Ligne cellulaire Neuro-2a

Neuro-2a est une lignée de cellules neurales de souris largement utilisée dans la recherche en neurosciences. Ces cellules sont principalement utilisées pour étudier le développement neuronal, la différenciation, la neurotoxicité, les voies de signalisation cellulaire et la croissance axonale. Elles sont également utilisées pour le développement et le criblage de médicaments.

Cet article se concentre sur les aspects importants des cellules de neuroblastome Neuro-2a qui pourraient vous aider avant de commencer à travailler avec elles. Il couvre principalement les points suivants

Les caractéristiques générales et l'origine des cellules Neuro-2a
Informations sur la culture de la lignée cellulaire Neuro-2a
Avantages et inconvénients de la lignée cellulaire Neuro-2a
Applications de la lignée cellulaire Neuro-2a dans la recherche
Publications de recherche sur les cellules Neuro-2a
Ressources pour les cellules Neuro-2a : Protocoles, vidéos et autres

1. Caractéristiques générales et origine des cellules Neuro-2a

Cette partie de l'article couvre le contexte et les caractéristiques de base de la lignée cellulaire Neuro-2a qu'il est essentiel de connaître avant de travailler avec elle. Vous apprendrez ici : Qu'est-ce que la lignée cellulaire Neuro-2a ? Quelle est l'origine de la lignée cellulaire Neuro-2a ? Qu'est-ce que la différenciation des cellules Neuro-2a ? Quelle est la taille d'une cellule Neuro-2a ? Quelle est la morphologie des cellules Neuro-2a ?

Les cellules Neuro-2a proviennent d'une tumeur spontanée (neuroblastome) d'une souris albinos (souche A). La lignée cellulaire a été établie par R.J. Klebe et F.H. Ruddle.
Les cellules du neuroblastome Neuro-2a présentent une morphologie de cellules souches neuronales et amiboïdes.
La taille des cellules Neuro-2a est de 12 micromètres [1].
Le nombre de chromosomes des cellules Neuro-2a peut varier de 59 à 193 avec un nombre modal de 95. Le caryotype de ces cellules de neuroblastome est instable dans une fourchette de 94 à 98 chromosomes.

Signalisation neuronale illustrée : représentation en 3D de la libération de neurotransmetteurs dans la fente synaptique par le neurone présynaptique, déclenchée par l'influx de Ca2+, conduisant à l'activation des canaux ioniques et à l'influx de Na+ dans le neurone postsynaptique.

2. Informations sur la culture de la lignée cellulaire Neuro-2a

Les cellules Neuro-2a sont largement utilisées dans les laboratoires de recherche en neurosciences. Avant de travailler avec ces cellules, vous devez prendre connaissance des informations impératives sur la culture cellulaire mentionnées ci-dessous. Cela vous permettra de travailler plus facilement. Vous saurez : Qu'est-ce qu'un milieu de culture cellulaire Neuro-2a ? Comment cultiver les cellules Neuro-2a ? Quel est le temps de doublement des cellules Neuro-2a ? Quelle est la densité d'ensemencement des cellules Neuro-2a ? Quel est le protocole de culture des cellules Neuro-2a ? Quel est le milieu de culture des cellules Neuro-2a ?

