Sel HEK293T: Mengoptimalkan Potensi dalam Studi Transfeksi

Sel HEK293T adalah sel ginjal embrio manusia yang banyak digunakan dalam bioteknologi industri, toksikologi, dan penelitian kanker. Sel-sel yang diimortalkan ini juga digunakan untuk memproduksi berbagai protein terapeutik dan virus.

Karakteristik umum dan asal-usul sel HEK293T

Bagian artikel ini akan membahas asal-usul dan informasi umum mengenai garis sel HEK293T. 

• Garis sel HEK293T berasal dari sel ginjal embrio manusia primer yang dibudidayakan di laboratorium. Para peneliti mengembangkan sel-sel ini pada awal tahun 1970-an dengan mentransfeksi sel ginjal embrio menggunakan fragmen DNA adenovirus tipe 5 yang telah dipotong-potong. Para peneliti membuat garis sel HEK293T dengan memasukkan antigen T besar simian virus 40 (SV40) ke dalam genom sel HEK293. Modifikasi ini memungkinkan para peneliti untuk dengan mudah mentransfeksi sel 293 dan membuatnya cocok untuk produksi protein dan studi ekspresi gen [1].
• Sel HEK293T memiliki morfologi mirip epitel. Sel ini berbentuk memanjang dan pipih dengan batas sel yang jelas.
• Ukuran sel HEK293T berkisar antara 11 dan 15 µm dalam diameter.
• Sel HEK293T antigen besar SV40 memiliki kariotipe yang kompleks. Sel-sel ini bersifat hipotriploid, mengandung kromosom 3 kali lebih sedikit daripada gamet haploid, dan memiliki jumlah kromosom modal 64.

Apa perbedaan antara HEK293T dan HEK293?

Baik garis sel HEK293 maupun HEK293T berasal dari manusia. HEK293T adalah turunan populer dari garis sel HEK293. Para ilmuwan mengembangkan sel-sel ini dari sel ginjal embrio manusia 293 asli dengan mentransfeksi sel-sel tersebut menggunakan antigen T besar SV40, sementara mereka membuat sel HEK293 yang diabadi dengan mentransformasi dan membiakkan sel ginjal embrio manusia menggunakan fragmen DNA adenovirus 5 manusia yang telah dipotong-potong.

Teknologi Sel dan Aplikasi Biomedis Sel HEK293T

Kultur Sel dan Penyimpanan Sel dalam Penelitian HEK293T

Sel HEK293T, yang berasal dari sel ginjal embrio manusia 293, banyak digunakan dalam kultur sel karena pertumbuhannya yang kuat dan kemudahan transfeksi. Untuk bekerja dengan sel-sel ini, para peneliti harus memprioritaskan penyimpanan sel, yang melibatkan penyimpanan sel untuk penelitian jangka panjang dan penggunaan terapeutik. Mereka perlu menggunakan pendekatan penyimpanan sel bertahap untuk menjaga sifat sel dan memastikan viabilitas sel jangka panjang. Pembuatan bank sel memerlukan kepatuhan terhadap peraturan praktik manufaktur yang baik (GMP) untuk memastikan viabilitas dan integritas sel untuk aplikasi terapeutik.

Praktik manufaktur yang baik sangat penting dalam produksi bank sel HEK293T, yang menjadi dasar bagi penelitian dan aplikasi terapeutik. Bank sel induk berfungsi sebagai titik referensi untuk semua produk seluler selanjutnya. Pembuatan sel-sel ini untuk aplikasi terapeutik, seperti produksi lentiviral untuk terapi gen, mengikuti standar regulasi yang ketat untuk memastikan keamanan dan kemanjuran produk akhir.

