P19-solut - P19-soluja käyttävä alkion karsinoomatutkimus
P19 on hiiren alkiokarsinooman solulinja. Sitä käytetään laajalti biolääketieteellisessä tutkimuksessa, pääasiassa kehitysbiologian, kantasolubiologian, solujen erilaistumisen ja lääkeseulonnan tutkimiseen. Koska P19-soluilla on erilaistumiskyky, ne voivat olla hyödyllisiä monimutkaisten biologisten prosessien, kuten kudosten muodostumisen ja varhaisen alkionkehityksen, tutkimisessa. Tässä artikkelissa käsittelemme hiirestä peräisin olevien P19-solujen perusteita.
P19-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Solulinjan yleisten ominaisuuksien ja alkuperän tunteminen on olennaista ennen kuin aloitat työskentelyn sen kanssa. Tässä jaksossa käsitellään seuraavia asioita: Mikä on P19-solulinja? Mikä on P19-solulinjan koko? Mikä on P19-solujen alkuperä?
- P19 on eräänlainen pluripotentti alkion karsinoomasolu, joka on alun perin saatu C3H/He-hiiressä kehittyneestä teratokarsinoomasta. McBurney ja Rogers perustivat solulinjan ensimmäisen kerran vuonna 1982.
- P19-solut voivat kasvaa jatkuvasti seerumilla täydennetyssä elatusaineessa. Ne voivat erilaistua muiksi solutyypeiksi, kun ne altistetaan myrkyttömille lääkkeille, kuten retinohapolle ja dimetyylisulfoksidille (DMSO) [1].
- Näillä hiiren karsinoomasoluilla on epiteelin kaltainen morfologia.
- P19-solulinjalla on euploidinen urospuolinen karyotyyppi (n=40; XY).
P19-solujen viljelyä koskevat tiedot
P19-solulinjaa viljellään laajalti tutkimuslaboratorioissa sen ainutlaatuisten ominaisuuksien vuoksi. Sen viljely on helppoa ja hallittavissa. Tässä osiossa on mainittu kaikki keskeiset tiedot, joita tarvitset P19-soluviljelmän ylläpitoon ja kasvattamiseen. Me tiedämme: Mikä on P19-solujen kaksinkertaistumisaika? Miten P19-solulinjaa viljellään? Onko P19 tarttuva solulinja?
P19-solujen viljelyä koskevat keskeiset seikat
|
Kaksinkertaistumisaika: |
P19-solulinjan kaksinkertaistumisaika on noin 2-3 päivää. |
|
Tarttuva tai suspensiossa: |
P19-alkion karsinoomasolulinja on tarttuva. |
|
Subkulturointisuhde: |
P19-soluja olisi subkulturoitava 48 tunnin välein, ja näiden solujen jakosuhde olisi säilytettävä 1:10. Tarttuvat solut pestään 1 X fosfaattipuskurisuolaliuoksella ja inkuboidaan Accutaasin kanssa, kunnes solut dissosioituvat. Soluihin lisätään elatusainetta ja ne kerätään sentrifugoimalla. Kerätyt solut resuspendoidaan huolellisesti ja annostellaan uusiin pulloihin. |
|
Kasvualusta: |
P19-solujen viljelyyn käytetään DMEM/Ham's F12 -mediaa, joka sisältää 5 % naudan sikiöseerumia, 3,1 g/l glukoosia, 1,6 mM L-glutamiinia, 1,0 mM natriumpyruvaattia, 15 mM HEPES:ää ja 1,2 g/l NaHCO3:aa. |
|
Kasvuolosuhteet: |
P19-alkion karsinoomasolulinjan kasvattamiseen ja viljelyyn tarvitaan kostutettu inkubaattori, jonka lämpötila on 37 °C ja hiilidioksidipitoisuus 5 %. |
|
Varastointi: |
Pakastetut P19-solupullot on säilytettävä alle -150 °C:n lämpötilassa pakastimessa tai nestemäisen typen höyryfaasissa, jotta solujen elinkelpoisuus säilyy pitkällä aikavälillä. |
|
Pakastusprosessi ja väliaine: |
P19-solujen jäädyttämiseen voidaan käyttää CM-1- tai CM-ACF-mediaa käyttäen hidasta jäädytysmenetelmää, joka suojaa soluja sokilta ja säilyttää niiden elinkelpoisuuden. |
|
Sulatusprosessi: |
Pakastetut P19-solut voidaan sulattaa 37 °C:n vesihauteessa sekoittamalla injektiopulloa nopeasti 40-60 sekunnin ajan. Solut lisätään tuoreeseen väliaineeseen ja sentrifugoidaan pakastusmedian osien poistamiseksi. Solupaletti suspendoidaan uudelleen, ja solut kaadetaan uuteen pulloon kasvatusta varten. |
|
Bioturvallisuustaso: |
P19-solulinjaa varten tarvitaan bioturvallisuustason 1 laboratorioasetukset. |
P19-solulinja: P1919: Edut ja haitat
Tässä jaksossa käsitellään P19-solulinjan etuja ja haittoja.
