Garis Sel Jurkat E6.1

Jurkat E6.1 adalah klon dari garis sel Jurkat, garis sel limfosit T manusia yang diawetkan yang berasal dari darah tepi. Pertama kali dibuat pada tahun 1977, mereka digunakan dalam penelitian yang berkaitan dengan pensinyalan reseptor sel T, sel T dan terapi adopsi limfosit lainnya untuk melawan kanker, penelitian proto-onkogen yang berhubungan dengan darah, kelangsungan hidup sel, dan diferensiasi sel.

Dalam artikel ini, kami akan menyertakan semua informasi dan prasyarat yang perlu Anda pahami sebelum memulai pekerjaan Anda pada garis sel kloning Jurkat E6.1 yang meliputi:

Asal, Sejarah, dan Informasi Umum
Karakteristik Kultur Sel
Aplikasi Garis Sel Jurkat E6.1
Publikasi Penelitian
Keuntungan dan Keterbatasan
Sumber Daya Protokol, Video & Lainnya

1. Asal, Sejarah, dan Informasi Umum

Berikut adalah semua informasi yang diperlukan terkait dengan sejarah, asal usul, dan karakteristik umum garis sel Jurkat E6.1 dan penanganannya dalam kultur sel.

Jurkat E6.1 adalah garis sel limfosit-T manusia yang diabadikan. Garis sel kloning ini adalah turunan dari garis sel Jurkat yang diperoleh dari darah tepi seorang anak laki-laki berusia 14 tahun yang menderita leukemia limfoblastik akut pada tahun 1976. Setelah diisolasi dari darah, lini sel ini awalnya diberi nama JM, karena JM dan Jurkat menunjukkan bahwa lini sel ini diisolasi dari pasien yang sama. Garis sel Jurkat E6.1 dikloning dari turunan sel yang dikenal sebagai Jurkat-FHCRC.
Garis sel E6.1 berasal dari leukemia; garis sel ini digunakan untuk meningkatkan ekspresi IL-2 melalui simulasi dengan antibodi monoklonal atau lektin. Mereka mengekspresikan reseptor antigen sel T; oleh karena itu, garis sel ini dapat digunakan dalam studi gangguan sistem kekebalan tubuh dan penelitian onkologi kekebalan tubuh.
Morfologi sel dari sel Jurkat E6.1: Sel Jurkat E6.1 diisolasi dari pasien leukemia dan memiliki morfologi yang berubah dibandingkan dengan T-Limfosit yang menjadikannya garis sel abadi. Sel limfoblas terbentuk ketika limfosit naif diaktifkan oleh presentasi antigen oleh sel penyaji antigen. Hal ini menghasilkan peningkatan pertumbuhan pada nukleus, sitoplasma, mRNA dan protein.
Ukuran sel: Garis sel Jurkat E6.1 dikloning yang diabadikan dengan diameter yang lebih umum berkisar antara 10-16 μm (diameter dapat bervariasi sesuai dengan jenis suspensi). Garis sel ini memiliki bentuk sel yang sangat bulat.
Genom dan nomor kromosom: Garis sel ini adalah garis sel pseudodiploid limfosit-T manusia, dengan kromosom model kromosom 46. Ini juga menunjukkan bahwa kromosom modal hadir sekitar 74% dan menunjukkan tingkat poliploidi sekitar 5,3%. Studi kariotipe menunjukkan kariotipe dengan 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Kromosom X dan Y biasanya memiliki salinan reguler di sebagian besar garis sel.
Garis sel Jurkat vs garis sel E6.1 Jurkat: Jalur sel Jurkat adalah jalur sel induk utama yang pertama kali diisolasi dari pasien leukemia limfoblastik akut. Namun, garis sel Jurkat E6.1 adalah turunan kloning dari garis sel Jurkat-FHCRC.

Sel T melawan kanker: Imunoterapi sel T CAR.

