Sel ARPE-19 - Tinjauan Mendalam tentang Penelitian Sel Epitel Pigmen Retina Menggunakan ARPE-19
ARPE-19 adalah sel epitel pigmen retina yang berasal dari manusia dan muncul secara spontan. Sel-sel ini digunakan untuk mempelajari berbagai aspek biologi retina, kondisi patologis, dan intervensi terapeutik (farmakologi). Artikel ini bertujuan untuk memberikan wawasan komprehensif mengenai sel ARPE-19 yang diimortalkan. Secara khusus, karakteristik umum, kondisi kultur, dan berbagai aplikasi penelitian dari garis sel ini akan dibahas. Oleh karena itu, dengan membaca artikel ini, Anda akan memperoleh pemahaman mendalam mengenai:
- Media Pertumbuhan
- Media DMEM atau Ham’s F12 digunakan untuk membiakkan garis sel ARPE-19. Media ARPE-19 ditambah dengan 5% FBS, 3,1 g/L Glukosa, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-Glutamin, 1,0 mM Sodium piruvat, dan 1,2 g/L NaHCO3. Media diganti 2 hingga 3 kali seminggu.
- Waktu Perlipatan
- Waktu penggandaan ARPE-19 sekitar 55-65 jam. Sel-sel ini dapat mengalami hingga 48 kali penggandaan populasi.
- Jenis Pertumbuhan
- ARPE-19 adalah garis sel yang melekat.
- Tingkat Keamanan Biologis
- BSL-1
- Tersedia dari
- Cytion — Pesan ARPE-19
- Sel ARPE-19: Asal dan karakteristik umum
- Garis sel ARPE-19: Informasi kultur
- Keunggulan & Keterbatasan sel ARPE-19
- Aplikasi garis sel ARPE-19 dalam penelitian
- Sel ARPE-19: Publikasi penelitian
- Sumber daya untuk garis sel ARPE-19: Protokol, Video, dan Lainnya
Sel ARPE-19: Asal-usul dan atribut umum
Mengetahui asal-usul dan atribut umum suatu garis sel sangat penting untuk penggunaannya yang efektif dalam penelitian. Bagian artikel ini akan membahas semua informasi mengenai garis sel ARPE. Misalnya, Apa itu garis sel ARPE-19? Mengapa menggunakan sel ARPE-19? Apa itu garis sel ARPE-19/HPV-16? Apakah sel ARPE-19 abadi? Bagaimana morfologi dan ukuran sel ARPE-19?
- Baris sel epitel pigmen retina yang diabadi, ARPE-19, berasal dari mata seorang pria berusia 19 tahun yang meninggal akibat cedera kepala dalam kecelakaan. Baris sel ini didirikan oleh Amy Aotaki-Keen pada tahun 1986.
- Sel-sel ini mengekspresikan penanda sel epitel pigmen retina, yaitu CRALBP dan RPE-65, yang menunjukkan bahwa sel-sel ini dapat membentuk lapisan tunggal yang stabil yang dicirikan oleh polaritas morfologis dan fungsional.
- Sel ARPE-19 memiliki morfologi mirip sel epitel.
- Sel ARPE-19 sebagian besar memiliki kariotipe normal kecuali satu delesi dan adisi pada lengan panjang kromosom 9 dan 19, masing-masing. Selain itu, beberapa aneuploidi juga teramati [1].
Garis sel ARPE-19: Informasi tentang kultur sel
Informasi dasar tentang kultur sel sangat penting untuk menangani dan memelihara garis sel dengan benar. Bagian ini akan membantu Anda memahami poin-poin penting dalam kultur garis sel ARPE-19. Anda akan mengetahui: berapa waktu penggandaan ARPE-19? Berapa kepadatan penyemaian ARPE-19? Berapa kepadatan sel ARPE-19? Apa itu media pembekuan ARPE-19? Bagaimana cara membiakkan garis sel ARPE-19?
Poin-Poin Penting dalam Pembiakan Sel ARPE-19
Waktu Penggandaan Populasi:
Waktu penggandaan ARPE-19 sekitar 55-65 jam. Sel-sel ini dapat mengalami hingga 48 kali penggandaan populasi.
Melekat atau dalam Suspensi:
ARPE-19 adalah garis sel yang melekat.
Rasio subkultur:
Rasio subkultur ARPE-19 adalah 1:3 hingga 1:5. Sel yang melekat dibilas dengan 1x PBS dan diinkubasi dengan larutan disosiasi, accutase, selama 8 hingga 10 menit. Sel yang terlepas ditambahkan dengan media baru dan disentrifugasi. Endapan sel disuspensi kembali dan dituangkan ke dalam labu kultur yang berisi media baru.