Points clés pour la culture des cellules Neuro-2a

Temps de doublement :	Le temps de doublement des cellules Neuro-2a est d'environ 70 heures.
Adhérentes ou en suspension :	Neuro-2a est une lignée cellulaire adhérente.
Densité d'ensemencement :	La densité d'ensemencement optimisée pour la lignée cellulaire Neuro-2a est de 1 x¹⁰⁴ ^cellules/cm2. Pour l'ensemencement, les cellules sont lavées avec un tampon phosphate salin sans magnésium ni calcium (1x). Ensuite, une solution de passage (Accutase) est ajoutée et les cellules sont incubées pendant 8 à 10 minutes à température ambiante. Après la dissociation des cellules, du milieu frais est ajouté et les cellules sont centrifugées. Le culot cellulaire récolté est soigneusement remis en suspension et les cellules sont versées dans un récipient de culture pour la croissance.
Milieu de croissance :	L'EMEM est utilisé pour la culture des cellules Neuro-2a. Il contient 10 % de FBS, 2 mM de L-Glutamine, 1,5 g/L de NaHCO3, de l'EBSS, 1 mM de pyruvate de sodium et de la NEAA pour une croissance cellulaire idéale. Le milieu doit être remplacé 1 à 2 fois par semaine.
Conditions de croissance :	Les cultures de Neuro-2a sont maintenues dans un incubateur humidifié à 37°C connecté à une alimentation en CO2 à 5%.
Stockage :	Les cellules doivent être conservées à une température inférieure à -150 °C dans un congélateur électrique à ultra-basse température ou dans la phase vapeur de l'azote liquide pour le long terme.
Processus de congélation et milieu :	Les milieux CM-1 ou CM-ACF sont utilisés pour congeler les cellules Neuro-2a. Les cellules sont congelées par un processus de congélation lent qui ne permet qu'une baisse de 1 °C par minute. Cela permet de protéger les cellules contre les chocs et de maintenir leur viabilité.
Processus de décongélation :	Pour décongeler les cultures congelées, le flacon est placé dans un bain-marie à 37 °C pendant 40 à 60 secondes jusqu'à ce qu'il ne reste plus qu'un petit amas de glace. Le milieu de culture est ensuite ajouté et les cellules sont soumises à une centrifugation. Cette étape permet d'éliminer les composants du milieu de congélation. Le culot cellulaire est ensuite remis en suspension et les cellules sont transférées dans un nouveau flacon rempli de milieu de culture. Les cellules sont ensuite placées dans un incubateur à 37 °C pendant au moins 24 heures.
Niveau de biosécurité :	Les laboratoires de niveau de biosécurité 1 sont obligatoires pour manipuler et maintenir les cultures de Neuro-2a.

Image microscopique d'un passage précoce de cellules adhérentes de neuroblastome Neuro 2a décrivant leur morphologie à un grossissement de 10x et 20x.

3. Avantages et inconvénients de la lignée cellulaire Neuro-2a

Les cellules Neuro-2a possèdent des avantages et des inconvénients qui les distinguent des autres lignées cellulaires neuronales. Voici quelques avantages et inconvénients notables de ces cellules.

Avantages

Les avantages de la lignée cellulaire de neuroblastome murin Neuro-2a sont les suivants :

Facile à maintenir
La lignée cellulaire Neuro-2a n'est pas associée à des procédures de culture cellulaire complexes ou compliquées. Elle est facile à cultiver et à entretenir dans les laboratoires de recherche.
Modèle de cellules neuronales in vitro
Neuro-2a est un modèle de cellule neuronale pratique largement utilisé par les chercheurs dans les études sur le développement et la différenciation des neurones.

Inconvénients

Les inconvénients des cellules Neuro-2a sont les suivants :

Origine murine
Neuro-2a est d'origine murine, et les chercheurs doivent faire preuve de prudence lorsqu'ils extrapolent les résultats d'études murines à la santé et aux maladies humaines, car la biologie de la souris et celle de l'homme peuvent différer de manière significative.

4. Applications de la lignée cellulaire Neuro-2a dans la recherche

Les cellules Neuro-2a offrent de nombreuses applications dans le domaine de la recherche en neurosciences. Quelques utilisations prometteuses de cette lignée cellulaire sont présentées ici :

Développement neuronal : Neuro-2a est un modèle cellulaire neuronal in vitro largement utilisé pour étudier le développement neuronal et les processus connexes tels que la différenciation, la croissance axonale et la formation des synapses. Une étude réalisée en 2020 a utilisé des cellules Neuro-2a pour explorer le rôle du microARN-124 dans la différenciation des cellules neuronales induite par l'acide rétinoïque [2]. Une autre étude a examiné l'expression du récepteur gamma de l'acide rétinoïque (RARG) et du miARN-124 dans la lignée cellulaire de neuroblastome (N2A). Cette étude a proposé que le RARG soit ciblé par le miR-124 et supprime la croissance des neurites [3].
Neurotoxicité : Neuro-2a est également utilisé pour évaluer les effets toxiques des médicaments, des produits chimiques ou des facteurs environnementaux sur les cellules neurales. Par exemple, une étude menée par Zhihong Yin et ses collègues a examiné la neurotoxicité du bisphénol A (BPA), un produit chimique environnemental, en utilisant des cellules Neuro-2a. Ils ont observé que le BPA réprime la différenciation et la prolifération des cellules neuronales en perturbant leur intégrité cellulaire et synaptique [4].
Dépistage des médicaments : Les cellules Neuro-2a sont également utilisées pour évaluer les activités thérapeutiques de plusieurs médicaments, composés et produits naturels. Par exemple, une étude a utilisé les cellules Neuro-2a pour étudier le potentiel antioxydant de l'extrait de la plante Gingko biloba. En outre, la recherche a proposé que cet extrait provoque une diminution de l'agrégation Aβ et puisse être un traitement potentiel de la maladie d'Alzheimer [5].

