko.
- Rūšis / Kilmė
Žmogaus (moteris, 85 metų) - Audinys
Odos epidermis (epidermoidinė karcinoma) - Morfologija
Epitelinė, adhezyvinė - Padvigubėjimo laikas
80–100 valandų - Auginimo terpė
DMEM + 10 % FBS - Biologinio saugumo lygis
BSL-1 - Pagrindinė savybė
EGFR perprodukcija (~2–3 mln. receptorių/ląstelė) - Pagrindiniai biomarkeriai
EGFR (amplifikuotas), TP53 (mutantas), KRAS (natūralus tipas), PTEN (ekspresuojamas) - Produkto numeris
300112 — Užsakykite A431 ląsteles iš „Cytion“
- A431 ląstelės: bendrosios charakteristikos ir kilmė
- A431 ląstelių linija: informacija apie kultivavimą
- A431 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
- A431 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
- A431 palyginimas su kitomis odos vėžio ląstelių linijomis
- Moksliniai leidiniai, kuriuose aptariamos A431 ląstelės
- Ištekliai, protokolai ir vaizdo įrašai
- Dažnai užduodami klausimai
A431 ląstelės: bendrosios charakteristikos ir kilmė
Šiame skyriuje aptariamos pagrindinės A431 ląstelių linijos biologinės savybės, įskaitant jos kilmę, morfologiją, kariotipą ir EGFR perteklių, dėl kurio ji yra ypač vertinga moksliniams tyrimams.
A431 ląstelių linijos kilmė ir istorija
- A431, žmogaus odos vėžio ląstelių linija, buvo gauta iš 85 metų moters, sergančios epidermoidiniu karcinoma, epidermio [1]. Ją sukūrė D.J. Giard ir kt., kurie iš kietųjų navikų išaugino keletą kitų ląstelių linijų.
- Ši ląstelių linija buvo plačiai platinama ir patvirtinta nepriklausomų ląstelių bankų visame pasaulyje, įskaitant „Cytion“, kaip patikimas ir atkartojamas mokslinių tyrimų modelis.
A431 morfologija ir kariotipas
- A-431 ląstelės turi epitelinę morfologiją. Jos agreguojasi ir sudaro ląstelių grupes standartinėmis kultivavimo sąlygomis.
- A431 odos vėžio ląstelių linija yra hipertriploidinė. Modalinis chromosomų skaičius yra 74, pasitaikantis maždaug 36 % ląstelių. Aukštesnės ploidijos taip pat pasitaiko maždaug 1 % ląstelių populiacijos.
EGFR ekspresija A431 ląstelėse
EGFR perteklius yra pagrindinis A431 ląstelių bruožas ir pagrindinė priežastis, dėl kurios jos plačiai naudojamos. A431 ląstelėse yra EGFR geno lokuso genominė amplifikacija, dėl kurios vienoje ląstelėje susidaro apie 2–3 milijonai EGFR receptorių – 20–50 kartų daugiau nei normaliose epitelio ląstelėse. Dėl to A431 yra aukso standartas teigiamai kontrolei:
- EGFR antikūnų patvirtinimą naudojant Vakarų dėmės metodą, srauto citometriją ir imunofluorescenciją
- EGFR nukreiptų monokloninių antikūnų, tokių kaip cetuksimabas ir panitumumabas, tyrimams
- EGFR tirozino kinazės inhibitorių (TKI), pvz., erlotinibo, gefitinibo ir afatinibo, vertinimą
- Tolimesnių signalizacijos kelių, įskaitant PI3K/AKT/mTOR ir RAS/MAPK/ERK, tyrimams
A431 ląstelių linija: auginimo informacija
Žinant ląstelių linijos auginimo reikalavimus, jos tvarkymas tampa nesudėtingas. Šiame skyriuje aptariami A431 ląstelių linijos dvigubėjimo laikas, auginimo terpė, perėjimai, kriokonservavimas ir biologinio saugumo reikalavimai.
Svarbiausi A431 ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
A431 ląstelių populiacijos dvigubėjimo laikas svyruoja nuo 80 iki 100 valandų.
Adhezinės ar suspensinės:
A431 yra adhezyvinė ląstelių linija.
Sėjimo tankis:
1 x 104 ląstelių/cm2 yra idealus tankis A431 ląstelių linijai. Esant šiam tankiui, ląstelės pasiekia konfluenciją maždaug per 4 dienas. Adhezyvinės ląstelės nuplaunamos PBS (1×) ir inkubuojamos su Accutase perėjimo tirpalu, tada resuspenduojamos kultūrinėje terpėje, centrifuguojamos ir išpilamos į naujas kolbas.
Auginimo terpė:
DMEM terpė, papildyta 10 % veršelių serumu (FBS), 4,5 g/l gliukozės, 1,0 mM natrio piruvatu, 1,5 g/l NaHCO3 ir 4 mM L-glutaminu. Terpę reikia keisti kas 2–3 dienas.
Auginimo sąlygos:
A431 vėžio ląstelės auginamos drėgname inkubatoriuje su 5 % CO2 esant 37 °C temperatūrai.