Media Pertumbuhan:
DMEM atau media Ham’s F12 digunakan untuk membiakkan garis sel ARPE-19. Media ARPE-19 ditambah dengan 5% FBS, 3,1 g/L glukosa, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamin, 1,0 mM natrium piruvat, dan 1,2 g/L NaHCO3. Media diganti 2 hingga 3 kali seminggu.
Kondisi Pertumbuhan:
Sel ARPE-19 disimpan dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37°C dengan pasokan CO2 5%.
Penyimpanan:
Garis sel dapat disimpan dalam fase uap nitrogen cair atau pada suhu di bawah -150°C untuk menjaga viabilitas sel dalam jangka panjang.
Proses Pembekuan dan Media:
CM-1 atau CM-ACF digunakan sebagai media pembekuan ARPE-19. Singkatnya, sel dibekukan melalui metode pembekuan lambat yang hanya memungkinkan penurunan suhu sebesar 1 °C per menit dan melindungi sel dari guncangan.
Proses Pencairan:
Sel dicairkan dalam penangas air yang telah diatur pada suhu 37°C. Setelah hanya tersisa sedikit gumpalan es, sel ditambahkan ke media kultur baru dan disentrifugasi. Hal ini untuk menghilangkan unsur-unsur media pembekuan. Selanjutnya, pelet sel disuspensi kembali, dan sel-sel tersebut dimasukkan ke dalam labu untuk dikultur.
Tingkat Keamanan Biologis:
Sel ARPE-19 ditangani di laboratorium biosafety level 1.
Keunggulan & Keterbatasan Sel ARPE-19
Sel ARPE-19 banyak digunakan dalam studi biologi sel retina. Seperti sel lainnya, sel ini juga memiliki beberapa kelebihan dan keterbatasan. Beberapa di antaranya tercantum dalam bagian ini:
Keunggulan
Keunggulan utama dari garis sel ARPE-19 meliputi:
Model sel retina
Sel ARPE-19 sangat mirip dengan sel epitel pigmen retina manusia, sehingga ideal untuk mempelajari penyakit retina dan pengujian obat.
Laju pertumbuhan yang stabil
Sel-sel ini menunjukkan pertumbuhan yang stabil dan dapat dipertahankan dalam jangka waktu yang lama, sehingga memudahkan eksperimen jangka panjang.
Kemampuan transfeksi
Garis sel ARPE-19 merupakan inang transfeksi yang sangat baik, yang banyak digunakan dalam studi ekspresi sementara maupun stabil.
Keterbatasan
Berikut adalah beberapa keterbatasan yang terkait dengan garis sel ARPE-19:
Diferensiasi Terbatas
Diferensiasi ARPE-19 terbatas dibandingkan dengan sel retina primer. Hal ini berpotensi memengaruhi studi tertentu yang berkaitan dengan diferensiasi.
Aplikasi garis sel ARPE-19 dalam penelitian
Baris sel ARPE-19 memiliki banyak aplikasi dalam penelitian retina. Di sini, kami telah membahas beberapa penggunaan penelitian yang spesifik dan signifikan dari baris sel epitel pigmen retina ini.
- Penelitian penyakit retina: Sel ARPE-19 memberikan wawasan berharga tentang patogenesis retina. Para peneliti menggunakan sel untuk menyelidiki mekanisme penyakit dan potensi pengobatan. Sebuah studi yang dilakukan pada tahun 2020 menemukan bahwa RNA sirkular hsa_circ_0041795 berinteraksi dengan miRNA-646 dan VEGFC untuk memfasilitasi cedera yang diinduksi glukosa tinggi pada sel epitel pigmen retina manusia ARPE-19. Oleh karena itu, studi ini mengusulkan RNA sirkular ini sebagai target terapeutik dan diagnostik yang efektif untuk melawan retinopati diabetik [2]. Demikian pula, Jing Yang dan rekan-rekannya menggunakan sel ARPE-19 dan memberikan wawasan mengenai patogenesis retinopati diabetik. Mereka meneliti bahwa penghambatan lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) dapat menekan respons inflamasi dan transisi epitel ke mesenkim pada sel ARPE-19 yang diberi perlakuan glukosa tinggi [3].