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5. Publications de recherche sur les cellules Neuro-2a

Voici quelques articles de recherche intéressants sur la lignée cellulaire Neuro-2a.

Les alcamides de type pipérine du Piper nigrum induisent le promoteur du BDNF et favorisent la croissance des neurites dans les cellules Neuro-2a

Cette étude parue dans le Journal of Natural Medicines, 2018 a étudié les effets thérapeutiques des alcamides isolés du poivre blanc (P. nigrum) sur les cellules neuronales Neuro-2a.

La régulation négative de Nkx2.1 est impliquée dans les anomalies cérébrales induites par l'excès d'acide rétinoïque

Cette recherche publiée dans Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020 propose que le gène Nkx2.1 joue un rôle important dans le développement du cerveau de la souris en régulant la cascade de signalisation Shh.

L'exposition au bisphénol A induit une neurotoxicité associée à un dysfonctionnement synaptique et cytosquelettique dans les cellules neuro-2a

Cet article a été publié dans Toxicology and Industrial Health (2023) et propose qu'un produit chimique environnemental, le bisphénol A, déclenche une neurotoxicité dans les cellules neuro-2a et perturbe leur dysfonctionnement synaptique et cytosquelettique.

La modulation par l'hexaréline des voies MAPK et PI3K/Akt dans les cellules Neuro-2A inhibe la toxicité apoptotique induite par le peroxyde d'hydrogène

Cet article paru dans Pharmaceuticals (2021) propose qu'un médicament, l'hexaréline, module la cascade PI3K/AKT et MAPK dans les cellules de neuroblastome (Neuro-2a) et inhibe l'apoptose des cellules Neuro-2a induite par le peroxyde d'hydrogène.

L'extrait éthanolique de fruit d'Emblica officinalis supprime la neuroinflammation dans la microglie et favorise la croissance des neurites dans les cellules Neuro2a

Cet article de recherche publié dans Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) propose que l'extrait de fruit d'Emblica officinalis supprime la neuroinflammation dans les cellules Neuro-2a et peut donc être bénéfique pour les maladies neuroinflammatoires.

6. Ressources pour les cellules Neuro-2a : Protocoles, vidéos et autres

Voici les ressources en ligne disponibles sur les cellules Neuro-2a. Elles comprennent la culture des cellules Neuro-2a et le protocole de transfection.

Protocole de transfection des cellules Neuro-2a: Neuro-2a est un hôte de transfection approprié. Ce lien vous guidera dans le protocole de transfection de la lignée cellulaire. L'efficacité de transfection de Neuro-2a varie d'un réactif à l'autre.

Le lien suivant contient le protocole de culture cellulaire de Neuro-2a.

Protocole de culture cellulaire Neuro-2a : Ce lien vous aidera à apprendre le protocole de sous-culture des cellules Neuro-2a.
Cellules Neuro-2a : Ce site web contient des informations complètes sur les milieux de culture des cellules Neuro-2a, la densité d'ensemencement et les protocoles de sous-culture et de manipulation des cultures cryoconservées et prolifératives.

Références

Lulevich, V., et al, Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31) : p. 13872-7.
You, Q., et al, Role of miR-124 in the regulation of retinoic acid-induced Neuro-2A cell differentiation. Neural Regen Res, 2020. 15(6) : p. 1133-1139.
Su, X., et al, Retinoic acid receptor gamma is targeted by microRNA-124 and inhibits neurite outgrowth. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
Yin, Z., et al, Bisphenol-A exposure induced neurotoxicity and associated with synapse and cytoskeleton in Neuro-2a cells. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
Chen, L., et al, L'extrait de gingko biloba (EGb) inhibe le stress oxydatif dans les cellules neuro 2A surexprimant APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.