Sel HuH7: Pintu Gerbang Menuju Penelitian Hepatoma dan HCV

Garis sel HuH7, yang berasal dari hepatoma manusia, mewakili kumpulan sel mirip epitel tumorigenik yang diawetkan. Garis ini, bersama dengan turunannya HuH7.5 dan HuH7.5.1, berfungsi sebagai pengganti praktis untuk hepatosit primer dalam konteks eksperimental. Ini terutama digunakan dalam model kultur sel untuk menyelidiki infeksi virus hepatitis C (HCV) dan patofisiologi hepatoma.

Asal dan Karakteristik Sel HuH7

Memahami asal-usul, fitur utama, dan kondisi kultur yang optimal dari garis sel HuH7 sangat penting sebelum penerapannya dalam penelitian.

Garis sel HuH7 didirikan oleh Sato, J, dan Nakabayshi, H pada tahun 1982, yang berasal dari garis keturunan kanker hepatosit yang sangat berbeda. Awalnya berasal dari karsinoma hepatoseluler pada pria Jepang berusia 57 tahun. Ditandai dengan kapasitasnya untuk menghasilkan berbagai zat yang relevan secara fisiologis, seperti albumin dan alfa-fetoprotein, sel HuH7 menunjukkan kerentanan yang tinggi terhadap infeksi HCV, sehingga cocok untuk digunakan dalam sistem replika HCV. Fitur ini membuat garis sel ini berharga untuk skrining dan pengembangan terapi anti-HCV. Sel HuH7 menampilkan morfologi seperti epitel, dengan bentuk heksagonal, dan menempel pada permukaan untuk membentuk monolayer 2D selama pertumbuhan .rata-rata, sel HuH7 memiliki diameter 21,9μm, cenderung ke arah penampilan yang lebih besar dan pipih . Garis sel HuH7 dicirikan oleh jumlah kromosom yang heterogen, biasanya berkisar antara 55 dan 63, yang mencerminkan variabilitas genetik dalam populasi sel. Heterogenitas ini merupakan konsekuensi dari tekanan selektif yang dihadapi selama kultur sel, dan dapat bervariasi di berbagai kondisi laboratorium.

Analisis Komparatif: Garis Sel HuH7 vs. HuH7.5

Garis sel HuH7.5, turunan dari HuH7, berbeda terutama karena mutasi missense pada gen RIG-I (DDX58), yang sangat penting untuk respons antivirus intraseluler. Mutasi ini meningkatkan kemampuan sel HuH7.5 untuk replikasi RNA HCV genomik dan subgenomik, yang membedakannya dari garis sel induk HuH7 dalam hal kegunaannya dalam penelitian virologi.

Membudidayakan Sel HuH7: Protokol Penting untuk Pertumbuhan Optimal

Sel HuH7, yang merupakan bagian integral dari berbagai studi penelitian, memerlukan kondisi kultur yang tepat untuk berkembang. Bagian ini mempelajari aspek fundamental dari kultur sel HuH7, memastikan pemeliharaan relevansi fisiologisnya dalam penyelidikan ilmiah.

Dinamika Waktu Penggandaan

Waktu penggandaan untuk sel HuH7 biasanya 24 jam, meskipun variasi dalam media kultur sel dapat memperpanjang periode ini menjadi 36-48 jam, menyoroti pengaruh kondisi lingkungan pada proliferasi sel.

Karakteristik Adhesi

Sel-sel HuH7 sebagian besar membentuk monolayer dua dimensi, melekat pada permukaan pelat kultur dan labu, menggarisbawahi preferensi mereka untuk substrat fisik yang stabil daripada kultur suspensi.

Kepadatan Pembibitan yang Optimal

Mempertahankan pertemuan sel HuH7 dalam kisaran 30-90% sangat penting untuk mencegah penurunan tingkat proliferasi di luar pertemuan 90%. Subkultur dengan accutase memfasilitasi pelepasan, memungkinkan penyemaian pada kepadatan yang disesuaikan dengan kebutuhan eksperimental, mulai dari tingkat optimal (2 × 10⁴ sel / cm²) hingga tingkat kejenuhan (6 × 10⁴ sel / cm²).

Persyaratan Nutrisi

Modified Eagle's Medium (DMEM) Dulbecco dengan kandungan glukosa yang tinggi dan dilengkapi dengan 10% fetal bovine serum (FBS) menyediakan lingkungan nutrisi yang ideal untuk sel HuH7. Pembaharuan medium secara teratur, idealnya 2-3 kali seminggu, sangat penting untuk kesehatan sel yang berkelanjutan.