- Pengujian obat: Sel ARPE-19 digunakan untuk mengevaluasi kemanjuran dan keamanan obat serta senyawa, yang membantu mengembangkan pengobatan atau terapi untuk penyakit retina. Misalnya, sebuah studi yang dilakukan pada tahun 2019 menemukan efek perlindungan bioaktif Syzygium malaccense terhadap stres yang diinduksi hidrogen peroksida pada sel epitel pigmen retina manusia, ARPE-19 [4]. Menyusul hal ini, sebuah studi menemukan peran terapeutik ekstrak Prunella vulgaris var. L terhadap cedera yang diinduksi cahaya biru pada sel ARPE-19 dan model tikus [5].
5. Sel ARPE-19: Publikasi penelitian
Berikut ini adalah beberapa publikasi penelitian menarik yang menampilkan sel epitel pigmen retina ARPE-19.
Evaluasi respons mikroRNA pada sel ARPE-19 terhadap stres oksidatif
Artikel penelitian ini diterbitkan pada tahun 2018 di jurnal Cutaneous and Ocular Toxicology. Studi ini mengevaluasi ekspresi miRNA sebagai respons terhadap stres oksidatif yang diinduksi pada sel epitel pigmen retina manusia ARPE-19 melalui perlakuan hidrogen peroksida.
Publikasi dalam jurnal World Journal of Stem Cells (2021) ini mengusulkan bahwa medium kondisioner sel ARPE-19 mengandung faktor pertumbuhan yang mendorong diferensiasi saraf sel punca mesenkimal yang berasal dari jaringan adiposa.
Studi ini diterbitkan dalam International Journal of Molecular Sciences (2019). Studi tersebut menyatakan bahwa quercetin melindungi pelepasan kemokin yang dirangsang oleh IL-1β pada sel ARPE-19 dengan mencegah aktivasi kaskade MAPK dan NF-κB untuk memperbaiki respons inflamasi.
Artikel penelitian ini diterbitkan dalam International Journal of Molecular Sciences (2018). Studi ini mengevaluasi kemungkinan efek stres oksidatif dan peradangan terhadap fungsi SIRT1 (Sirtuin 1) dan DNMT (DNA methyltransferases) serta metilasi LINE-1 (long interspersed nuclear element-1) pada sel ARPE-19.
Artikel dalam jurnal Antioxidants (2022) ini menemukan bahwa Ekstrak Bunga Chrysanthemum boreale memberikan efek perlindungan terhadap kerusakan retina yang diinduksi oleh N-retinylidene-N-retinylethanolamine (A2E) pada sel ARPE-19.
Sumber daya untuk garis sel ARPE-19: Protokol, Video, dan Lainnya
ARPE-19 adalah garis sel epitel retina yang banyak digunakan. Sumber daya yang tersedia mengenai protokol kultur sel dan transfeksi ARPE-19 tercantum di sini:
- Transfeksi ARPE-19: Video ini adalah panduan langkah demi langkah untuk mempelajari protokol transfeksi untuk garis sel ARPE-19.
Berikut adalah beberapa sumber daya yang menjelaskan protokol kultur sel ARPE-19:
- Protokol kultur sel ARPE-19: Tautan ini berisi informasi tentang kultur dan pemeliharaan sel ARPE-19. Tautan ini mencakup informasi tentang media ARPE-19, kondisi kultur, protokol subkultur, serta penanganan kultur proliferatif dan kultur yang diawetkan dengan kriopreservasi.
Referensi
- Schnichels, S., dkk., Retina dalam cawan: Kultur sel, eksplan retina, dan model hewan untuk penyakit umum pada retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: hlm. 100880.
- Sun, H. dan X. Kang, hsa_circ_0041795 berkontribusi terhadap kerusakan sel epitel pigmen retina manusia (ARPE 19) yang disebabkan oleh glukosa tinggi melalui penyerapan miR-646 dan aktivasi VEGFC. Gene, 2020. 747: hlm. 144654.
- Yang, J., dkk., SNHG1 yang dibungkam menghambat transisi epitel-mesenkim dan respons inflamasi sel ARPE-19 yang diinduksi oleh glukosa tinggi. J Inflamm Res, 2021. 14: hlm. 1563-1573.
- Arumugam, B., dkk., Efek perlindungan turunan myricetin dari Syzygium malaccense terhadap stres yang diinduksi hidrogen peroksida pada sel ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25: hlm. 47.
- Kim, J., K. Cho, dan S.-Y. Choung, Efek perlindungan ekstrak Prunella vulgaris var. L terhadap kerusakan yang diinduksi cahaya biru pada sel ARPE-19 dan retina tikus. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: hlm. 622-631.