Sel BV2 - Penelitian Sistem Saraf Pusat Dijelaskan dengan Sel Mikroglia BV2
BV2 adalah garis sel mikroglia yang berasal dari tikus yang digunakan secara luas dalam penelitian ilmu saraf. Garis sel yang diabadikan ini dapat berfungsi sebagai model in vitro untuk mempelajari penyakit neurodegeneratif dan kondisi serta proses sel yang terkait, yaitu peradangan saraf. Selain itu, sel BV2 dianggap sebagai sistem model alternatif untuk mikroglia primer.
Artikel ini akan membahas asal-usul, informasi kultur sel, dan aplikasi penelitian dari garis sel mikroglia tikus, BV2. Secara khusus, kita akan membahas hal-hal berikut:
- Asal dan karakteristik umum sel BV2
- Garis sel BV2: Informasi kultur
- Keuntungan & keterbatasan sel BV2
- Aplikasi garis sel BV2 dalam penelitian
- Sel BV2: Publikasi penelitian
- Sumber daya untuk lini sel BV2: Protokol, Video, dan Lainnya
1. Asal dan karakteristik umum sel BV2
Bagian artikel ini menjelaskan asal usul garis sel BV2 dan fitur umum yang membedakannya dari garis sel mikroglial lainnya. Di sini, Anda akan belajar: Apa itu sel BV2? Dari mana sel BV2 berasal? Berapa ukuran sel BV2?
- Garis sel mikroglia BV2 diperoleh dari mikroglia neonatal (bayi baru lahir) C57/BL6. Garis sel diabadikan dengan menginfeksi sel dengan J2 retrovirus yang membawa onkogen v-raf/v-myc [1].
- Sel BV2 yang tidak terstimulasi memiliki morfologi hipertrofi seperti amuba. Morfologi ini menunjukkan kondisi sel BV2 yang sangat teraktivasi dan inflamasi dibandingkan dengan mikroglia primer [2].
- Diameter yang dilaporkan untuk garis sel BV-2 berkisar antara 10 hingga 15 μm.
Garis sel BV2 Vs ECO 2
Keduanya adalah garis sel mikroglia tikus tetapi berbeda satu sama lain. Perbedaan utama adalah bahwa BV2 diabadikan dengan manipulasi genetik, sedangkan ECO 2 diabadikan secara spontan. Selain itu, ECO 2 memiliki karakteristik umum yang sama dengan BV2 tetapi membutuhkan suplementasi faktor perangsang koloni-1 (CSF-1) untuk kulturnya.
2.garis sel BV2: Informasi kultur
Sebelum menangani dan memelihara kultur lini sel, informasi kultur sel sangat penting. Bagian artikel ini akan membantu Anda mengetahui semua poin penting untuk mengkultur lini sel BV2. Secara khusus, kami akan membahas hal-hal berikut: Berapa waktu penggandaan BV2? Media apa yang digunakan untuk membiakkan sel BV2? Apakah garis sel BV2 bersifat melekat atau suspensi? Bagaimana Anda mencairkan sel BV2?
Poin-poin Penting untuk Mengultur Sel BV2
|
Waktu Penggandaan: |
Sel mikroglial BV2 tumbuh sangat cepat, dengan waktu penggandaan BV2 rata-rata 34,5 jam. |
|
Patuh atau dalam Suspensi: |
BV2 adalah garis sel yang patuh. |
|
Rasio Pemisahan: |
Garis sel mikroglial yang patuh ini disubkultur dengan rasio pemisahan 1:2 hingga 1:4. Sel-sel dicuci dengan PBS dan diinkubasi dengan Accutase (larutan disosiasi). Setelah 10 menit, mereka disentrifugasi dan dipanen. Sel-sel ini kemudian ditambahkan ke dalam labu media pertumbuhan segar sesuai dengan rasio pemisahan yang disarankan. |
|
Media Pertumbuhan: |
Media RPMI 1640 digunakan untuk menumbuhkan garis sel BV2. BV2 RPMI dilengkapi dengan 10% FBS, 2,0 mM Glutamin stabil, 2,0 g / L NaHCO3 untuk pertumbuhan sel yang ideal. Media diperbarui 2 hingga 3 kali per minggu. |
|
Kondisi Pertumbuhan: |
Kultur BV2 dipelihara dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37°C dengan pengiriman CO2 5% secara terus menerus. |
|
Penyimpanan: |
Botol sel BV2 beku disimpan di bawah suhu -150 ° C baik dalam fase uap nitrogen cair atau dalam freezer listrik. |
|
Proses dan Media Pembekuan: |
Media pembekuan CM-1 atau CM-ACF direkomendasikan untuk lini sel BV2. Sel dibekukan menggunakan proses pembekuan lambat yang hanya memungkinkan penurunan suhu 1 ° C per menit untuk mempertahankan kelangsungan hidup sel. |
|
Proses Pencairan: |
Botol sel BV2 yang dibekukan dengan cepat diaduk dalam penangas air (37 ° C) selama 40 hingga 60 detik hingga gumpalan es kecil tersisa. Sel yang telah dicairkan ditambahkan dengan media pertumbuhan segar dan disentrifugasi untuk menghilangkan komponen media yang membeku. Sel yang terkumpul kembali diresuspensi dan dituangkan ke dalam labu kultur untuk pertumbuhan. |
|
Tingkat Keamanan Hayati: |
Tingkat keamanan hayati 1 direkomendasikan untuk kultur garis sel BV2. |
3.keuntungan & keterbatasan sel BV2
Seperti garis sel lainnya, sel BV2 juga dikaitkan dengan beberapa keunggulan dan keterbatasan. Beberapa di antaranya disebutkan di sini.