2. karakteristik Kultur Sel

Poin-poin Penting untuk Kultur Sel B16

Waktu penggandaan populasi	Waktu penggandaan populasi garis sel Jurkat adalah sekitar 20,7 jam, memungkinkan perkembangan sel yang relatif cepat.
Patuh atau tidak patuh	E6.1 Garis sel Jurkat tumbuh dalam mode non-adheren, yang ada dalam suspensi baik sebagai pertumbuhan lapisan tunggal atau sebagai gumpalan yang mengambang bebas.
Kepadatan Penyemaian	Kepadatan pembenihan yang direkomendasikan untuk garis sel E6.1 Jurkat adalah 1,0-2,0 x 105 sel yang layak / mL untuk memastikan perlekatan yang sehat dan pertumbuhan sel yang optimal.
Media Pertumbuhan	Media pertumbuhan yang diperlukan untuk garis sel E6.1 Jurkat adalah Medium RPMI-1640 yang diformulasikan ATCC (ATCC 30-2001). Media lengkap disiapkan dengan menambahkan komponen yang ditentukan, termasuk serum sapi janin (ATCC 30-2002), untuk mencapai konsentrasi akhir 10%.
Kondisi Pertumbuhan	E6.1 Jurkat cell lines dapat dikultur dalam inkubator yang sesuai dengan 5% ketersediaan udara dan CO2 menggunakan media RPMI-1640 dan serum sapi janin.
Kondisi penyimpanan	Penyimpanan jangka panjang garis sel Jurkat dalam keadaan kultur beku harus disimpan pada suhu -130 derajat Celcius atau dalam nitrogen cair dalam fase uap. Menyimpannya pada suhu -70 derajat Celcius dapat menyebabkan hilangnya viabilitas sel.
Pembekuan	Alikuot sekitar 0,5-1,0 mL suspensi garis sel disimpan dalam tabung kriogenik untuk mempertahankan garis sel. Tabung-tabung ini kemudian ditempatkan dalam wadah penyimpanan kriogenik pada suhu -70 derajat Celcius. Tabung-tabung tersebut dipindahkan ke tangki nitrogen cair dan disimpan dalam fase uap pada hari berikutnya.
Pencairan	Untuk mencairkan garis sel Jurkat, botol suspensi sel harus ditempatkan dalam penangas air pada suhu 37 derajat Celcius. Suspensi dapat dicairkan selama 2 menit dengan agitasi lembut. Sangat penting untuk menjaga tutup botol di luar penangas air untuk mencegah kontaminasi garis sel.
Tingkat keamanan hayati	Pertumbuhan garis sel Jurkat membutuhkan tingkat keamanan hayati BSL-1 di laboratorium, memastikan tindakan pencegahan keamanan dasar diikuti.

Sel Jurkat E6.1 yang tumbuh berkelompok pada perbesaran 10x dan 20x.

3. aplikasi Garis Sel Jurkat E6.1

Garis sel Jurkat E6.1 paling banyak digunakan dalam penelitian dan mempelajari gangguan yang terkait dengan sistem kekebalan tubuh dan kanker yang terkait. Selain itu, telah cocok untuk mempelajari beberapa kompleksitas yang terkait dengan infeksi HIV karena reseptor sel T CD4 diperlukan untuk masuknya retroviral.

Beberapa bidang utama di mana garis sel ini digunakan dibahas di bawah ini:

Sistem Model untuk Pensinyalan Sel T dan Jalur Apoptosis: Jalur sel turunan leukemia sel T ini digunakan secara luas dalam penelitian yang melibatkan kaskade pensinyalan TCR. Jurkat E6.1 melepaskan lebih banyak IL-2 dan IL-8 yang kemudian membantu dalam aktivasi sel T dan memicu jalur inflamasi. Garis sel ini juga dikenal dengan Pyk2 terfosforilasi dan peningkatan produksi Vav1 yang secara krusial memengaruhi penataan ulang sitoskeletal aktin pada sel T. Segregasi TCR di Jurkat Cell line E6-1 juga dapat ditingkatkan dengan ekspresi paksa LFA-1 yang akibatnya meningkatkan pensinyalan TCR dan ekspresi IL-2. Proliferasi sel dan studi siklus sel juga dilakukan pada Jurkat E6.1 cell line. Mereka lebih disukai dalam mempelajari jalur apoptosis dan induksi kerusakan DNA oleh senyawa yang berasal dari sumber laut dan tumbuhan. Sebuah studi pada tahun 2013 mengevaluasi dampak media yang dikondisikan epigonal ikan hiu pada sel manusiadengan menggunakan garis sel ini. Demikian pula, dampak represif dari hirsutine yang berasal dari tanaman pada proliferasi sel dipelajari dalam garis sel Jurkat E6.1. Seringkali penelitian antikanker juga menggunakan Jurkat E6.1 untuk mengevaluasi target yang dipilih. Pengaruh neurotoksin laut seperti Brevetoxins (PbTx ) juga telah dipelajari dalam garis sel ini.