Edut
- Erilaistumispotentiaali: P19-solut voivat erilaistua erilaisiksi solutyypeiksi, kuten kardiomyosyyteiksi, neuroneiksi ja mikrogliasoluiksi. Ne tarvitsevat erilaistumiseen myrkyttömiä lääkkeitä, kuten retinohappoa ja dimetyylisulfoksidia (DMSO). Retinohappo saa aikaan neuronien, mikroglian ja astroglian kehittymisen, kun taas DMSO käynnistää lyövien kardiomyosyyttien ja sileiden lihassolujen kehittymisen. Näin ollen P19-solut ovat hyödyllisiä solujen erilaistumisen ja kehitysprosessien tutkimisessa
- Mallijärjestelmä: Pluripotentti alkion karsinoomasolulinja P19 on arvokas malli alkion varhaisen kehityksen tutkimiseen. Tutkijat käyttävät P19-soluja solujen signalointireittien ja näihin prosesseihin liittyvien solu- ja molekyylimekanismien selvittämiseen
Haitat
- Hiiriperäinen: P19 on hiiren alkion karsinoomasolulinja. Näin ollen näitä soluja käyttävien tutkimusten tulokset eivät välttämättä ole täysin siirrettävissä ihmisen biologiaan ja prosesseihin
P19-solujen tutkimussovellukset
P19-soluilla on useita tutkimussovelluksia niiden erilaistumiskyvyn ja kehitysbiologian ja kantasolututkimuksen kannalta tärkeän merkityksen vuoksi. Joitakin tärkeitä P19-alkion karsinoomasolujen tutkimussovelluksia ovat muun muassa seuraavat:
- Solujen erilaistumistutkimukset: Kuten tiedämme, P19-solut voivat erilaistua neuroneiksi, mikroglioiksi, sileiksi lihassoluiksi ja kardiomyosyyteiksi, joten niitä käytetään laajalti solujen erilaistumisprosessien tutkimiseen. Lisäksi se auttaa tutkimuksessa tutkimaan hermoston ja sydämen kehitystä ja sen taustalla olevia mekanismeja. Vuonna 2018 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että reaktiiviset happilajit (ROS) ohjaavat P19-solujen erilaistumista tiettyihin solutyyppeihin ja estävät muiden induktiota [3]. Toisessa tutkimuksessa tutkittiin retinohapon välittämää hermoston erilaistumisprosessia ja havaittiin PI3K/Akt/GSK3β-signalointireitin osallistuminen [4].
- Kehitysbiologia: P19-solut ovat korvaamaton malli alkion varhaisen kehityksen tutkimiseen. Ne auttavat tutkijoita ymmärtämään monimutkaisia biologisia prosesseja, kuten kudosten muodostumista alkion kehityksen aikana. Tutkimuksessa käytettiin P19-soluja ja tutkittiin kammioväliseinän vian (VSD) muodostumiseen vaikuttavia molekyylitekijöitä. Tulokset paljastivat, että pitkä ei-koodaamaton RNA SNHG6 vaikuttaa VSD:hen säätelemällä negatiivisesti miRNA-101:tä ja aktivoimalla Wnt/β-kateniinireittiä [5].