Protokol dan Uji Menggunakan HEK293T

Dalam sitoteknologi, protokol dan uji spesifik dirancang untuk mengevaluasi sifat sel HEK293T. Hal ini mencakup penilaian efektivitas vektor terapi gen dan interaksi sel dengan matriks ekstraseluler dalam kultur cawan atau suspensi. Untuk menjaga integritas sel HEK293T, para peneliti memilih reagen untuk transfeksi dengan cermat dan melakukan uji kontrol kualitas yang ketat terhadap bahan baku.

Aplikasi penelitian dari garis sel HEK293T

• Pengembangan vaksin: Sel HEK293T telah digunakan untuk mempelajari virus dan memproduksi vaksin berbasis vektor virus untuk memerangi berbagai infeksi virus. Sebuah studi menggunakan garis sel ginjal embrio ini untuk menyelidiki dasar struktural dan fungsional masuknya virus COVID-19 ke dalam sel melalui enzim konversi angiotensin 2 (ACE2) manusia [3]. Selain itu, sebuah studi terbaru menggunakan sel HEK93T untuk menghasilkan partikel lentivirus yang dipseudotipe dengan protein spike SARS-CoV-2 [4].
  
• Penelitian toksikologi: Garis sel ginjal embrio manusia ini banyak digunakan untuk menguji toksisitas dan efektivitas obat. Penelitian yang dilakukan pada tahun 2022 menggunakan HEK293T sebagai garis sel manusia normal untuk memvalidasi potensi sitotoksik ekstrak Caladium lindenii terhadap garis sel kanker hati HepG2 [5].
• Studi ekspresi gen: Garis sel HEK293T yang mengekspresikan antigen T besar SV40 sangat mudah ditransfeksi, sehingga cocok untuk studi ekspresi gen. Sebuah studi menggunakan sel HEK293T untuk mempelajari peran RNA nonkoding panjang SNHG16 dalam mengatur fungsi trofoblas. Studi tersebut mengungkapkan bahwa LncRNA SNHG16 berinteraksi dengan sumbu miR-218-5p/LASP1 untuk memediasi efek-efek ini [6].

Inovasi Terapi Sel Menggunakan Sel HEK293T

Kemajuan dalam Terapi Sel dengan HEK293T

Sel HEK293T berkontribusi secara signifikan terhadap lanskap terapi sel, terutama dalam pembuatan vektor virus untuk terapi gen. Sel-sel ini sangat penting dalam proses manufaktur yang mematuhi peraturan praktik manufaktur yang baik, karena memastikan produksi produk terapi gen berkualitas tinggi. Pelatihan tenaga kerja manufaktur juga berfokus pada penanganan sifat unik sel HEK293T dan pemeliharaan standar tinggi untuk produk obat yang dihasilkan dari sel-sel ini.

Sel HEK293T dalam Uji Klinis dan Terapi Gen

Garis sel HEK293T memainkan peran penting dalam pengembangan produk terapi gen dan merupakan bagian integral dari uji klinis yang bertujuan untuk menghadirkan terapi sel baru ke pasar. Hal ini melibatkan pemanfaatan transfektivitas tinggi dari garis sel tersebut untuk pengiriman gen, dengan menggunakan vektor seperti vektor pengemasan lentiviral, di mana mutasi integrasi D64V telah menjadi kemajuan penting untuk meningkatkan keamanan.

Teknik Inovatif dalam Kultur Sel HEK293T

Fleksibilitas sel HEK293T mendukung teknik inovatif dalam kultur sel dua dimensi maupun dimensi yang lebih kompleks. Kemampuan beradaptasi ini sangat penting dalam mengeksplorasi produk seluler untuk berbagai jenis penelitian biomedis, termasuk penelitian kanker, di mana sel-sel ini digunakan untuk mempelajari proses tumorigenik dan pengujian obat. Selain itu, garis sel HEK293T berperan penting dalam produksi partikel lentiviral, yang sangat penting bagi proses penelitian dan pembuatan vektor terapeutik.