Kondisi Lingkungan

Inkubator yang dilembabkan diatur ke 5% CO₂ dan 37 ° C secara optimal mendukung kultur sel HuH7, mensimulasikan kondisi fisiologis yang kondusif untuk aktivitas seluler.

Penyimpanan Jangka Panjang

Untuk pengawetan yang lebih lama, sel HuH7 harus disimpan dalam fase uap nitrogen cair, menjaga kelangsungan hidupnya untuk penelitian di masa depan.

Kriopreservasi dan Pemulihan

Menggunakan teknik pembekuan bertahap sangat penting untuk menjaga kelangsungan hidup sel selama kriopreservasi. Sel harus disuspensikan dalam media pembekuan yang dirancang khusus, seperti CM-1, untuk memastikan transisi yang mulus ke penyimpanan kriogenik. Setelah pencairan, kebangkitan yang cepat namun lembut dalam penangas air 37°C, diikuti dengan sentrifugasi untuk membuang media beku, dan resuspensi dalam media pertumbuhan segar, sangat penting untuk membangun kembali kultur sel.

Pertimbangan Keamanan Hayati

Mematuhi protokol Keamanan Hayati Level 1 disarankan untuk penanganan dan perbanyakan garis sel HuH7, selaras dengan standar keamanan dan etika dalam pengaturan laboratorium.

Dengan mematuhi kondisi kultur yang diuraikan dengan cermat ini, para peneliti dapat memastikan pertumbuhan yang kuat dan relevansi fisiologis sel HuH7 dalam eksplorasi ilmiah mereka, membuka jalan bagi penemuan terobosan dalam penelitian virus hepatoma dan hepatitis C.

Jelajahi sel HuH7 untuk terobosan ilmiah Anda

Sel HuH7: Keuntungan & Kerugian

Garis sel HuH7 menawarkan keuntungan dan keterbatasan pada saat yang bersamaan. Mari kita bahas potensi pro dan kontra dari lini sel ini, karena ini dapat membantu Anda memutuskan apakah cocok untuk eksperimen Anda.

Keuntungan dari garis sel HuH7

Sel HuH7 memiliki banyak fitur karakteristik yang membuatnya menarik untuk digunakan dalam penelitian.

• Perbanyakan yangmudah: Tidak seperti garis sel hepatoma manusia lainnya, garis sel HuH7 dapat ditumbuhkan tanpa penambahan serum dengan mudah; namun, CLS merekomendasikan penggunaan RPMI 1640 dengan 10% FBS dan 2 mM L-glutamin. Sel HuH-7 mengeluarkan faktor pertumbuhan yang membantu sel tumbuh tanpa serum.
• Fleksibilitas transfeksi: Garis selHuH7 banyak digunakan untuk tujuan transfeksi karena daya penerimaannya yang tinggi terhadap genom HCV. Oleh karena itu, sel-sel ini sangat penting untuk skrining dan pengembangan obat anti-HCV.
• Alternatif untuk hepatosit manusia: Garis sel HuH7 adalah pengganti yang sangat baik untuk hepatosit manusia. Ini dapat membantu para peneliti mempelajari transporter obat hati dan memahami interaksi obat tertentu dengan MRP (protein terkait resistensi multi-obat).
• Mengembangkan model tikus xenograft: Sel HuH7 telah digunakan untuk menghasilkan model tikus xenograft yang berasal dari garis sel. Model hewan ini dapat memberikan wawasan yang berharga bagi para peneliti tentang penghambat protein kinase dan terapi anti-kanker.
• Penelitian kanker: Garis sel HuH7 adalah garis sel kanker hati manusia, yang membantu para peneliti melakukan penelitian kanker hati.

Keterbatasan garis sel HuH-7

Ada beberapa keterbatasan yang terkait dengan kultur garis sel HuH7.

Kontaminasi mikroba: Kontaminasi bakteri adalah masalah yang paling umum dalam kultur sel. Ketika infeksi terjadi, hal itu dapat dibedakan melalui perubahan pH dan kekeruhan media kultur. Di antara kontaminasi bakteri, kontaminasi mikoplasma biasanya tidak terlihat. Namun, secara perlahan-lahan mempengaruhi morfologi, ekspresi gen, dan karakteristik lain dari garis sel.

Periode kultur: Meskipun garis sel HuH7 bersifat abadi, melebihi periode kultur dapat mempengaruhi kesehatan sel secara bertahap. Ini dapat memengaruhi tingkat proliferasi dan ekspresi gen, yang dapat mengurangi reproduktifitas hasil. Untuk garis sel HuH7, nomor bagian harus dijaga di bawah 20-25.