Laikymas:
Laikykite elektrinėje šaldiklyje arba skysto azoto garų fazėje esant žemesnei nei −150 °C temperatūrai, kad būtų išsaugotas ląstelių gyvybingumas.
Užšaldymo procesas ir terpė:
CM-1 arba CM-ACF yra rekomenduojamos A431 ląstelių užšaldymo terpės. Naudokite kontroliuojamo greičio lėto užšaldymo metodą (−1 °C/min.).
Atšildymo procesas:
Atšildykite užšaldytas A431 ląsteles greitai 37 °C vandens vonioje (40–60 sekundžių). Kai lieka nedidelis ledo gabalėlis, įpilkite auginimo terpės ir centrifuguokite. Suskystinkite surinktas ląsteles ir perkelkite į auginimo kolbas.
Biologinio saugumo lygis:
Dirbant su A431 kultūromis rekomenduojamas 1 biologinio saugumo lygis (BSL-1).
A431 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
A431 ląstelių linija turi išskirtinių savybių, dėl kurių ji yra labai naudinga, tačiau jos taikymas yra ribotas. Čia pateikiama objektyvi santrauka.
Privalumai
Pagrindiniai A431 vėžio ląstelių linijos privalumai yra šie:
EGFR perteklius
A431 ląstelės per daug ekspresuoja EGFR – 2–3 milijonus receptorių vienoje ląstelėje, todėl jos yra aukso standartas teigiamai kontrolei atliekant EGFR signalizacijos tyrimus ir anti-EGFR vaistų (cetuximabo, erlotinibo, gefitinibo) patvirtinimą.
Tumorigeniškumas
A431 ląstelės yra tumorigeninės ir lengvai suformuoja navikus imuninės sistemos sutrikimų turinčiose pelėse, todėl jos yra patikimas įrankis ksenotransplantacijos vėžio modeliams, skirtoms naviko augimo dinamikai tirti ir naujiems vėžio gydymo būdams in vivo vertinti.
Gerai apibūdintos
Dešimtmečius skelbti tyrimai reiškia, kad A431 ląstelės yra išsamiai apibūdintos genominiu, proteominiu ir fenotipiniu lygmeniu, suteikiant tvirtą mokslinį pagrindą eksperimentų planavimui.
3D sferoidų formavimas
A431 ląstelės lengvai formuoja kompaktiškus 3D sferoidus esant itin mažam prisijungimui, todėl jos yra suderinamos su moderniomis organoidų ir sferoidų atrankos platformomis, skirtomis vaistų įsiskverbimo ir veiksmingumo tyrimams.
Trūkumai
A431 ląstelių trūkumai yra šie:
Genetiniai pakitimai
A431 yra vėžio ląstelių linija su sukauptomis genetinėmis mutacijomis ir chromosomų pokyčiais (hipertriploidinė, modalinis skaičius 74), kuri gali nevisiškai atspindėti pirmines naviko savybes.
Mikrobų užteršimo rizika
A431 yra linkusios į bakterinį užteršimą. Norint gauti patikimus rezultatus, būtina laikytis griežtų aseptikos reikalavimų ir reguliariai atlikti mikoplazmos tyrimus.
Nereprezentatyvus visų EGFR navikų atžvilgiu
Kadangi EGFR ekspresija A431 ląstelėse yra nulemta genų amplifikacijos, o ne mutacijos (kaip plaučių vėžio atveju), gauti rezultatai gali nebūti tiesiogiai pritaikomi EGFR mutacijų turinčių navikų, pvz., nesmulkiųjų ląstelių plaučių vėžio (NSCLC), atveju.
A431 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
A431 ląstelių linija plačiai naudojama įvairiose mokslinių tyrimų srityse. Dėl savo unikalios EGFR biologijos, tumorigeniškumo ir gerai apibūdinto genomo ji yra viena iš universaliausių žmogaus vėžio ląstelių linijų.
- Vėžio biologija: A431 yra galingas įrankis, skirtas tirti ląstelių ir molekulių mechanizmus, skatinančius vėžio augimą, metastazavimą ir invaziją. Tyrimais buvo nustatytos PI3K/AKT/mTOR ir RAS/MAPK/ERK signalizacijos grandinės šioje ląstelių linijoje, o jų slopinimas paskatino A431 odos naviko ląstelių apoptozę [2, 3].
- EGFR taikinio terapijos tyrimai: A431 ląstelės yra etaloninis standartas vertinant anti-EGFR terapinius preparatus – monokloninius antikūnus (cetuximabą, panitumumabą) ir mažos molekulės TKI (erlotinibą, gefitinibą, afatinibą, osimertinibą).
- Vaistų tyrimai ir vertinimas: A431 ląstelės naudojamos naujų priešvėžinių vaistų kandidatų vertinimui. 2022 m. Rahim ir kt. tyrimas parodė galingą biologiškai sintezuotų sidabro nanodalelių iš Alstonia angustiloba antiproliferacinį poveikį A431 ląstelėms [4].
