Sel HEK293T: Membuka Potensi dalam Studi Transfeksi
Sel HEK293T adalah sel ginjal embrionik manusia yang banyak digunakan dalam bioteknologi industri, toksikologi, dan penelitian kanker. Sel yang diawetkan ini juga digunakan untuk memproduksi berbagai protein dan virus terapeutik.
Karakteristik umum dan asal usul sel HEK293T
Bagian artikel ini akan membahas asal-usul dan informasi umum tentang garis sel HEK293T.
- Garis sel HEK293T berasal dari sel ginjal embrionik manusia primer yang dikultur di laboratorium. Para peneliti mengembangkan sel-sel ini pada awal tahun 1970-an dengan mentransfeksi sel ginjal embrionik dengan fragmen DNA adenovirus tipe 5 yang dipotong. Para peneliti membuat garis sel HEK293T dengan memasukkan antigen T-antigen besar simian virus 40 (SV40) ke dalam genom sel HEK293. Modifikasi ini memungkinkan para peneliti untuk dengan mudah mentransfeksi sel 293 dan membuatnya cocok untuk produksi protein dan studi ekspresi gen [1].
- Sel HEK293T memiliki morfologi seperti epitel. Mereka mewakili bentuk memanjang dan pipih dengan batas sel yang pasti.
- Ukuran sel HEK293T berkisar antara 11 dan 15 µm dengan diameter.
- Sel HEK293T antigen besar SV40 memiliki kariotipe yang kompleks. Sel-sel ini hipotriploid, mengandung kromosom 3 kali lebih sedikit daripada gamet haploid, dan memiliki jumlah kromosom modal 64.
Apa perbedaan antara HEK293T dan HEK293?
Baik garis sel HEK293 dan HEK293T berasal dari manusia. HEK293T adalah turunan populer dari garis sel HEK293. Para ilmuwan mengembangkan sel-sel ini dari sel ginjal embrionik manusia 293 yang asli dengan mentransfeksinya dengan antigen T besar SV40, sementara mereka membentuk sel HEK293 yang diabadikan dengan mentransformasi dan membudidayakan sel ginjal embrionik manusia dengan fragmen DNA adenovirus 5 yang dipotong.
Teknologi Sel dan Aplikasi Biomedis sel HEK293T
Kultur dan Perbankan Sel dalam Penelitian HEK293T
Sel HEK293T, yang berasal dari sel ginjal embrionik manusia 293, banyak digunakan dalam kultur sel karena pertumbuhannya yang kuat dan kemudahan transfeksi. Untuk bekerja dengan sel-sel ini, para peneliti harus memprioritaskan bank sel, yang melibatkan penyimpanan sel untuk penelitian yang diperpanjang dan penggunaan terapeutik. Mereka perlu menggunakan pendekatan perbankan sel bertingkat untuk menjaga sifat sel dan memastikan kelangsungan hidup sel dalam jangka panjang. Pembuatan bank sel membutuhkan kepatuhan terhadap peraturan praktik manufaktur yang baik untuk memastikan kelangsungan hidup dan integritas sel untuk aplikasi terapeutik.
Praktik manufaktur yang baik sangat penting dalam produksi bank sel HEK293T, yang merupakan dasar untuk penelitian dan aplikasi terapeutik. Bank sel induk berfungsi sebagai titik referensi untuk semua produk seluler berikutnya. Pembuatan sel-sel ini untuk aplikasi terapeutik, seperti produksi lentiviral untuk terapi gen, mengikuti standar peraturan yang ketat untuk memastikan keamanan dan kemanjuran produk akhir.
Protokol dan Pengujian Menggunakan HEK293T
Dalam sitoteknologi, protokol dan pengujian khusus dirancang untuk mengevaluasi sifat sel HEK293T. Ini termasuk menilai kemanjuran vektor terapi gen dan interaksi sel dengan matriks ekstraseluler dalam cawan atau kultur suspensi. Untuk menjaga integritas sel HEK293T, para peneliti memilih reagen untuk transfeksi dengan presisi dan melakukan uji kontrol kualitas yang ketat.