Studi HIV: Salah satu aplikasi paling signifikan dari garis sel Jurkat E6.1 adalah kemampuannya untuk berfungsi sebagai model yang cocok untuk studi HIV karena sifatnya yang memilih peristiwa pensinyalan yang berbeda yang menginduksi TCA. Garis sel Jurkat E6.1 tidak hanya digunakan untuk memahami aktivasi HIV tetapi juga dalam membedah mekanisme di balik laten HIV. Replikasi dan infeksi HIV telah banyak dipelajari dalam garis sel ini di mana mereka dapat mengalami pengeditan gen dan KO, seperti yang dilakukan oleh sebuah penelitian pada tahun 2021. Dampak pemberian obat pada infeksi HIV, seperti efavirenz kerja panjang (Efa) - enfuvirtide (Enf) Nanopartikel hibrida polimer-lipid yang dimuat bersama (PLN) pada masuknya virus menggunakan garis sel Jurkat E6.1. Jurkat E6.1 yang direkayasa dengan CRISPR/Cas9 telah digunakan beberapa kali untuk mempelajari mekanisme yang terlibat dalam masuknya HIV, replikasi, dan infeksi.

4. publikasi Penelitian

Berikut adalah beberapa contoh penting dari koleksi besar penelitian, termasuk garis sel Jurkat E6.1.

Metabolit selenium metilselenol mengatur ekspresi ligan yang memicu aktivasi kekebalan tubuh melalui reseptor limfosit NKG2D

Menggunakan Jurkat E6.1, diinkubasi dalam senyawa selenium yang berbeda untuk mempelajari ekspresi ligan dan ekspresi permukaan MICA/B.

Asam caracasine, sebuah ent-3,4-seco-kaurene, mendorong apoptosis dan diferensiasi sel melalui penghambatan jalur sinyal NFkB pada sel leukemia.

Memahami sitotoksisitas yang diinduksi oleh asam caracasine pada garis sel T manusia seperti Jurkat E6.1 dan HL-60.

Bukti Perkembangan Resistensi Obat terhadap Azidothymidine secara In Vitro pada Garis Sel Leukemia Limfositik T (Jurkat E6-1/AZT-100) dan pada Pasien Pediatrik dengan Infeksi HIV-1

Memanfaatkan Jurkat E6.1 yang diinkubasi jangka panjang dengan obat AZT untuk mempelajari resistensi Azidothymidine (AZT) pada pasien yang terinfeksi HIV-1.

Jurkat E6.1 Studi Garis Sel Mengenai Efek Beberapa Bio-Indol pada Fluiditas Membran

Penelitian ini menggunakan sistem analisis fluoresensi terpolarisasi untuk memahami dampak bio-indol, termasuk serotonin, triptofan, dan melatonin, terhadap fluiditas membran sel pada garis sel Jurkat E6.1.

Mekanisme molekuler induksi apoptosis pada sel Jurkat E6-1 oleh ekstrak alkaloid Tribulus terrestris

Ekstrak alkaloidturunan Tribulus terrestris menginduksi apoptosis pada sel Jurkat E6.1 untuk memahami mekanisme kerja yang mendasarinya.

Meningkatkan Ekspresi LFA-1 Meningkatkan Arsitektur Sinapsis Kekebalan Tubuh dan Pensinyalan Reseptor Sel T dalam Sel Jurkat E6.1

Pensinyalan reseptor sel T dalam sel Jurkat E6.1 ditingkatkan dengan meningkatkan ekspresi LFA-1 secara paksa.

5. keuntungan dan Keterbatasan

Seperti garis sel lainnya, Jurkat E6.1 memiliki kelebihan dan keterbatasan.