- Huumetestaus: P19-hiiren alkion karsinoomasolulinjaa käytetään myös mahdollisten lääkeainekandidaattien seulontaan. Eräässä tutkimuksessa käytettiin erilaistuneita P19-solujen neuroneja ja tutkittiin synteettisen L-Dopan ja Mucuna pruriens-siemenen vesiuutteen neuroprotektiivisia asetyylikoliiniesteraasia estäviä vaikutuksia. Tulokset osoittivat, että kasviuutteella oli lupaavia tuloksia verrattuna L-Dopaan [6].
Osta P19-solulinja tänään
P19-solut: P1919: Tutkimusjulkaisut
Tämä artikkeliosio käsittelee muutamia mielenkiintoisia tutkimusjulkaisuja, joissa käsitellään P19-soluja.
Tämä artikkeli julkaistiin Oncology Reports -lehdessä vuonna 2017. Tutkimuksessa ehdotettiin, että aivolisäkkeen sukupuolihormonit ohjaavat teratokarsinoomasolulinjojen adheesiota, proliferaatiota ja migraatiota, mukaan lukien P19-solut.
Pitkä ei-koodaava RNA uc. 4 vaikuttaa solujen erilaistumiseen TGF-beeta-signalointireitin kautta
Tässä Experimental & Molecular Medicine -lehdessä (2018) julkaistussa julkaisussa käytettiin P19-soluja ja tutkittiin pitkän ei-koodaavan RNA:n uc.4 toimintaa. Tulokset osoittivat, että uc.4 vaikuttaa solujen erilaistumiseen moduloimalla TGF-beeta-signalointireittiä.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2018 Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine -lehdessä. Tutkimuksessa havaittiin, että luonnollinen aivokudosuute ja 3D-soluviljely voivat nopeuttaa P19-alkion karsinooman kantasolujen erilaistumista hermosoluiksi.
Tämä tutkimus julkaistiin Journal of Ethnopharmacology -lehdessä vuonna 2020. Tutkimuksessa ehdotettiin, että Cichorium intybus L. -lehtiuute voi indusoida P19-alkion karsinooman kantasolujen erilaistumista insuliinia tuottaviksi haiman β-soluiksi.
Tämä tutkimus julkaistiin Molecules-lehdessä (2022). Tässä tutkimuksessa selvitettiin Mucuna pruriensin siemenuutteen neuroprotektiivisia ja asetyylikoliiniesteraasia estäviä vaikutuksia P19-solujen neuroneihin.
P19-solulinjan resurssit: P19: Protokollat, videot ja muuta
Seuraavassa on muutamia P19-soluja koskevia resursseja.
- P19-solujen hermosolujen erilaistamisprotokolla: Tämä artikkeli sisältää P19-solujen neuraalisen erilaistumisen protokollan ja muuta hyödyllistä tietoa P19-solujen erilaistumisesta.
- P19-solujen transfektio: Tämä linkki auttaa sinua oppimaan P19-solujen transfektioprotokollan.
Seuraava linkki sisältää p19-solujen viljelyprotokollan.
- P19-solut: Tämä verkkosivusto sisältää kaikki hyödylliset tiedot P19-solulinjasta, mukaan lukien sen viljelyolosuhteet, P19-solujen väliaineet, solujen jakaminen ja paljon muuta.
P19-solulinjan tutkiminen: P19: Usein kysytyt kysymykset
Viitteet
- McBurney, M.W., P19-alkion karsinoomasolut. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 alkion karsinoomasolulinja: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey ja G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinoidihappo indusoi P19-solujen erilaistumista neuroneiksi, jotka osallistuvat PI3K/Akt/GSK3β-signalointireittiin. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Pitkä ei-koodaamaton RNA SNHG6 edistää kammioväliseinän vian muodostumista miR-101:n negatiivisen säätelyn ja Wnt/β-kateniinireitin aktivoinnin kautta. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriensin siemenen vesipitoinen uute paransi neuroprotektiivisia ja asetyylikoliiniesteraasia estäviä vaikutuksia verrattuna synteettiseen L-dopaan. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.