Aplikasi sel HuH-7

Garis sel turunan hepatoma manusia ini menawarkan banyak aplikasi penelitian. Di sini kami menjelaskan beberapa bidang penelitian yang menggunakan garis sel HuH7.

1. Resistensi obat: HuH7 adalah garis sel karsinoma hepatoseluler (HCC) yang dapat digunakan untuk mempelajari resistensi obat terhadap pengobatan kanker hati yang potensial. Sebuah studi yang dilakukan pada tahun 2021 menggunakan sel HuH7, yang secara eksperimental dibuat resisten terhadap sorafenib, untuk mengembangkan terapi baru dan efektif, yaitu peptida perakitan mandiri yang terakumulasi dalam mitokondria.

2. Wawasan Genetik dan Profil Molekuler Melalui Sel HuH7: Garis sel HuH7 yang berbeda, termasuk berbagai turunan dan varian, telah memungkinkan pemahaman yang lebih dalam tentang ekspresi gen dan peran penanda genom spesifik dalam penyakit. Teknik seperti spektroskopi Raman, yang diperjuangkan oleh para peneliti seperti Evgeny Gladilin, telah diterapkan pada sel HuH7 untuk pembuatan profil molekuler dan seluler, yang mengungkapkan wawasan tentang respons seluler terhadap infeksi virus. Potensi spektroskopi Raman, dikombinasikan dengan metode seperti proteomik kuantitatif, telah memfasilitasi eksplorasi respons sel inang, termasuk respons interferon dan perubahan tetesan lipid, yang sangat penting untuk memahami replikasi HCV dan efek SARS. Ekspresi penanda onkogenik yang berbeda dapat diselidiki untuk memahami perilaku mereka dalam menanggapi pengobatan apa pun, seperti dalam sebuah penelitian yang menggunakan sel HuH7 untuk menyelidiki efek senyawa Kaempferol pada pola ekspresi gen jalur MMP9 dan AKT. Jalur-jalur ini mengatur metastasis dan invasi karsinoma hepatoseluler. Penelitian lain baru-baru ini juga menyelidiki peran gen kaskade pensinyalan Wnt/β-catenin dalam kelangsungan hidup dan pertumbuhan sel HCC.

3. Pengembangan obat: Sel HuH7 banyak digunakan dalam skrining obat dan studi pengembangan obat untuk melawan kanker hati. Berbagai penelitian telah dilakukan untuk menyelidiki potensi penghambatan banyak ekstrak tanaman, senyawa berbasis tanaman, nanopartikel, dan agen terapeutik lainnya terhadap HCC. Sebuah penelitian yang dilakukan pada tahun 2022 mempelajari sifat pro-apoptosis dan anti-kanker dari radionuklida terhadap karsinoma hepatoseluler menggunakan garis sel HuH7.

4. Sel HuH7: Titik Fokus dalam Penelitian Virus dan Analisis Seluler Sel HuH7 telah menjadi landasan dalam studi infeksi virus dan penyakit menular, terutama virus hepatitis C (HCV) dan interaksinya dengan virus corona seperti SARS-CoV-2, yang bertanggung jawab atas penyakit virus corona 2019 (COVID-19). Pengembangan sistem kultur sel HCV eksperimental (HCVcc) yang menggunakan sel HuH7 telah secara signifikan memajukan kemampuan kami untuk mempelajari proses replikasi HCV yang rumit dan faktor inang yang penting untuk infeksi HCV. Ini termasuk memeriksa efisiensi replikasi RNA HCV dan produksi virion yang menular. Garis-garis sel HuH7 yang berbeda, termasuk varian yang sudah tua dan yang terinfeksi, menyediakan panel yang beragam untuk menyelidiki banyaknya infeksi, penyebaran virus, dan mekanisme penghambatan terhadap virus seperti SARS.

Singkatnya, studi tentang sel HuH7 mencakup spektrum yang luas dari penyelidikan ilmiah, dari mekanisme molekuler yang mendasari infeksi virus hingga respons seluler terperinci yang ditimbulkan oleh patogen ini. Melalui lensa penelitian HuH7, komunitas ilmiah terus mengungkap dinamika kompleks interaksi inang-virus, yang berkontribusi pada kemajuan strategi antivirus dan pemahaman kita tentang faktor penentu seluler pada penyakit virus.

Publikasi HuH-7

Ada banyak sekali publikasi yang menggunakan garis sel HuH7 untuk tujuan yang berbeda. Di sini, kami telah menyebutkan beberapa publikasi terbaru dan signifikan.

• Penerapan peptida perakitan sendiri yang menargetkan mitokondria sebagai pengobatan baru untuk sel karsinoma hepatoseluler yang resisten terhadap sorafenib.

