Cellules ARPE-19 - Aperçu détaillé de la recherche sur les cellules de l'épithélium pigmentaire rétinien avec les cellules ARPE-19
Les cellules ARPE-19 sont des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes d'origine humaine issues d'une transformation spontanée. Elles sont utilisées pour étudier divers aspects de la biologie rétinienne, des pathologies et des interventions thérapeutiques (pharmacologie). Cet article vise à fournir des informations complètes sur les cellules immortalisées ARPE-19. Il abordera principalement les caractéristiques générales, les conditions de culture et les diverses applications de recherche de cette lignée cellulaire. Ainsi, en lisant cet article, vous acquerrez une compréhension approfondie des points suivants :
- Milieu de culture
- Le milieu DMEM ou Ham’s F12 est utilisé pour cultiver la lignée cellulaire ARPE-19. Le milieu ARPE-19 est complété par 5 % de FBS, 3,1 g/L de glucose, 15 mM d’HEPES, 1,6 mM de L-glutamine, 1,0 mM de pyruvate de sodium et 1,2 g/L de NaHCO3. Le milieu est renouvelé 2 à 3 fois par semaine.
- Temps de doublement
- Le temps de doublement de la lignée ARPE-19 est d'environ 55 à 65 heures. Elle peut subir jusqu'à 48 doublements de population.
- Type de croissance
- ARPE-19 est une lignée cellulaire adhérente.
- Niveau de biosécurité
- BSL-1
- Disponible auprès de
- Cytion — Commander ARPE-19
- Cellules ARPE-19 : origine et caractéristiques générales
- Lignée cellulaire ARPE-19 : informations sur la culture
- Avantages et limites des cellules ARPE-19
- Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 dans la recherche
- Cellules ARPE-19 : publications de recherche
- Ressources pour la lignée cellulaire ARPE-19 : protocoles, vidéos et plus encore
- Cellules ARPE-19 : origine et caractéristiques générales
- Lignée cellulaire ARPE-19 : informations sur la culture
- Avantages et limites des cellules ARPE-19
- Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 dans la recherche
- 5. Cellules ARPE-19 : publications de recherche
- Ressources pour la lignée cellulaire ARPE-19 : protocoles, vidéos et plus encore
- Foire aux questions
Cellules ARPE-19 : origine et caractéristiques générales
Il est indispensable de connaître l'origine et les caractéristiques générales d'une lignée cellulaire pour l'utiliser efficacement dans la recherche. Cette section de l'article couvre toutes les informations relatives à la lignée cellulaire ARPE. Par exemple : Qu'est-ce que la lignée cellulaire ARPE-19 ? Pourquoi utiliser les cellules ARPE-19 ? Qu'est-ce que la lignée cellulaire ARPE-19/HPV-16 ? Les cellules ARPE-19 sont-elles immortelles ? Quelle est la morphologie et la taille des cellules ARPE-19 ?
- La lignée de cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes immortalisées, ARPE-19, a été dérivée des yeux d'un homme de 19 ans décédé des suites d'un traumatisme crânien lors d'un accident. Elle a été établie par Amy Aotaki-Keen en 1986.
- Ces cellules expriment des marqueurs des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes, à savoir CRALBP et RPE-65, ce qui suggère qu'elles peuvent former des monocouches stables caractérisées par une polarité morphologique et fonctionnelle.
- Les cellules ARPE-19 possèdent une morphologie de type cellulaire épithélial.
- Les cellules ARPE-19 présentent pour la plupart un caryotype normal, à l'exception d'une délétion et d'une addition sur le bras long des chromosomes 9 et 19, respectivement. De plus, certaines aneuploïdies sont également observées [1].
Lignée cellulaire ARPE-19 : informations sur la culture
Les informations de base sur la culture cellulaire sont essentielles pour manipuler et entretenir correctement une lignée cellulaire. Cette section vous aidera à comprendre les points clés de la culture de la lignée cellulaire ARPE-19. Vous apprendrez : quel est le temps de doublement de l'ARPE-19 ? Quelle est la densité d'ensemencement de l'ARPE-19 ? Quelle est la densité cellulaire de l'ARPE-19 ? Quel est le milieu de congélation de l'ARPE-19 ? Comment cultiver la lignée cellulaire ARPE-19 ?
Points clés pour la culture des cellules ARPE-19
Temps de doublement de la population :
Le temps de doublement des cellules ARPE-19 est d'environ 55 à 65 heures. Elles peuvent subir jusqu'à 48 doublements de population.
