NIH-3T3-solut: NIH-3T3-solujen fibroblastitutkimusten ja sovellusten edistäminen
NIH-3T3-solulinjasta, jonka Howard Green ja George Todaro perustivat 17 päivän ikäisen sveitsiläisen albiinohiiren alkion kudoksesta vuonna 1962 New Yorkin yliopiston lääketieteellisessä tiedekunnassa, on tullut perustavanlaatuinen resurssi biolääketieteellisessä tutkimuksessa. NIH-3T3-solut, jotka on tunnustettu niiden suuresta herkkyydestä leukemiaviruksen ja sarkoomaviruksen keskittymille, toimivat kriittisenä välineenä lukuisissa tieteellisissä tutkimuksissa, kuten virusonkologisissa tutkimuksissa, geeniekspressioanalyyseissä ja solujen kasvun dynamiikan tutkimisessa. Nimitys "3T3" kuvastaa soluviljelymenetelmää, joka tarkoittaa "3 päivän siirtoväliä" ja 3 × 10^5 solun alkuperäistä kylvötiheyttä, mikä korostaa standardoituja olosuhteita, joissa näitä soluja alun perin kasvatettiin ja laajennettiin.
NIH-3T3-solujen erilaiset morfologiat ja sovellukset
Yksi NIH-3T3-solujen tunnusomaisista ominaisuuksista on niiden morfologinen sopeutumiskyky, joka vaihtelee merkittävästi viljelyn konfluenssin mukaan. Pienemmillä tiheyksillä näillä fibroblasteilla on karanmuotoinen, yksinäinen solurakenne, joka muuttuu tiheiksi, pyörteisiksi kuvioiksi, kun populaatio saavuttaa konfluenssin. NIH-3T3-solut, joiden keskimääräinen halkaisija on noin 18 μm, tarjoavat monipuolisen mallin syvällisiin solubiologisiin tutkimuksiin, jotka ulottuvat kudosten korjausmekanismeista solusyklin säätelyn monimutkaisiin polkuihin.
Viljelytiedot
Tärkeimmät viljelyyn liittyvät tiedot:
Väestön kaksinkertaistumisaika: Noin 20 tuntia.
Kasvutyyppi: Adheesioviljelmät.
Kylvötiheys: Suositeltu: 3-4 x 10^4 solua/cm^2.
Kasvualusta: Täydennettynä 5 %:lla FBS:llä ja 2,5 mM L-glutamiinilla.
Kasvuolosuhteet: Pidetään 37 °C:ssa kostutetussa inkubaattorissa, jossa on 5 % CO2.
Säilytys: Säilytetään alle -195 °C:n lämpötilassa nestemäisen typen höyryfaasissa.
Pakastusmenetelmä: Käytä CM-1- tai CM-ACF-mediaa; käytä hidasta jäädytysmenetelmää (1 °C:n lämpötilan pudotus).
Sulatusmenetelmä: Nopea lämmittäminen 37 °C:n vesihauteessa, jonka jälkeen sentrifugointi jäädytysmediumin poistamiseksi ja uudelleen suspendoiminen kasvualustaan.
Bioturvallisuustaso: Viljely edellyttää bioturvallisuustasoa 1.
Sveitsiläinen albiinohiiri laboratoriossa.
NIH 3T3 -solujen käytön hyvät ja huonot puolet
Edut
Transfektion tehokkuus: NIH-3T3-solut ovat tunnettuja korkeasta transfektiokyvystään, ja ne soveltuvat erinomaisesti sekä ohimeneviin että stabiileihin geeniekspressiotutkimuksiin, ja ne soveltuvat erilaisiin transfektiotekniikoihin.
Syöttökerroksen hyödyllisyys: Nämä solut toimivat usein tukevana syöttökerroksena yhteisviljelyssä keratinosyyttien ja kantasolujen kaltaisten solujen kanssa, koska ne vapauttavat kasvutekijöitä, jotka edistävät yhteisviljeltyjen solujen kasvua.
Kantasolututkimus: NIH-3T3-solut ovat suositeltava valinta kantasolututkimuksessa, koska ne indusoivat pluripotenssin ilman geneettistä muuntelua ja tarjoavat suotuisan ympäristön kantasolujen erilaistumiselle.
Viljelyn vakaus: NIH-3T3-solut ovat tunnettuja vakaudestaan ja spontaanien transformaatioiden vähäisestä esiintymistiheydestä. Tietyissä olosuhteissa tai altistuttuaan tietyille onkogeeneille tai mutageeneille NIH-3T3-solut voivat kuitenkin muuntua spontaanisti. Tämä transformaatio voi johtaa syöpäominaisuuksien hankkimiseen, kuten hallitsemattomaan kasvuun, kontaktin eston häviämiseen ja kykyyn muodostaa kasvaimia, kun ne ruiskutetaan alttiisiin isäntiin.
Haitat
Epäjohdonmukainen solukoko: NIH-3T3-solujen pitkänomainen, karamaisen morfologia voi vaihdella, mikä vaikeuttaa kuva-analyysejä määrityksissä.
Infektioherkkyys: Nämä solut ovat alttiita bakteeri- ja mykoplasmainfektioille, jos niitä ei ylläpidetä tiukoissa aseptisissa olosuhteissa, mikä saattaa vaikuttaa kokeiden eheyteen.
NIH-3T3-solujen tutkimussovellukset
DNA-transfektiotutkimukset: NIH-3T3-solujen kestävyys tekee niistä ihanteellisia erilaisten geenien käyttöönotossa ja toiminnan tutkimisessa, mikä on osoitettu tutkimuksissa, joissa tutkitaan proteiineja, kuten NAB2-STAT6:ta, ja niiden roolia soluprosesseissa.