Aplikasi penelitian dari garis sel HEK293T
- Pengembangan vaksin: Garis selHEK293T telah digunakan untuk mempelajari virus dan memproduksi vaksin berbasis vektor virus untuk memerangi berbagai infeksi virus. Sebuah penelitian menggunakan garis sel ginjal embrionik ini untuk menyelidiki dasar struktural dan fungsional masuknya sel virus COVID-19 melalui enzim pengubah angiotensin 2 (ACE2) manusia [3]. Selain itu, sebuah penelitian baru-baru ini menggunakan sel HEK93T untuk menghasilkan partikel lentivirus spike-pseudotipe SARS-CoV-2 [4].
- Penelitian toksikologi: Garis sel ginjal embrionik manusia ini banyak digunakan untuk menguji toksisitas dan kemanjuran obat. Penelitian yang dilakukan pada tahun 2022 menggunakan HEK293T sebagai garis sel manusia normal untuk memvalidasi potensi sitotoksik ekstrak Caladium lindenii terhadap garis sel kanker hati HepG2 [5].
- Studi ekspresi gen: Garis sel HEK293T antigen T besar SV40 sangat cocok untuk transfeksi, sehingga cocok untuk studi ekspresi gen. Sebuah penelitian menggunakan sel HEK293T untuk mempelajari peran RNA nonkode panjang SNHG16 dalam mengatur fungsi trofoblas. Studi tersebut mengungkapkan bahwa LncRNA SNHG16 berinteraksi dengan sumbu miR-218-5p / LASP1 untuk memediasi efek ini [6].
Inovasi Terapi Sel Menggunakan Sel HEK293T
Kemajuan dalam Terapi Sel dengan HEK293T
Sel HEK293T berkontribusi secara signifikan terhadap lanskap terapi sel, terutama dalam pembuatan vektor virus untuk terapi gen. Sel-sel ini sangat penting dalam proses manufaktur yang mematuhi peraturan praktik manufaktur yang baik, karena memastikan produksi produk terapi gen berkualitas tinggi. Pelatihan personil manufaktur juga berfokus pada penanganan sifat unik sel HEK293T dan mempertahankan standar tinggi untuk produk obat yang berasal dari sel ini.
Sel HEK293T dalam Uji Klinis dan Terapi Gen
Lini sel HEK293T memainkan peran penting dalam pengembangan produk terapi gen dan merupakan bagian integral dari uji klinis yang bertujuan untuk membawa terapi sel baru ke pasar. Hal ini melibatkan pemanfaatan transfektivitas tinggi garis sel untuk pengiriman gen, memanfaatkan vektor seperti vektor pengemasan lentiviral, di mana mutasi integrase D64V telah menjadi kemajuan penting untuk meningkatkan keamanan.
Teknik Inovatif dalam Kultur Sel HEK293T
Keserbagunaan sel HEK293T mendukung teknik inovatif dalam kultur sel dua dimensi dan dimensi yang lebih kompleks. Kemampuan beradaptasi ini adalah kunci dalam mengeksplorasi produk seluler untuk berbagai jenis penelitian biomedis, termasuk penelitian kanker, di mana sel-sel ini digunakan untuk mempelajari proses tumorigenik dan pengujian obat. Selain itu, lini HEK293T berperan penting dalam produksi partikel lentiviral, yang sangat penting untuk penelitian dan proses pembuatan vektor terapeutik.
Beli Sel HEK293 untuk Penelitian Anda
Tingkatkan penelitian Anda dengan sel HEK293 kami, yang terkenal dengan kemampuan beradaptasi dalam studi ekspresi gen dan produksi vaksin. Penawaran kami meliputi turunan serbaguna seperti HEK293T, lini yang diadaptasi dari suspensi HEK293, HEK293T/17, AAV-293, dan 2V6.11. Jelajahi pilihan kami yang luas untuk mendukung dan memajukan pekerjaan eksperimental Anda.
Informasi kultur untuk garis sel HEK293T
Sel HEK293T dikultur secara ekstensif di laboratorium penelitian. Sebelum mengembangkan kultur sel HEK293T, Anda harus tahu: Berapa waktu penggandaan sel HEK293T? Apa itu media HEK293T? Berapa kepadatan pembibitan HEK293T?