Adhérentes ou en suspension :
ARPE-19 est une lignée cellulaire adhérente.
Taux de repiquage :
Le rapport de repiquage de l'ARPE-19 est de 1:3 à 1:5. Les cellules adhérentes sont rincées avec du PBS 1x et incubées avec une solution de dissociation, l'Accutase, pendant 8 à 10 minutes. Les cellules détachées sont ajoutées à un milieu frais et centrifugées. Le culot cellulaire est à nouveau remis en suspension et versé dans un flacon de culture contenant du milieu frais.
Milieu de croissance :
Le milieu DMEM ou Ham’s F12 est utilisé pour cultiver la lignée cellulaire ARPE-19. Le milieu ARPE-19 est complété par 5 % de FBS, 3,1 g/L de glucose, 15 mM d'HEPES, 1,6 mM de L-glutamine, 1,0 mM de pyruvate de sodium et 1,2 g/L de NaHCO3. Le milieu est remplacé 2 à 3 fois par semaine.
Conditions de culture :
Les cellules ARPE-19 sont conservées dans un incubateur humidifié à une température de 37 °C avec un apport de 5 % de CO₂.
Conservation :
La lignée cellulaire peut être conservée en phase vapeur d'azote liquide ou à une température inférieure à -150 °C afin de préserver la viabilité des cellules à long terme.
Procédé et milieu de congélation :
Le CM-1 ou le CM-ACF sont utilisés comme milieux de congélation pour les cellules ARPE-19. En bref, les cellules sont congelées selon une méthode de congélation lente qui ne permet qu'une baisse de température de 1 °C par minute et protège les cellules du choc thermique.
Procédé de décongélation :
Les cellules sont décongelées dans un bain-marie préréglé à 37 °C. Une fois qu'il ne reste plus qu'un petit amas de glace, les cellules sont ajoutées à un milieu de culture frais et centrifugées. Cela permet d'éliminer les éléments du milieu de congélation. Ensuite, le culot cellulaire est remis en suspension et les cellules sont transférées dans un flacon pour la culture.
Niveau de biosécurité :
Les cellules ARPE-19 sont manipulées dans des laboratoires de niveau de biosécurité 1.
Avantages et limites des cellules ARPE-19
Les cellules ARPE-19 sont largement utilisées dans les études de biologie cellulaire rétinienne. Comme d'autres cellules, elles présentent également certains avantages et certaines limites. Quelques-uns d'entre eux sont énumérés dans cette section :
Avantages
Les principaux avantages de la lignée cellulaire ARPE-19 sont les suivants :
Modèle de cellules rétiniennes
Les cellules ARPE-19 ressemblent étroitement aux cellules de l'épithélium pigmentaire rétinien humain, ce qui les rend idéales pour l'étude des maladies rétiniennes et les essais de médicaments.
Taux de croissance stable
Ces cellules présentent une croissance stable et peuvent être maintenues sur de longues périodes, ce qui facilite les expériences à long terme.
Facilité de transfection
La lignée cellulaire ARPE-19 est un excellent hôte de transfection, largement utilisé dans les études d'expression transitoire et stable.
Limites
Voici quelques limites associées à la lignée cellulaire ARPE-19 :
Différenciation limitée
La différenciation des cellules ARPE-19 est limitée par rapport à celle des cellules rétiniennes primaires. Cela peut potentiellement avoir un impact sur certaines études liées à la différenciation.
Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 en recherche
La lignée cellulaire ARPE-19 a de nombreuses applications dans la recherche sur la rétine. Nous avons abordé ici certaines utilisations spécifiques et importantes de cette lignée cellulaire de l'épithélium pigmentaire rétinien dans le domaine de la recherche.
- Recherche sur les maladies rétiniennes : les cellules ARPE-19 fournissent des informations précieuses sur la pathogenèse rétinienne. Les chercheurs utilisent ces cellules pour étudier les mécanismes pathologiques et les traitements potentiels. Une étude menée en 2020 a révélé que l'ARN circulaire hsa_circ_0041795 interagit avec le miARN-646 et le VEGFC pour faciliter les lésions induites par une glycémie élevée dans les cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines ARPE-19. Par conséquent, l'étude propose cet ARN circulaire comme cible thérapeutique et diagnostique efficace pour lutter contre la rétinopathie diabétique [2]. De même, Jing Yang et ses collègues ont utilisé des cellules ARPE-19 et ont apporté des éclaircissements sur la pathogenèse de la rétinopathie diabétique. Ils ont démontré que l'inhibition de l'ARN lnc SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) peut supprimer la réponse inflammatoire et la transition épithélio-mésenchymateuse des cellules ARPE-19 traitées à une concentration élevée de glucose [3].
