Cellules ARPE-19 - Regard spécialisé sur la recherche sur les cellules épithéliales du pigment rétinien avec ARPE-19
LesARPE-19 sont des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes spontanées d'origine humaine. Elles sont utilisées pour étudier divers aspects de la biologie de la rétine, des conditions pathologiques et des interventions thérapeutiques (pharmacologie). Cet article vise à fournir des informations complètes sur les cellules immortalisées ARPE-19. Il aborde principalement les caractéristiques générales, les conditions de culture et les diverses applications de recherche de la lignée cellulaire. Par conséquent, en lisant cet article, vous aurez une compréhension approfondie de ce qui suit :
- Les cellules ARPE-19 : Origine et caractéristiques générales
- Lignée cellulaire ARPE-19 : Informations sur la culture
- Avantages et limites des cellules ARPE-19
- Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 dans la recherche
- Cellules ARPE-19 : Publications de recherche
- Ressources pour la lignée cellulaire ARPE-19 : Protocoles, vidéos et autres
1. Cellules ARPE-19 : Origine et caractéristiques générales
Il est impératif de connaître l'origine et les caractéristiques générales d'une lignée cellulaire pour pouvoir l'utiliser efficacement dans la recherche. Cette section de l'article couvrira toutes les informations sur la lignée cellulaire ARPE. Par exemple, qu'est-ce que la lignée cellulaire ARPE-19 ? Pourquoi utiliser les cellules ARPE-19 ? Qu'est-ce que la lignée cellulaire ARPE-19/HPV-16 ? Les cellules ARPE-19 sont-elles immortelles ? Quelles sont la morphologie et la taille des cellules ARPE-19 ?
- La lignée de cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes immortalisées, ARPE-19, a été dérivée des yeux d'un jeune homme de 19 ans décédé des suites d'un traumatisme crânien lors d'un accident. Elle a été créée par Amy Aotaki-Keen en 1986.
- Ces cellules expriment les marqueurs des cellules épithéliales du pigment rétinien, c'est-à-dire CRALBP et RPE-65, ce qui suggère qu'elles peuvent former des monocouches stables caractérisées par une polarité morphologique et fonctionnelle.
- Les cellules ARPE-19 possèdent une morphologie semblable à celle des cellules épithéliales.
- Les cellules ARPE-19 ont pour la plupart un caryotype normal, à l'exception d'une délétion et d'un ajout dans le bras long des chromosomes 9 et 19, respectivement. En outre, quelques aneuploïdies sont également observées [1].
2.lignée cellulaire ARPE-19 : Informations sur la culture
Les informations de base sur la culture cellulaire sont essentielles pour manipuler et maintenir correctement une lignée cellulaire. Cette section vous aidera à apprendre les points clés de la culture de la lignée cellulaire ARPE-19. Vous saurez ce qu'est le temps de doublement de l'ARPE-19 Quelle est la densité d'ensemencement de l'ARPE-19 ? Quelle est la densité cellulaire de l'ARPE-19 ? Qu'est-ce que le milieu de congélation ARPE-19 ? Comment cultiver la lignée cellulaire ARPE-19 ?