Beli Sel HEK293 untuk Penelitian Anda

Tingkatkan penelitian Anda dengan sel HEK293 kami, yang terkenal karena kemampuannya beradaptasi dalam studi ekspresi gen dan produksi vaksin. Penawaran kami mencakup variasi sel yang serbaguna seperti HEK293T, garis sel HEK293 yang diadaptasi untuk kultur suspensi, HEK293T/17, AAV-293, dan 2V6.11. Jelajahi pilihan lengkap kami untuk mendukung dan memajukan pekerjaan eksperimental Anda.

Informasi tentang kultur sel HEK293T

Sel HEK293T banyak dibudidayakan di laboratorium penelitian. Sebelum memulai kultur sel HEK293T, Anda harus mengetahui: Berapa lama waktu penggandaan sel HEK293T? Apa itu media HEK293T? Berapa kepadatan penyemaian sel HEK293T?

Poin-Poin Penting dalam Pembiakan Sel HEK293T

Waktu Perduplikan:

Waktu penggandaan yang dilaporkan untuk sel HEK293T adalah 30 jam.

Menempel atau dalam Suspensi:

HEK293T adalah garis sel yang melekat.

Kepadatan Penaburan:

Sel HEK293T disemai dengan kepadatan 1 x 10^⁴ sel/cm². Pada kepadatan penyemaian ini, sel dapat membentuk lapisan tunggal yang konfluen dalam waktu sekitar 4 hari. Untuk penyemaian, sel yang melekat dilepaskan menggunakan larutan disosiasi Accutase. Sel yang terlepas disentrifugasi dan kemudian disuspensi kembali dengan hati-hati menggunakan media pertumbuhan. Setelah itu, sel-sel tersebut dipindahkan ke labu baru untuk dibiakkan.

Media Pertumbuhan:

Sel HEK293T dikultur dalam EMEM (Eagle's minimal essential medium) yang mengandung 1,0 g/L L-glukosa, 2,2 g/L NaHCO3, 2,0 mM L-glutamin, dan 10% serum sapi janin. Media harus diganti dua kali seminggu.

Kondisi Pertumbuhan:

Kultur sel HEK293T disimpan dalam inkubator berhumiditas pada suhu 37°C dengan pasokan CO₂ 5%.

Penyimpanan:

Sel ginjal embrio manusia HEK293T disimpan dalam fase uap nitrogen cair atau pada suhu di bawah -150°C untuk jangka waktu yang lebih lama.

Proses Pembekuan dan Media:

Sel HEK293 dapat dibekukan dalam media pembekuan CM-1 atau CM-ACF. Proses pembekuan lambat yang memungkinkan penurunan suhu secara bertahap sebesar 1°C direkomendasikan untuk sel HEK293T guna melindungi viabilitasnya.

Proses Pencairan:

Botol sel beku dikocok dengan cepat dalam penangas air (37°C) hingga hanya tersisa gumpalan es kecil. Sel disuspensi kembali dalam media dan disentrifugasi untuk menghilangkan komponen media pembekuan. Sel yang telah dipulihkan kemudian dikultur dalam labu baru yang berisi media pertumbuhan. 

Tingkat Keamanan Biologis:

Laboratorium tingkat keamanan biologis 1 diperlukan untuk menangani dan memelihara kultur sel HEK293T.

Pertanyaan yang Sering Diajukan Tentang Kultur dan Aplikasi Sel HEK293T

Sel HEK293T: Publikasi penelitian

Pada bagian ini, kami telah menyebutkan beberapa publikasi penelitian yang menjanjikan yang menampilkan sel HEK293T.

Pengembangan vaksin mRNA SARS-CoV-2 yang mengkodekan domain N-terminal spike dan domain pengikatan reseptor

Publikasi ini akan diterbitkan di BioRxiv pada tahun 2022. Penelitian ini menggunakan sel HEK293T untuk mengembangkan vaksin mRNA virus COVID-19 yang mengkodekan domain N-terminal gen spike dan domain RBD (domain pengikat reseptor).

