Diterbitkan: 2023 | Terakhir ditinjau: Mei 2026

Teknik Disosiasi Kultur Sel

Disosiasi kultur sel merupakan langkah penting dalam pemeliharaan kultur sel. Langkah ini melibatkan pelepasan sel dari permukaan pertumbuhannya untuk memungkinkan subkultur atau panen. Bagian ini menguraikan dua metode utama: menggunakan buffer disosiasi bebas enzim dan menggunakan reagen enzimatik.

Menggunakan Buffer Disosiasi Sel Bebas Enzim

Metode ini bersifat lembut dan menjaga integritas sel tanpa menggunakan enzim:

1. Persiapan
   • Pastikan semua reagen telah dipanaskan hingga 37°C sebelum digunakan untuk menghindari guncangan pada sel.
2. Penghapusan Media Pertumbuhan:
   • Buang media pertumbuhan lama dari wadah kultur.
3. Pencucian
   • Bilas lapisan sel tunggal dengan 5 ml PBS bebas kalsium dan magnesium per botol T75 atau cawan 100 mm.
   • Goyangkan wadah dengan lembut selama 30 hingga 60 detik pada suhu kamar.
   • Sedot dan buang larutan pembilas.
   • Ulangi langkah pembilasan ini sekali lagi.
4. Disosiasi
   • Tambahkan sekitar 5 ml Buffer Disosiasi Sel bebas enzim ke dalam wadah.
   • Goyangkan perlahan pada suhu kamar selama 1 hingga 2 menit dan periksa disosiasi di bawah mikroskop.
   • Ketuk labu atau cawan pada telapak tangan untuk melepaskan sel-sel jika diperlukan.
   • Jika sel masih menempel, biarkan pada suhu kamar selama 2 hingga 5 menit lagi, dan ketuk kembali jika diperlukan, dengan menggunakan lebih banyak larutan pemisahan.
   • Setelah sel terlepas, tambahkan setidaknya 5 ml media pertumbuhan lengkap untuk menetralkan larutan pemisahan dan mengembalikan sel ke suspensi.
5. Pemeriksaan Viabilitas
   • Pantau viabilitas sel selama subkultur, pastikan tetap di atas 90%.

Menggunakan Reagen Lain untuk Disosiasi

Metode ini memungkinkan penggunaan berbagai reagen disosiasi:

1. Pembuangan Media Bekas
   • Buang media lama dari wadah kultur.
2. Pencucian Sel
   • Cuci sel dengan larutan garam seimbang yang bebas dari kalsium dan magnesium, atau gunakan EDTA.
   • Tuangkan larutan pencucian secara perlahan ke sisi yang berlawanan dengan sel dan goyangkan wadah selama 1 hingga 2 menit sebelum membuang larutan pencucian.
3. Disosiasi
   • Tambahkan 2 hingga 3 ml larutan disosiasi yang dipilih per 25 cm² permukaan pertumbuhan, pastikan seluruh lapisan sel terlapisi.
   • Inkubasikan wadah pada suhu 37°C dan goyangkan perlahan. Disosiasi biasanya terjadi dalam waktu 5 hingga 15 menit, tergantung pada garis sel.
   • Untuk sel yang sulit terlepas, ketuk wadah untuk mempercepat prosesnya.
   • Amati sel dengan cermat untuk mencegah paparan berlebih dan potensi kerusakan.
4. Panen Sel
   • Setelah sel terlepas sepenuhnya, biarkan sel mengendap di dasar wadah dengan meletakkannya dalam posisi tegak.
   • Tambahkan media lengkap, lalu sebar dan kumpulkan sel dengan memipet di atas lapisan sel.
   • Hitung dan lanjutkan dengan subkultur.

Dalam kedua metode tersebut, penting untuk menentukan kondisi optimal untuk setiap garis sel melalui pengamatan empiris. Proses ini harus menjaga viabilitas sel, yang harus diperiksa secara rutin agar melebihi 90% selama subkultur. Prosedur ini memberikan landasan bagi para peneliti untuk menyesuaikan berdasarkan persyaratan dan karakteristik spesifik dari garis sel mereka.

Gambaran Umum Teknik Subkultur Sel Adherent

Subkultur sel adheren yang efektif memerlukan pelepasan sel dari wadah kultur. Berbagai metode digunakan, masing-masing sesuai untuk jenis sel dan kondisi yang berbeda. Saat memilih metode disosiasi, sangat penting untuk mempertimbangkan kebutuhan spesifik garis sel dan tujuan eksperimen. Pemantauan viabilitas sel secara teratur, dengan target lebih dari 90% pada saat subkultur, sangat penting untuk kesehatan dan produktivitas kultur yang berkelanjutan. Berikut adalah ikhtisar dari prosedur-prosedur ini: