Publié : 2023 | Dernière révision : mai 2026

Comprendre le « nombre de passages »

Le concept de « numéro de passage » est central en culture cellulaire et fait référence au nombre de fois où une lignée cellulaire a été repiquée ou transférée dans un milieu de culture frais après sa réactivation initiale suite à une cryoconservation ou à sa réception d’une banque de cellules de référence. Cet indicateur est essentiel pour retracer la lignée et l’historique d’une culture cellulaire.

Aperçu du processus

Dans la pratique courante de la culture cellulaire, lorsque les cellules atteignent une certaine densité, elles sont transférées vers un nouveau milieu afin de maintenir leur croissance et d'éviter la surconfluence. Chaque transfert de ce type est enregistré comme un passage.
Traditionnellement, lorsque nous recevions une lignée cellulaire, par exemple au passage 60 de la part du déposant, nous reprenions à partir de ce numéro de passage, en l'incrémentant à chaque repiquage. Cette pratique, bien qu'elle permette de conserver un fil conducteur historique, conduisait souvent à des nombres de passages élevés dès le départ. Compte tenu de l'utilisation intensive et souvent longue de plusieurs décennies de certaines lignées cellulaires, telles que la lignée HeLa établie en 1951, il n'est pas possible de déterminer le nombre total de passages depuis la création de la lignée cellulaire.
Afin d'améliorer la clarté et la qualité de nos processus de culture cellulaire, nous avons révisé cette approche au début de l'année 2023. Désormais, lorsque nous démarrons une culture à partir d'un nouveau flacon, quel que soit le nombre de passages provenant du déposant, nous remettons le compteur à zéro et recommençons à compter à partir du passage 1 pour chaque lot fabriqué.

Justification

Le passage est une procédure essentielle pour garantir la santé et l'utilité des cultures cellulaires à des fins de recherche. Lorsque les cellules prolifèrent de manière excessive, elles subissent une inhibition de contact, ce qui réduit leur taux de prolifération et peut nuire aux résultats expérimentaux. Pour atténuer ces problèmes, Cytion met en œuvre des contrôles rigoureux sur les densités cellulaires auxquelles la repiquage a lieu, maintenant ainsi un faible nombre de passages pendant la fabrication de ses lignées cellulaires. Cette précaution permet d'éviter les effets indésirables d'un passage excessif, tels que les anomalies morphologiques, les modifications du taux de croissance et la dérive génétique, qui peuvent entraîner des différences marquées par rapport à l'état d'origine des cellules. Des périodes prolongées de repiquage peuvent également accroître le risque de contamination microbienne.

Notre engagement

Nous veillons à ce que les cellules fournies aux chercheurs soient aussi proches que possible de la constitution génétique et des caractéristiques phénotypiques d'origine, renforçant ainsi la fiabilité des données expérimentales. De plus, en documentant méticuleusement chaque passage, Cytion contribue à la traçabilité et à la reproductibilité de la recherche, un engagement qui reflète les normes élevées de la pratique en matière de culture cellulaire. Les chercheurs sont encouragés à tenir des registres précis du nombre de passages, tant sur les récipients de culture que dans leurs cahiers de laboratoire, afin de disposer d'une référence sur l'état et l'historique de leurs cultures cellulaires.

Conseils et erreurs courantes

Il est essentiel de suivre le protocole correct, mais il est tout aussi important de comprendre les pièges courants. Les procédures de culture cellulaire sont sensibles aux moindres écarts de technique, de timing et de qualité des réactifs. Les conseils suivants reflètent les meilleures pratiques recommandées par l'équipe scientifique de Cytion, sur la base d'une vaste expérience en culture cellulaire.

Préchauffez toujours les réactifs à 37 °C avant utilisation afin de minimiser le choc thermique subi par les cellules.
Travaillez rapidement mais avec soin — réduisez au minimum le temps que les cellules passent hors de l'incubateur.
Utilisez des réactifs certifiés et testés pour les mycoplasmes afin d'éviter toute contamination susceptible de compromettre les résultats expérimentaux.
Documentez chaque étape, y compris le numéro de passage, la date et les observations de la morphologie cellulaire.
Validez votre protocole à l'aide d'une petite expérience pilote avant de passer à l'échelle supérieure afin d'éviter de gaspiller des réactifs coûteux.

Réactifs Cytion recommandés

Cytion propose une gamme de réactifs de culture cellulaire validés, spécialement conçus pour ce protocole. Tous les réactifs ont été testés sur des lignées cellulaires couramment utilisées et sont accompagnés d'une documentation complète. Rendez-vous sur cytion.com/Media-Reagents pour découvrir l'ensemble de la gamme.