Keuntungan
Keuntungan dari garis sel BV2 meliputi:
|
Fitur seperti mikroglia primer |
Sel BV2 memiliki beberapa karakteristik mirip mikroglia primer dan digunakan sebagai model alternatif untuk mempelajari fungsi dan respons mikroglial. Mereka mengekspresikan F4/80, CD11b, dan Iba1, yang merupakan biomarker penting mikroglia primer. |
|
Pengabadian |
Sel BV2 diabadikan, memungkinkan mereka untuk mengalami pertumbuhan berkelanjutan. Karakteristik ini membuatnya ideal untuk eksperimen kultur sel jangka panjang. |
Keterbatasan
Keterbatasan yang terkait dengan sel BV2 adalah:
|
Garis sel asal murine |
Garis sel BV2 berasal dari mikroglia tikus. Temuan penelitian yang menggunakan sel BV2 mungkin memiliki penerapan yang terbatas pada penyakit dan penelitian khusus manusia. |
|
Model in vitro |
Sel BV2 berfungsi sebagai model in vitro untuk mempelajari fungsi mikroglia. Namun, penting untuk dicatat bahwa mereka mungkin tidak sepenuhnya meniru karakteristik dan kompleksitas sel mikroglial di otak secara in vivo. |
4.aplikasi garis sel BV2 dalam penelitian
Garis sel BV2 menawarkan beberapa aplikasi dalam penelitian ilmu saraf. Beberapa penggunaan penelitian umum dari sel BV2 disebutkan dalam bagian ini.
Penelitian penyakit neurodegeneratif: Garis sel mikroglial murine, BV2 adalah alat penelitian yang berharga untuk mempelajari penyakit neurodegeneratif seperti penyakit Parkinson, penyakit Alzheimer, dan multiple sclerosis. Para peneliti telah mempelajari neurotoksisitas dan patologi penyakit serta mengevaluasi agen terapeutik menggunakan garis sel BV2. Misalnya, sebuah penelitian yang dilakukan pada tahun 2020 menilai efek anti-inflamasi dan pelindung saraf dari hidroksistilbena alami, Rhaponticin, yang terdapat pada tanaman Rheum rhaponticum, dengan menggunakan sel BV2 yang diaktifkan lipopolisakarida sebagai model penyakit Parkinson. Senyawa ini melemahkan aktivasi BV2 yang dimediasi lipopolisakarida (LPS) dengan menghambat sintase oksida nitrat dan mengurangi spesies oksigen reaktif dan mediator proinflamasi. Secara singkat, Rhaponticin memberikan efek anti-inflamasi dan pelindung saraf pada model mikroglial yang diinduksi LPS (BV2) [3]. Demikian pula, sebuah penelitian menyelidiki keterlibatan jalur pensinyalan dalam peradangan saraf. Para peneliti mengembangkan model peradangan melalui aktivasi BV2 yang dimediasi oleh lipopolisakarida. Mereka menemukan bahwa sumbu pensinyalan AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB terlibat dalam peradangan saraf. Selain itu, mereka juga mengevaluasi beta-naphthoflavone (BNF), flavonoid alami, untuk efek anti-inflamasi dan pelindung saraf dengan menggunakan model ini. Senyawa ini memberikan efek terapeutik ini dengan menghambat aktivasi BV2 [4]. Demikian juga, penelitian ini menggunakan sel BV2 dan mempelajari efek amelioratif obat zonisamide pada disfungsi mitokondria pada sel mikroglial. Temuan penelitian ini mendukung penggunaan klinis zonisamide untuk pengobatan penyakit Parkinson [5].