Solupohjaiset määritykset: Niiden luotettavuus ulottuu erilaisiin määrityksiin, kuten elinkelpoisuus-, apoptoosi- ja fokusmuodostusmäärityksiin, ja ne tarjoavat tietoa solujen vasteista erilaisissa koeolosuhteissa.
Solusyklitutkimus: Solulinjan suoraviivainen solusyklin manipulointi seerumipitoisuuksien avulla tekee siitä tehokkaan mallin solusyklin säätelyn ja sen poikkeavuuksien tutkimiseen sairauksien yhteydessä.
Paranna tutkimustasi NIH-3T3-soluilla
Keskeiset tutkimukset, joissa on mukana fibroblastisolulinja NIH 3T3
NIH-3T3-solulinja on ollut keskeisessä asemassa lukuisissa tutkimushankkeissa, jotka kattavat solubiologian eri osa-alueet. Seuraavassa esitetään joitakin merkittäviä tutkimuksia, joissa näitä soluja on käytetty:
- NAB2-STAT6-fuusioproteiinin tutkiminen: Biochemical and Biophysical Research Communications -lehdessä julkaistussa tutkimuksessa tutkitaan, miten NAB2-STAT6-fuusioproteiini vaikuttaa NIH-3T3-soluihin, erityisesti sen roolia solujen kasvun ja migraation tehostamisessa EGR-1-säätelyn kautta
- APOBEC3:n ja hiiren leukemiaviruksen tutkiminen: Tässä Virology-lehdessä julkaistussa tutkimuksessa tutkitaan AKV-hiirileukemiaviruksen hypermutaatiota NIH-3T3-soluissa, jotka ilmentävät hiiren APOBEC3-geeniä
- Epigeneettisten lääkkeiden antimetastaattisen potentiaalin arviointi: Oncotargets and Therapy -lehdessä julkaistussa tutkimuksessa arvioidaan hydralatsiinin ja valproiinihapon antimetastaattisia vaikutuksia RAS-muunnettuihin NIH-3T3-soluihin
- Baikaleiinin vaikutus NIH-3T3-solujen proliferaatioon ja kollageenin synteesiin: Tässä tutkimuksessa käytetään NIH-3T3-soluja sen selvittämiseksi, miten baikalieiini vaikuttaa solujen proliferaatioon ja kollageenin tuotantoon miR-9/insuliinin kaltaisen kasvutekijä-1-akselin moduloinnin kautta
- Riboflaviinin ehtymisen ja tuumorigeneesin tutkiminen: Tässä tutkimuksessa esitetään tuloksia siitä, miten riboflaviinin puute NIH-3T3-soluissa edistää kasvainten syntyä edistämällä solujen lisääntymistä ja säätelemällä solusyklin geenejä
NIH-3T3-solututkimuksen keskeiset resurssit
NIH-3T3-soluilla työskentelystä kiinnostuneille tutkijoille on saatavilla erilaisia resursseja viljely- ja koeprotokollien ohjaamiseksi:
- Spheroidien muodostuminen NIH-3T3-soluissa: 3D-soluviljelytekniikka, jossa NIH-3T3-solut aggregoituvat klustereiksi, mikä tarjoaa fysiologisesti relevantin mallin tutkimuksia varten
- NIH-3T3-solujen kasvun seuranta: Tämä video kuvaa JuLI Br -eläväsolukuvausjärjestelmän avulla NIH-3T3-solujen kasvun dynamiikkaa 65 tunnin ajan ja esittelee reaaliaikaista solujen lisääntymistä
Näiden resurssien tarkoituksena on tukea NIH-3T3-soluilla tehtäviä tutkimuksia ja tarjota perusta onnistuneille kokeille ja löydöille.
Usein kysytyt kysymykset NIH-3T3-soluista
Viitteet
- Rahimi, A.M., M. Cai ja S. Hoyer-Fender, NIH3T3-fibroblastisolulinjan heterogeenisuus. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., et al., NIH 3T3-solulinjan ensimmäinen molekyylisytogeneettinen korkearesoluutioinen karakterisointi hiiren monivärikaistoituksella. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al., Eri syöttökerrosten vertaileva analyysi 3T3-fibroblastien kanssa kanin raajojen kantasolujen viljelyssä. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Neuronisolujen erilaistuminen NIH/3T3-fibroblasteista määritellyissä olosuhteissa. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al., NAB2-STAT6-fuusioproteiini välittää solujen lisääntymistä ja onkogeenistä etenemistä EGR-1-säätelyn kautta. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Sloppymeraasi™:n ilmentyminen NIH/3T3-soluissa: Exploring the Versatility of an Error Prone Fusion Polymerase. 2021.
- Sahinturk, V., et al., Acrylamide exerts its cytotoxicity in NIH/3T3 fibroblast cells by apoptosis. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. ja F. Caicci, Discovery of the First Human Retro-Giant Virus: Kuvaus sen morfologiasta, retroviruskinaasista ja kyvystä aiheuttaa kasvaimia hiirissä. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M., et al.,E2F1-Ror2-signalointi välittää koordinoitua transkriptionaalista säätelyä G1/S-vaiheen siirtymän edistämiseksibFGF-stimuloiduissaNIH/3T3-fibroblasteissa. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L., et al., Riboflaviinin puute edistää tuumorigeneesiä HEK293T- ja NIH3T3-soluissa ylläpitämällä solujen leviämistä ja säätelemällä solusykliin liittyvää geenien transkriptiota. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.