Poin-poin Penting untuk Kultur Sel HEK293T
|
Waktu Penggandaan: |
Waktu penggandaan yang dilaporkan untuk sel HEK293T adalah 30 jam. |
|
Patuh atau dalam Suspensi: |
HEK293T adalah garis sel yang patuh. |
|
Kepadatan Penyemaian: |
Sel HEK293T diunggulkan pada kepadatan 1 x104 sel/ cm2. Pada kepadatan pembenihan ini, sel dapat membuat monolayer yang menyatu dalam waktu kurang lebih 4 hari. Untuk penyemaian, sel yang melekat dilepaskan dengan menggunakan larutan disosiasi accutase. Sel-sel yang terlepas disentrifugasi dan kemudian diresuspensi dengan hati-hati menggunakan media pertumbuhan. Setelah itu, sel dimasukkan ke dalam labu baru untuk dikultur. |
|
Media Pertumbuhan: |
Sel HEK293T dikultur dalam EMEM (media esensial minimal Eagle) yang mengandung 1,0 g / L L-glukosa, 2,2 g / L NaHCO3, 2,0 mM L-glutamin, dan 10% serum sapi janin. Media harus diganti dua kali seminggu. |
|
Kondisi Pertumbuhan: |
Kultur sel HEK293T disimpan dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37°C dengan suplai CO2 5%. |
|
Penyimpanan: |
Sel HEK293T ginjal embrionik manusia disimpan dalam fase uap nitrogen cair atau suhu di bawah -150 ° C lebih lama. |
|
Proses dan Media Pembekuan: |
Sel HEK293 dapat dibekukan dalam media pembekuan CM-1 atau CM-ACF. Proses pembekuan lambat yang memungkinkan penurunan suhu 1 ° C secara bertahap direkomendasikan untuk sel HEK293T untuk melindungi kelangsungan hidupnya. |
|
Proses Pencairan: |
Botol sel beku diaduk dengan cepat dalam penangas air (37 ° C) sampai gumpalan es kecil tersisa. Sel diresuspensi dalam media dan disentrifugasi untuk menghilangkan komponen media yang membeku. Sel yang dipulihkan kemudian dikultur dalam labu baru yang berisi media pertumbuhan. |
|
Tingkat Keamanan Hayati: |
Laboratorium keamanan hayati tingkat 1 diperlukan untuk menangani dan memelihara kultur sel HEK293T. |
Garis sel HEK293T: Keuntungan & Keterbatasan
Kombinasi unik antara keunggulan dan keterbatasan dikaitkan dengan sel 293T ginjal embrionik manusia. Di sini, kita akan membahas beberapa keuntungan dan kerugian utama dari lini sel ini.
Pro dan Kontra sel HEK293T
Keuntungan signifikan dari sel HEK293T termasuk transfektivitasnya yang tinggi, di mana garis sel menunjukkan efisiensi yang luar biasa dalam mengambil DNA asing dan menghasilkan protein yang melimpah. Kualitas ini membuat mereka sangat disukai untuk studi transfeksi sementara dan stabil. Selain itu, kultur sel HEK293T dikenal karena kemudahan pemeliharaannya, menjadikannya pilihan yang sangat baik untuk berbagai eksperimen laboratorium karena ketangguhannya dan persyaratan penanganannya yang mudah.
Namun, ada keterbatasan yang terkait dengan kultur sel HEK293T. Salah satu perhatian utama adalah risiko kontaminasi mikroba, yang secara signifikan dapat memengaruhi morfologi sel, ekspresi gen, dan karakteristik penting lainnya, yang berpotensi menyebabkan hasil eksperimen yang tidak akurat. Selain itu, meskipun sel HEK293T cocok untuk eksperimen jangka panjang, periode kultur yang lama dapat membahayakan kesehatan sel. Hal ini dapat memengaruhi efisiensi transfeksi dan tingkat pertumbuhannya, itulah sebabnya mengapa umumnya disarankan untuk membatasi jumlah bagiannya hingga 20 atau di bawahnya untuk menjaga integritas sel.
Pertanyaan yang Sering Diajukan Tentang Kultur dan Aplikasi Sel HEK293T
Sel HEK293T: Publikasi penelitian
Pada bagian ini, kami telah menyebutkan beberapa publikasi penelitian yang menjanjikan yang menampilkan sel HEK293T.