Points clés pour la culture des cellules ARPE-19
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Temps de doublement de la population : |
Le temps de doublement des ARPE-19 est d'environ 55 à 65 heures. Elles peuvent subir jusqu'à 48 doublements de population. |
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Cellules adhérentes ou en suspension : |
ARPE-19 est une lignée cellulaire adhérente. |
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Ratio de sous-culture : |
Le rapport de sous-culture de l'ARPE-19 est de 1:3 à 1:5. Les cellules adhérentes sont rincées avec 1x PBS et incubées avec une solution de dissociation, l'accutase, pendant 8 à 10 minutes. Les cellules détachées sont ajoutées à du milieu frais et centrifugées. Le culot cellulaire est à nouveau remis en suspension et versé dans un flacon de culture contenant du milieu frais. |
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Milieu de croissance : |
Le milieu DMEM ou Ham's F12 est utilisé pour la culture de la lignée cellulaire ARPE-19. Le milieu ARPE-19 est supplémenté avec 5% de FBS, 3,1 g/L de glucose, 15 mM de HEPES, 1,6 mM de L-Glutamine, 1,0 mM de pyruvate de sodium et 1,2 g/L de NaHCO3. Le milieu est remplacé 2 à 3 fois par semaine. |
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Conditions de croissance : |
Les cellules ARPE-19 sont maintenues dans un incubateur humidifié à une température de 37°C avec un apport de 5% de CO2. |
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Stockage : |
La lignée cellulaire peut être conservée dans la phase vapeur de l'azote liquide ou à une température inférieure à -150°C pour protéger la viabilité des cellules à long terme. |
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Processus de congélation et milieu : |
Les milieux de congélation CM-1 ou CM-ACF sont utilisés pour la congélation des ARPE-19. En bref, les cellules sont congelées par une méthode de congélation lente qui ne permet qu'une baisse de température de 1 °C par minute et protège les cellules contre les chocs. |
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Processus de décongélation : |
Les cellules sont décongelées dans un bain-marie préréglé à 37°C. Après avoir laissé un petit amas de glace, les cellules sont ajoutées à un milieu de culture frais et centrifugées. Cette opération permet d'éliminer les éléments du milieu de culture qui ont gelé. Ensuite, le culot cellulaire est remis en suspension et les cellules sont distribuées dans un flacon pour la culture. |
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Niveau de biosécurité : |
Les cellules ARPE-19 sont manipulées dans des laboratoires de biosécurité 1. |
3.avantages et limites des cellules ARPE-19
Les cellules ARPE-19 sont largement utilisées dans les études de biologie cellulaire rétinienne. Comme d'autres cellules, elles présentent des avantages et des limites. Quelques-uns d'entre eux sont énumérés dans cette section :
Avantages
Les principaux avantages de la lignée cellulaire ARPE-19 sont les suivants :
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Modèle de cellule rétinienne |
Les cellules ARPE-19 ressemblent beaucoup aux cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines, ce qui les rend idéales pour l'étude des maladies rétiniennes et les tests de médicaments. |
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Taux de croissance stable |
Ces cellules présentent une croissance stable et peuvent être maintenues pendant de longues périodes, ce qui facilite les expériences à long terme. |
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Possibilité de transfection |
La lignée cellulaire ARPE-19 est un excellent hôte de transfection, largement utilisé dans les études d'expression transitoire et stable. |
Limites
Voici quelques limitations associées à la lignée cellulaire ARPE-19 :
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Différenciation limitée |
La différenciation des ARPE-19 est limitée par rapport aux cellules rétiniennes primaires. Cela peut avoir un impact potentiel sur certaines études liées à la différenciation. |
4.applications de la lignée cellulaire ARPE-19 dans la recherche
La lignée cellulaire ARPE-19 a de nombreuses applications dans la recherche sur la rétine. Nous présentons ici quelques utilisations spécifiques et significatives de cette lignée de cellules épithéliales du pigment rétinien.
- Recherche sur les maladies de la rétine : Les cellules ARPE-19 offrent des informations précieuses sur la pathogenèse de la rétine. Les chercheurs utilisent les cellules pour étudier les mécanismes de la maladie et les traitements potentiels. Une étude menée en 2020 a révélé que l'ARN circulaire hsa_circ_0041795 interagit avec le miRNA-646 et le VEGFC pour faciliter les lésions induites par le glucose dans les cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines ARPE-19. L'étude propose donc cet ARN circulaire comme une cible thérapeutique et diagnostique efficace pour lutter contre la rétinopathie diabétique [2]. De même, Jing Yang et ses collègues ont utilisé des cellules ARPE-19 et ont fourni des informations sur la pathogenèse de la rétinopathie diabétique. Ils ont étudié que l'inhibition du lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) peut supprimer la réponse inflammatoire et la transition épithéliale-mésenchymateuse des cellules ARPE-19 traitées par le glucose [3].