Keuntungan

Ada banyak alasan mengapa ini lebih disukai dalam aplikasi ini:

Mode Pertumbuhan
Jurkat E6.1 adalah garis sel suspensi dan non-adherent, yang berarti tumbuh tersuspensi dan tidak melekat pada permukaan kultur.
Ekspresi Gen
Garis sel Jurkat E6.1 mengekspresikan gen yang mengkode interleukin-2 (IL-2) dan CD3. Setelah dirangsang dengan antibodi monoklonal, lektin, atau ester phorbol terhadap kompleks antigenik T3, sel-sel ini telah terbukti menghasilkan IL-2 yang diamplifikasi.
Ekspresi Antigen
Garis sel Jurkat E6.1 mengekspresikan antigen CD3, yang terkait dengan aktivasi dan pensinyalan sel T.
Penanda Ekspresi
Garis sel mengekspresikan penanda reseptor antigen sel T (TCR), yang sangat penting dalam pengenalan sel T dan respons imun.
Penerapan untuk Transfeksi
Garis sel Jurkat clone E6.1 cocok untuk percobaan transfeksi inang, memungkinkan untuk memasukkan materi genetik eksogen ke dalam sel untuk berbagai tujuan penelitian.

Keterbatasan

Setelah keuntungan, mari kita bahas keterbatasan yang terkait dengan penggunaan garis sel Jurkat E6.1:

Transfeksi Sel dengan Vektor Virus
Mentransfeksi sel Jurkat E6.1 cukup menantang karena berasal dari sel T. Biasanya, vektor virus yang mahal dan memakan waktu diperlukan untuk modifikasi genetik. Vektor non-virus telah menunjukkan efisiensi transfeksi yang rendah dan toksisitas yang signifikan pada sel Jurkat.
Kontaminasi Bakteri
Kultur sel Jurkat E6.1 harus dipantau untuk potensi kontaminasi bakteri untuk memastikan integritas hasil eksperimen.
Kontaminasi Virus
Garis sel Jurkat E6.1 mengekspresikan berbagai reseptor kemokin dan tingkat CD4 yang rendah, memfasilitasi masuknya virus. Hal ini membuat mereka rentan terhadap virus yang menginfeksi sel T seperti HTLV dan HIV.

€430,00*

Konten: 1.5 milliliter

Harga belum termasuk pajak ditambah biaya pengiriman

cryovial

Nomor produk: 300223

6.sumber daya: Protokol, Video & Lainnya

Bagian ini akan membahas metode dan protokol untuk kultur dan transfeksi sel, serta video edukasi yang terkait dengan lini sel ini:

Protokol Kultur Sel

Berikut adalah beberapa prosedur kultur dasar yang harus diikuti untuk lini sel ini:

SOP Kultur Sel, Perbanyakan Jurkat: University of California juga menyediakan metode pada browser Genom USCS mereka untuk mengkultur Jurkat klon E6-1.
Jurkat, Kultur dan Penanganan Klon E6-1: Elabscience menyertakan protokol penanganan kultur di situs deskripsi produk mereka.

Protokol Transfeksi

Berikut adalah daftar berbagai protokol transfeksi yang tersedia:

Protokol Transfeksi Sel Jurkat Reagen Lipofectamine LTX: Protokol transfeksi Sel Jurkat yang menggunakan Lipofectamine LTX Reagent, dari ThermoFisher.
Protokol Amaxa ™ 4D-Nucleofector ™ untuk klon Jurkat E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG menyediakan protokol transfeksi untuk klon Jurkat E6.1 dari ATCC menggunakan 4D-Nucleofector® X Unit.

Video tentang Jurkat E6.1

Ada beberapa video yang sangat baik yang mencakup konsep kultur sel, prosedur, proliferasi, pelapisan, dan topik lainnya.

Melewati Sel:Dasar-dasar Kultur Sel: Ini adalah video yang bagus untuk panduan dasar melewati garis sel manusia oleh ThermoFisher.
Mencairkan Sel: Dasar-dasar Kultur Sel: Video ini memberikan instruksi dasar tentang kultur dan pencairan sel oleh ThermoFisher.
Protokol Transfeksi DNA Plasmid: Video ini berfokus pada protokol transfeksi DNA plasmid dengan Lipofectamine® LTX dan Reagen Plus™, oleh ThermoFisher.
Mengukur Apoptosis menggunakan Suspensi Sel Jurkat yang Diobati dengan 3 Mikromolar Staurosporin: Video ini menunjukkan cara melakukan uji apoptosis pada Celigo image cytometer menggunakan reagen Hoechst dan caspase 3/7 dari Nexcelom Bioscience.