Penelitian ini dipublikasikan di Nature Scientific Reports pada tahun 2021. Penelitian ini menggunakan sel karsinoma hepatoseluler resisten sorafenib yang diinduksi secara eksperimental (garis sel HuH7) untuk menyelidiki efek pro-apoptosis dan anti-tumor dari Mito-FF yang baru-baru ini dikembangkan (peptida perakitan mandiri yang terakumulasi di mitokondria).

• Kaempferol menghambat migrasi sel karsinoma hepatoseluler manusia dengan menekan sinyal MMP-9 dan Akt

Artikel ini dipublikasikan di jurnal Environmental Toxicology oleh Po-Chung Ju dan rekannya pada tahun 2021. Dalam penelitian ini, para peneliti mengeksplorasi potensi anti-metastasis dari senyawa nabati, kaempferol, terhadap sel karsinoma hepatoseluler (HuH7). Selain itu, mereka juga mempelajari jalur pensinyalan yang mengatur metastasis dan invasi sel kanker hati.

• Daphnetin menghambat kelangsungan hidup sel karsinoma hepatoseluler dengan mengatur jalur pensinyalan Wnt/β-catenin

Makalah ini diterbitkan dalam jurnal Drug Development Research pada tahun 2022. Penelitian ini menjelaskan peran anti-kanker dari senyawa daphnetin terhadap HCC. Senyawa yang berasal dari tanaman ini menghambat sinyal Wnt/β-catenin untuk membatasi pertumbuhan sel kanker.

• RGFP966 menekan pertumbuhan dan migrasi tumor melalui penghambatan ekspresi EGFR pada sel karsinoma hepatoseluler secara in vitro

Makalah penelitian yang diterbitkan dalam jurnal Drug Design, Development, and Therapy ini menjelaskan peran pensinyalan EGFR dalam pertumbuhan dan metastasis karsinoma hepatoseluler. Penelitian ini menggunakan sel HuH7 untuk menyelidiki efek penghambatan RGFP966, penghambat histone deacetylase 3 (HDAC3), terhadap HCC dengan menekan gen jalur EGFR.

• Rhenium Perrhenate (188ReO4) Menginduksi Apoptosis dan Mengurangi Fenotipe Kanker pada Sel Kanker Hati

Publikasi dalam jurnal Cells ini menunjukkan penggunaan sel HuH7 dalam menyelidiki potensi anti-HCC dari suatu radionuklida, yaitu renium perrhenate.

• Aktivitas antivirus nanopartikel kitosan yang merangkum kurkumin terhadap virus hepatitis C genotipe 4a dalam garis sel hepatoma manusia

Penelitian ini dipublikasikan dalam International Journal of Nanomedicine. Penelitian ini menggunakan sel HuH7 untuk mengeksplorasi aktivitas antivirus nanopartikel kitosan yang mengandung kurkumin terhadap HCV genotipe 4a.

Sumber Daya HuH-7: Protokol, Video & Lainnya

Ada banyak sumber daya yang tersedia untuk kultur dan pemeliharaan lini sel HuH7. Di sini, Anda akan belajar tentang sumber daya yang tersedia untuk menjelaskan kultur sel dan protokol transfeksi untuk HuH7 dan video pendidikan.

Protokol kultur sel

Sumber daya berikut dapat membantu Anda memulai kultur dan pemeliharaan HuH7.

• Info dan Sumber Daya Kultur Sel HuH-7: Situs webini memiliki banyak informasi berguna, termasuk protokol subkultur garis sel HuH7, penyimpanan, dan penanganannya.

• Protokol kultur sel HuH7

Protokol transfeksi HuH7

Sel-sel HuH7 ditransfeksi dengan berbagai cara. Sumber daya berikut ini menyediakan banyak informasi mengenai protokol transfeksi, reagen dan bahan kimia yang diperlukan, tips yang berguna, dan tindakan pencegahan.

Video yang terkait dengan garis sel HuH7

Ada banyak video edukasi yang tersedia tentang subkultur dasar, plating dan protokol transfeksi, dan banyak lagi.

• Melewati Sel: Dasar-dasar Kultur Sel: Video ini adalah tentang protokol kultur dasar untuk lini sel.

Kami berharap informasi yang diberikan dalam artikel ini akan membantu Anda mendapatkan pengetahuan dasar dan lanjutan tentang garis sel HuH7 sebelum mengerjakannya. Jika Anda ingin menggunakan sel ini dalam pekerjaan penelitian Anda, Anda dapat memesan dari kami.

Tanya Jawab tentang Jalur Sel HuH7 dan Penelitian Virus