Pengembangan vaksin mRNA SARS-CoV-2 yang mengkode lonjakan domain pengikatan N-terminal dan reseptor
Publikasi ini akan dipublikasikan di BioRxiv pada tahun 2022. Penelitian ini menggunakan sel HEK293T untuk mengembangkan vaksin mRNA virus COVID-19 yang mengkode gen lonjakan N-terminal dan domain RBD (receptor binding domain).
Kanker payudara triple negatif HER2 RNA positif melingkar sensitif terhadap Pertuzumab
Penelitian ini dipublikasikan di Molecular Cancer pada tahun 2020. Penelitian ini mengusulkan bahwa ekspresi RNA HER2 sirkuler pada sel kanker payudara triple-negatif membuatnya sensitif terhadap pengobatan Pertuzumab. Para peneliti menggunakan sel HEK293 untuk produksi lentivirus dan transfeksi gen HER2 sirkuler dalam penelitian ini.
Peran antivirus IFITM3 dalam infeksi virus berbusa prototipe
Makalah ini diterbitkan dalam Jurnal Virology pada tahun 2022. Penelitian ini menggunakan sel HEK293T untuk menyelidiki efek antivirus IFITM3 (protein transmembran yang diinduksi interferon 3) dalam infeksi prototipe virus berbusa (PFV).
Makalah penelitian ini di Nature Scientific Reports (2017) menggunakan sel HEK293T dan mempelajari bahwa miRNA-21 memediasi efek antiangiogenik yang diinduksi metformin dengan mengatur jalur pensinyalan PI3K / AKT dan ekspresi gen SMAD7 dan PTEN.
MicroRNA-608 menghambat proliferasi kanker kandung kemih melalui jalur pensinyalan AKT/FOXO3a
Penelitian ini diterbitkan dalam jurnal Molecular Cancer pada tahun 2017. Penelitian ini menggunakan sel HEK293 untuk menyelidiki potensi antiproliferasi miRNA-608 terhadap kanker kandung kemih.
Sumber daya untuk garis sel HEK293T: Protokol, Video, dan Lainnya
Berikut ini adalah beberapa sumber daya pada sel HEK293T:
- Mentransfeksi sel HEK293T.
- Transfeksi sel HEK: Video ini menunjukkan protokol transfeksi umum untuk garis sel ginjal embrionik manusia HEK293.
- Melewati sel: Video ini menjelaskan prosedur untuk membelah atau mensubkultur sel yang melekat.
Protokol kultur sel
Protokol kultur sel untuk sel HEK293T tercantum di sini.
- Membelah sel HEK293T: Situs ini menyediakan panduan langkah demi langkah terperinci untuk mensubkultur sel HEK293.
- Membudidayakan sel ginjal embrionik manusia: Tautan ini akan memberi Anda protokol kultur sel HEK293T.
Referensi
- Tan, E., dkk., Garis Sel HEK293 sebagai Platform untuk Memproduksi Protein Rekombinan dan Vektor Virus. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2021, 9.
- Kim, M.J., dkk., AMPKα1 Mengatur Perkembangan Kanker Paru dan Payudara dengan Mengatur Sumbu Pensinyalan TRAF6-BECN1 yang Dimediasi oleh TLR4. Kanker (Basel), 2020, 12(11).
- Wang, Q., dkk., Dasar Struktural dan Fungsional Masuknya SARS-CoV-2 dengan Menggunakan ACE2 Manusia. Cell, 2020. 181(4): p. 894-904.
- Gale, E.C., dkk., Vaksin subunit domain pengikat reseptor yang dilepaskan secara perlahan berbasis hidrogel memunculkan respons antibodi yang menetralkan terhadap SARS-CoV-2. bioRxiv, 2021.
- Kalsoom, A., dkk., Evaluasi In Vitro Potensi Sitotoksik Ekstrak Caladium lindenii pada Hepatokarsinoma Manusia HepG2 dan Garis Sel HEK293T Normal. Biomed Res Int, 2022, hal. 1279961.
- Yu, Z., dkk., LncRNA SNHG16 mengatur fungsi trofoblas dengan sumbu miR-218-5p / LASP1. J Mol Histol, 2021. 52(5): p. 1021-1033.