- Navikų ksenotransplantacijos modeliai: A431 ląstelės sukelia navikų susidarymą imunodeficituose peliuose, todėl galima kurti poodinius ir ortotopinius ksenotransplantacijos modelius in vivo veiksmingumo tyrimams. Lim ir kt. naudojo iš A431 gautus ksenotransplantatus, kad in vivo įvertintų egzogeninio EGF radiaciją jautrinantį poveikį [5].
- Odos toksiškumo ir dermatologijos tyrimai: A431 ląstelės plačiai naudojamos farmacijos ir kosmetikos įmonėse odos toksiškumui, odos pralaidumui ir vietiškai taikomų junginių saugumo profiliams įvertinti.
- 3D sferoidų ir organoidų modeliai: A431 ląstelės sudaro kompaktiškus 3D sferoidus esant itin mažam prisijungimui arba kabinamų lašelių sąlygomis, leidžiant atlikti fiziologiškai aktualesnius vaistų įsiskverbimo ir atsparumo tyrimus.
- EGFR antikūnų patvirtinimas: Dėl itin didelio EGFR tankio A431 ląstelės yra standartinė teigiamoji kontrolė anti-EGFR antikūnų patvirtinimui Western blot, imunofluorescencijos, IHC ir srauto citometrijos metodais.
A431 palyginimas su kitomis odos vėžio ląstelių linijomis
Tinkamos ląstelių linijos pasirinkimas yra labai svarbus eksperimento validumui. Štai kaip A431 ląstelės lyginamos su kitomis dažniausiai naudojamomis odos ir plokščialąstelinio vėžio ląstelių linijomis:
| Savybė | A431 | A375 (melanoma) | SCC-25 (burnos plokščialąstelinis vėžys) | HaCaT (keratinocitai) |
|---|---|---|---|---|
| Vėžio tipas | Epidermoidinė karcinoma | Piktybinė melanoma | Burnos plokščialąstelinė karcinoma | Imortalizuoti keratinocitai |
| EGFR ekspresija | +++ (~2–3 mln./ląstelė) | + (maža) | ++ (vidutinė) | ++ (vidutinė) |
| Tumorigeniškumas | Taip | Taip | Taip | Ne |
| Morfologija | Epitelinė, adhezyvinė | Verpstės formos, adhezinis | Epitelinis, adhezinis | Epitelinis, adhezinis |
| BSL | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Pagrindinė paskirtis | EGFR tyrimai, priešvėžinių vaistų bandymai | Melanomos biologija, BRAF inhibitoriai | Galvos ir kaklo vėžys, radiacijos tyrimai | Odos biologija, barjerinė funkcija |
Moksliniai straipsniai apie A431 ląsteles
Čia pateikiami keli svarbūs recenzuoti leidiniai, kuriuose aptariama A431 odos karcinomos ląstelių linija.
Paskelbta leidinyje „Materials Today Communications“ (2020 m.). Įvertintas poli-ε-kaprolaktono kurkuminu prisotintų nanopluoštų ir polivinilo alkoholio-AuNPs priešvėžinis potencialas prieš A431 vėžio ląsteles.
miRNA-221 skatina odos plokščialąstelinio karcinomo progresavimą, veikdamas PTEN
Paskelbta žurnale „Cellular & Molecular Biology Letters“ (2019 m.). Pateikta hipotezė, kad mikroRNR-221 atlieka onkogeninį vaidmenį odos plokščialąstelinėje karcinomoje, veikdama PTEN naviko slopinančio geno.
Paskelbta žurnale „BMC Complementary Medicine and Therapies“ (2016 m.). Parodyta, kad vinkristinas iš grybo Eutypella spp–CrP14 sukelia apoptozę A431 ląstelėse.
Paskelbta žurnale „Cells“ (2019 m.). Nustatyta, kad CDC42SE1 yra potencialus odos vėžio progresavimo biomarkeris, kurio ekspresijos sumažėjimas skatina navikų susidarymą A431 ląstelėse.
Metforminas slopina A431 ląstelių proliferaciją, moduliuodamas PI3K/Akt signalinį kelią
Paskelbta žurnale „Experimental and Therapeutic Medicine“ (2015 m.). Įrodyta, kad metforminas slopina A431 proliferaciją, reguliuodamas PI3K/Akt signalinį kelią.
Ištekliai, skirti A431 ląstelių linijai: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Šie ištekliai suteikia praktinių patarimų, kaip dirbti su A431 ląstelėmis laboratorijoje.
- A-431 ląstelių transfekcija — žingsnis po žingsnio vaizdo gidas, kaip transfekuoti A431 vėžio ląsteles.
- A431 vėžio ląstelių linija — „Cytion“ produkto puslapis — išsami informacija apie ląstelių kultūrą: auginimo terpė, sėjimo tankis, perėjimas, kriokonservavimas ir kokybės sertifikatai.
- A431 ląstelių kultivavimo protokolas — Trumpas išorinis protokolas, skirtas A431 ląstelių linijos kultivavimui, iš Bio-Protocol.
- Peržiūrėkite visas „Cytion“ odos vėžio ląstelių linijas — Susipažinkite su visomis „Cytion“ siūlomomis odos vėžio ląstelių linijomis.