Publié : 2023 | Dernière mise à jour : mai 2026

Techniques de dissociation des cultures cellulaires

La dissociation des cellules de culture est une étape cruciale dans le maintien d'une culture cellulaire. Elle consiste à détacher les cellules de leur surface de croissance afin de permettre la sous-culture ou la récolte. Cette section présente deux méthodes principales : l'utilisation de tampons de dissociation sans enzymes et l'utilisation de réactifs enzymatiques.

Utilisation de tampons de dissociation cellulaire sans enzymes

Cette méthode est douce et préserve l'intégrité cellulaire sans recourir à des enzymes :

1. Préparation
   • S'assurer que tous les réactifs sont chauffés à 37 °C avant utilisation afin d'éviter tout choc pour les cellules.
2. Retrait du milieu de culture :
   • Jetez l'ancien milieu de culture du récipient de culture.
3. Rinçage
   • Rincez les monocouches cellulaires avec 5 ml de PBS sans calcium ni magnésium par flacon T75 ou boîte de 100 mm.
   • Agiter doucement le récipient pendant 30 à 60 secondes à température ambiante.
   • Aspirer et jeter la solution de rinçage.
   • Répétez cette étape de rinçage une fois de plus.
4. Dissociation
   • Ajouter environ 5 ml de tampon de dissociation cellulaire sans enzyme dans le récipient.
   • Agiter doucement à température ambiante pendant 1 à 2 minutes et vérifier la dissociation au microscope.
   • Si nécessaire, tapoter le flacon ou la boîte contre la main pour déloger les cellules.
   • Si les cellules adhèrent, laissez-les reposer à température ambiante pendant 2 à 5 minutes supplémentaires, puis tapotez à nouveau si nécessaire, en utilisant davantage de tampon de dissociation.
   • Une fois les cellules détachées, ajoutez au moins 5 ml de milieu de culture complet pour neutraliser le tampon de dissociation et remettre les cellules en suspension.
5. Contrôle de viabilité
   • Surveillez la viabilité cellulaire pendant la repiquage, en vous assurant qu'elle reste supérieure à 90 %.

Utilisation d'autres réactifs pour la dissociation

Cette méthode permet d'utiliser divers réactifs de dissociation :

1. Élimination du milieu usagé
   • Éliminez l'ancien milieu de culture du récipient.
2. Lavage des cellules
   • Lavez les cellules avec une solution saline équilibrée exempte de calcium et de magnésium, ou utilisez de l'EDTA.
   • Ajoutez délicatement la solution de lavage du côté opposé aux cellules et agitez le récipient pendant 1 à 2 minutes avant de jeter la solution de lavage.
3. Dissociation
   • Appliquez 2 à 3 ml de la solution de dissociation choisie par 25 cm² de surface de culture, en veillant à bien recouvrir la couche cellulaire.
   • Incuber le récipient à 37 °C et agiter doucement. La dissociation se produit généralement en 5 à 15 minutes, selon la lignée cellulaire.
   • Pour les cellules récalcitrantes, tapoter le récipient peut accélérer le processus.
   • Observez attentivement les cellules pour éviter toute surexposition et tout dommage potentiel.
4. Récolte des cellules
   • Une fois les cellules complètement détachées, laissez-les se déposer au fond du récipient en le plaçant en position verticale.
   • Ajoutez du milieu complet, puis dispersez et recueillez les cellules en pipettant au-dessus de la couche cellulaire.
   • Comptez les cellules et procédez à la repiquage.

Dans les deux méthodes, il est important de déterminer les conditions optimales pour chaque lignée cellulaire par observation empirique. Le processus doit préserver la viabilité cellulaire, qui doit être vérifiée régulièrement pour s'assurer qu'elle dépasse 90 % pendant la repiquage. Ces procédures fournissent une base que les chercheurs peuvent adapter en fonction des exigences et des caractéristiques spécifiques de leurs lignées cellulaires.

Aperçu des techniques de repiquage des cellules adhérentes

Une repique efficace des cellules adhérentes nécessite leur détachement du récipient de culture. Diverses méthodes sont utilisées, chacune adaptée à différents types de cellules et conditions. Lors du choix d'une méthode de dissociation, il est crucial de prendre en compte les besoins spécifiques de la lignée cellulaire et les objectifs de l'expérience. Une surveillance régulière de la viabilité cellulaire, avec pour objectif un taux supérieur à 90 % au moment de la repiquage, est essentielle pour maintenir la santé et la productivité de la culture. Voici un aperçu de ces procédures :