- Essais cliniques : les cellules ARPE-19 sont utilisées pour évaluer l'efficacité et la sécurité des médicaments et des composés, contribuant ainsi au développement de traitements ou de thérapies pour les maladies rétiniennes. Par exemple, une étude menée en 2019 a mis en évidence les effets protecteurs des bioactifs de Syzygium malaccense contre le stress induit par le peroxyde d'hydrogène dans les cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines, ARPE-19 [4]. Par la suite, une étude a mis en évidence le rôle thérapeutique de l'extrait de Prunella vulgaris var. L contre les lésions induites par la lumière bleue dans les cellules ARPE-19 et un modèle murin [5].
5. Cellules ARPE-19 : publications scientifiques
Voici quelques publications de recherche intéressantes consacrées aux cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes ARPE-19.
Évaluation des réponses des microARN dans les cellules ARPE-19 face au stress oxydatif
Cet article de recherche a été publié en 2018 dans la revue Cutaneous and Ocular Toxicology. Cette étude a évalué l'expression des microARN en réponse au stress oxydatif induit dans des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines ARPE-19 par un traitement au peroxyde d'hydrogène.
Cette publication dans le World Journal of Stem Cells (2021) a suggéré que le milieu conditionné des cellules ARPE-19 contient des facteurs de croissance qui favorisent la différenciation neurale des cellules souches mésenchymateuses dérivées des tissus adipeux.
Cette étude a été publiée dans l'International Journal of Molecular Sciences (2019). Elle indique que la quercétine protège contre la libération de chimiokines stimulée par l'IL-1β dans les cellules ARPE-19 en empêchant l'activation des cascades MAPK et NF-κB, ce qui améliore la réponse inflammatoire.
Cet article de recherche a été publié dans l'International Journal of Molecular Sciences (2018). Cette étude a évalué les effets possibles du stress oxydatif et de l'inflammation sur les fonctions de SIRT1 (sirtuine 1) et des DNMT (méthyltransférases d'ADN), ainsi que sur la méthylation de LINE-1 (élément nucléaire intercalé long-1) dans les cellules ARPE-19.
Cet article publié dans Antioxidants (2022) a montré que les extraits de fleurs de Chrysanthemum boreale exercent des effets protecteurs contre les lésions rétiniennes induites par la N-rétinylidène-N-rétinyléthanolamine (A2E) dans les cellules ARPE-19.
Ressources pour la lignée cellulaire ARPE-19 : protocoles, vidéos et plus encore
ARPE-19 est une lignée cellulaire épithéliale rétinienne largement utilisée. Les ressources disponibles concernant les protocoles de culture et de transfection des cellules ARPE-19 sont répertoriées ici :
- Transfection de l'ARPE-19 : cette vidéo est un guide étape par étape pour apprendre le protocole de transfection de la lignée cellulaire ARPE-19.
Voici quelques ressources décrivant le protocole de culture cellulaire ARPE-19 :
- Protocole de culture cellulaire ARPE-19 : ce lien contient des informations sur la culture et la maintenance des cellules ARPE-19. Il comprend des informations sur le milieu de culture ARPE-19, les conditions de culture, les protocoles de repiquage et la manipulation des cultures prolifératives et cryoconservées.
Références
- Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. et X. Kang, hsa_circ_0041795 contribue à la lésion des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines (ARPE 19) induite par une glycémie élevée via l'absorption de miR-646 et l'activation de VEGFC. Gene, 2020. 747 : p. 144654.
- Yang, J., et al., La silençation de SNHG1 a inhibé la transition épithélio-mésenchymateuse et la réponse inflammatoire des cellules ARPE-19 induites par une glycémie élevée. J Inflamm Res, 2021. 14 : p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Effet protecteur des dérivés de la myricétine issus de Syzygium malaccense contre le stress induit par le peroxyde d'hydrogène dans les cellules ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
- Kim, J., K. Cho et S.-Y. Choung, Effet protecteur de l'extrait de Prunella vulgaris var. L contre les dommages induits par la lumière bleue dans les cellules ARPE-19 et la rétine de souris. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152 : p. 622-631.