Kanker payudara triple-negatif yang positif terhadap RNA HER2 sirkular sensitif terhadap Pertuzumab

Penelitian ini diterbitkan di Molecular Cancer pada tahun 2020. Studi ini mengusulkan bahwa ekspresi RNA HER2 sirkular pada sel kanker payudara triple-negatif membuatnya sensitif terhadap pengobatan dengan obat Pertuzumab. Para peneliti menggunakan sel HEK293 untuk produksi lentivirus dan transfeksi gen HER2 sirkular dalam studi ini.

Peran antivirus IFITM3 dalam infeksi virus foamy prototipe

Makalah ini diterbitkan dalam jurnal Virology Journal pada tahun 2022. Penelitian ini menggunakan sel HEK293T untuk menyelidiki efek antivirus IFITM3 (protein transmembran yang diinduksi interferon 3) pada infeksi virus foamy prototipe (PFV).

MiRNA-21 memediasi aktivitas antiangiogenik metformin melalui penargetan ekspresi PTEN dan SMAD7 serta jalur PI3K/AKT

Makalah penelitian dalam Nature Scientific Reports (2017) ini menggunakan sel HEK293T dan mempelajari bahwa miRNA-21 memediasi efek antiangiogenik yang diinduksi metformin dengan mengatur jalur pensinyalan PI3K/AKT serta ekspresi gen SMAD7 dan PTEN.

MicroRNA-608 menghambat proliferasi kanker kandung kemih melalui jalur sinyal AKT/FOXO3a

Penelitian ini diterbitkan dalam jurnal Molecular Cancer pada tahun 2017. Studi ini menggunakan sel HEK293 untuk menyelidiki potensi antiproliferatif miRNA-608 terhadap kanker kandung kemih.

Sumber daya untuk garis sel HEK293T: Protokol, Video, dan Lainnya

Berikut ini adalah beberapa sumber daya mengenai sel HEK293T:

• Transfeksi sel HEK293T.
• Transfeksi sel HEK: Video ini menunjukkan protokol transfeksi umum untuk garis sel ginjal embrio manusia HEK293.
• Passaging sel: Video ini menjelaskan prosedur untuk membagi atau subkultur sel yang melekat.

Protokol kultur sel

Protokol kultur sel untuk sel HEK293T tercantum di sini.

• Pembagian sel HEK293T: Situs ini menyediakan panduan langkah demi langkah yang terperinci untuk subkultur sel HEK293.
• Kultur sel ginjal embrio manusia: Tautan ini akan memberikan Anda protokol kultur sel HEK293T.

Referensi

1. Tan, E., dkk., Garis Sel HEK293 sebagai Platform untuk Memproduksi Protein Rekombinan dan Vektor Virus. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2021, 9.
2. Kim, M.J., dkk., AMPKα1 Mengatur Perkembangan Kanker Paru-paru dan Payudara dengan Mengatur Sumbu Sinyal TRAF6-BECN1 yang Dimediasi TLR4. Cancers (Basel), 2020, 12(11).
3. Wang, Q., dkk., Dasar Struktural dan Fungsional Masuknya SARS-CoV-2 dengan Menggunakan ACE2 Manusia. Cell, 2020. 181(4): hlm. 894–904.
4. Gale, E.C., dkk., Pelepasan lambat vaksin subunit domain pengikat reseptor berbasis hidrogel memicu respons antibodi penetralisir terhadap SARS-CoV-2. bioRxiv, 2021.
5. Kalsoom, A., dkk., Evaluasi In Vitro Potensi Sitotoksik Ekstrak Caladium lindenii pada Sel Kanker Hati Manusia HepG2 dan Sel Normal HEK293T. Biomed Res Int, 2022, hlm. 1279961.
6. Yu, Z., dkk., LncRNA SNHG16 mengatur fungsi trofoblas melalui sumbu miR-218-5p/LASP1. J Mol Histol, 2021. 52(5): hlm. 1021-1033.