5.sel BV2: Publikasi penelitian
Berikut ini adalah beberapa studi penelitian yang menarik dan paling banyak dikutip yang menampilkan sel BV2.
Penelitian ini diterbitkan dalam Journal of Alzheimer's Disease (2015). Penelitian ini mengusulkan bahwa molekul mtDNA DAMP (pola molekuler yang terkait dengan kerusakan mitokondria) yang berasal dari mitokondria dapat menyebabkan perubahan inflamasi pada sel mikroglial (BV2). Dengan demikian, mereka juga dapat berkontribusi pada peradangan saraf penyakit Alzheimer.
Artikel yang diterbitkan di FARMACIA (2021) ini menggunakan sel BV2 dan menentukan efek terapeutik Huanglian Jiedu Decoction (HLJDD) pada penyakit Alzheimer. Studi tersebut menemukan bahwa HLJDD mempromosikan fagositosis amiloid-beta BV2 dengan meningkatkan ekspresi protein Trm2 yang divalidasi melalui analisis western blot BV2.
Alpha-synuclein mengaktifkan mikroglia BV2 tergantung pada keadaan agregasinya
Artikel penelitian yang diterbitkan dalam Biochemical and Biophysical Research Communications (2016) ini mengusulkan bahwa alpha-synuclein, protein yang larut dalam sistem saraf pusat orang dewasa, dapat mengaktifkan sel BV2 tergantung pada status agregasinya.
Eksosom sel BV-2 yang diinduksi oleh alfa-sinuklein: mediator penting dari degenerasi saraf pada PD
Penelitian ini dipublikasikan di Neuroscience Letters pada tahun 2013. Penelitian ini menyatakan bahwa eksosom yang disekresikan dari sel mikroglial BV2 yang diaktifkan oleh alfa-sinuklein dapat menjadi mediator penting dari degenerasi saraf pada penyakit Parkinson.
Studi ini diterbitkan dalam Frontiers Cellular Neuroscience (2019). Penelitian ini mengusulkan bahwa Idebenone, sebuah antioksidan, memodulasi polarisasi mikroglial dan mengurangi peradangan pada sel BV2 yang diaktifkan lipopolisakarida dan model tikus penyakit Parkinson yang diinduksi 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP).
6.sumber daya untuk garis sel BV2: Protokol, Video, dan Lainnya
Sumber daya online yang tersedia di BV2 terbatas. Berikut adalah beberapa di antaranya.
- Subkultur garis sel BV2: Tautan situs web ini terdiri dari protokol singkat untuk subkultur garis sel BV2.
- Mencairkan sel beku: Video ini membantu Anda mempelajari protokol dasar untuk mencairkan dan membiakkan sel beku.
Protokol kultur sel untuk sel BV2 disebutkan di sini.
- Kultur sel BV2: Tautan situs web ini berisi protokol kultur sel BV2. Selain itu, situs web ini juga menyediakan media kultur sel dan komposisi media pembekuan untuk lini sel BV2.
Referensi
- Wang, Y., Y. Peng, dan H. Yan, Komentar: Model Kultur Sel In Vitro Neuroinflamasi dan Aplikasi Potensial untuk Gangguan Neurologis. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
- Sarkar, S., dkk., Karakterisasi dan analisis komparatif dari model sel mikroglial tikus baru untuk mempelajari mekanisme neuroinflamasi selama penghinaan neurotoksik. Neurotoksikologi, 2018. 67: p. 129-140.
- Zhao, F., dkk., Efek pelindung saraf rhaponticin terhadap penyakit Parkinson: Wawasan dari model BV-2 in vitro dan model tikus yang diinduksi MPTP in vivo. Jurnal Toksikologi Biokimia dan Molekuler, 2021. 35(1): p. e22631.
- Gao, X., dkk., Beta-naphthoflavone menghambat peradangan yang diinduksi LPS pada sel BV-2 melalui sumbu pensinyalan AKT / NRF-2 / HO-1-NF-κB. Imunobiologi, 2020. 225(4): p. 151965.
- Tada, S., dkk., Zonisamide Memperbaiki Mitokondriopati Mikroglial pada Model Penyakit Parkinson. Ilmu Otak, 2022. 12(2): p. 268.