- Test de médicaments : Les cellules ARPE-19 sont utilisées pour évaluer l'efficacité et la sécurité des médicaments et des composés, ce qui permet de développer des traitements ou des thérapies pour les maladies de la rétine. Par exemple, une étude réalisée en 2019 a révélé les effets protecteurs des bioactifs de Syzygium malaccense contre le stress induit par le peroxyde d'hydrogène dans les cellules épithéliales du pigment rétinien humain, ARPE-19 [4]. Par la suite, une étude a mis en évidence le rôle thérapeutique de l'extrait de Prunella vulgaris var. L contre les lésions induites par la lumière bleue dans les cellules ARPE-19 et le modèle de souris [5].
5.cellules ARPE-19 : Publications de recherche
Voici quelques publications de recherche intéressantes concernant les cellules épithéliales du pigment rétinien ARPE-19.
Évaluation des réponses des microARN dans les cellules ARPE-19 contre le stress oxydatif
Cet article de recherche a été publié en 2018 dans la revue Cutaneous and Ocular Toxicology. Cette étude a évalué l'expression des miARN en réponse au stress oxydatif induit dans les cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines ARPE-19 via un traitement au peroxyde d'hydrogène.
Cette publication dans le World Journal of Stem Cells (2021) propose que le milieu conditionné des cellules ARPE-19 contienne des facteurs de croissance qui encouragent la différenciation neuronale des cellules souches mésenchymateuses dérivées des tissus adipeux.
Cette étude a été publiée dans l'International Journal of Molecular Sciences (2019). Elle indique que la quercétine protège la libération de chimiokines stimulée par l'IL-1β dans les cellules ARPE-19 en empêchant l'activation des cascades MAPK et NF-κB afin d'améliorer la réponse inflammatoire.
Cet article de recherche a été publié dans l'International Journal of Molecular Sciences (2018). Cette étude a évalué les effets possibles du stress oxydatif et de l'inflammation sur les fonctions de SIRT1 (Sirtuine 1) et des DNMT (ADN méthyltransférases) ainsi que sur la méthylation LINE-1 (long interspersed nuclear element-1) dans les cellules ARPE-19.
Cet article paru dans Antioxidants (2022) montre que les extraits de fleurs de Chrysanthemum boreale exercent des effets protecteurs contre les lésions rétiniennes induites par la N-rétinylidène-N-rétinyléthanolamine (A2E) dans les cellules ARPE-19.
6.ressources pour la lignée cellulaire ARPE-19 : Protocoles, vidéos et autres
ARPE-19 est une lignée de cellules épithéliales rétiniennes largement utilisée. Les ressources disponibles couvrant les protocoles de culture et de transfection des cellules ARPE-19 sont listées ici :
- Transfection ARPE-19 : Cette vidéo est un guide étape par étape pour apprendre le protocole de transfection de la lignée cellulaire ARPE-19.
Voici quelques ressources décrivant le protocole de culture des cellules ARPE-19 :
- Protocole de culture des cellules ARPE-19: Ce lien contient des informations sur la culture et la maintenance des cellules ARPE-19. Il comprend des informations sur le milieu ARPE-19, les conditions de culture, les protocoles de sous-culture et la manipulation des cultures prolifératives et cryopréservées.
Références
- Schnichels, S., et al, Retina in a dish : Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progrès dans la recherche sur la rétine et les yeux, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. et X. Kang, hsa_circ_0041795 contribue à la lésion des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines (ARPE 19) induite par le glucose élevé via l'éponge miR-646 et l'activation du VEGFC. Gene, 2020. 747: p. 144654.
- Yang, J., et al, Silenced SNHG1 Inhibited Epithelial-Mesenchymal Transition and Inflammatory Response of ARPE-19 Cells Induced by High Glucose. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al, Effet protecteur des dérivés de myricétine de Syzygium malaccense contre le stress induit par le peroxyde d'hydrogène dans les cellules ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
- Kim, J., K. Cho, et S.-Y. Choung, Protective effect of Prunella vulgaris var. L extract against blue light induced damages in ARPE-19 cells and mouse retina. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: p. 622-631.