CHO-solut biotuotannossa: sovellukset ja innovaatiot
Kiinalaisen hamsterin munasarjasta peräisin oleva CHO-solulinja on lääketieteellisen ja biologisen tutkimuksen voimanpesä, jolla on laaja valikoima sovelluksia. Tämä nisäkässolulinja tarjoaa loputtomia mahdollisuuksia rekombinanttiproteiinien tuotannosta geeniekspressioon, toksisuustutkimuksiin, ravitsemustutkimuksiin ja geenitutkimuksiin.
- Kasvatusväliaine
- Katso tuotesivu
- Kaksinkertaistumisaika
- Katso tuotesivu
- Kasvutyyppi
- Adherentti
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa CHO
Artikkelissamme syvennymme CHO-solujen kiehtovaan maailmaan ja tutkimme, kuinka nämä solut ovat mullistaneet biolääketieteellisen tutkimuksen ja tasoittaneet tietä hengenpelastaville hoitomuodoille. Valmistaudu avaamaan mahtavien CHO-solujen salaisuudet ja tutustumaan siihen, kuinka ne edistävät mullistavia edistysaskeleita lääketieteessä ja muilla aloilla! Opit kaiken, mitä sinun tarvitsee tietää ennen aloittamista, mukaan lukien:
- Mikä on CHO-solulinja?
- CHO-solut: biolääketieteen alan ykkösvalinta rekombinanttiproteiinien tuotannossa
- CHO-solututkimuksen tulevaisuuden näkymät
- Tutustu mahtavien CHO-solujen etuihin
- CHO-solujen tärkeimmät ominaisuudet
- CHO- ja CHO-K1-solulinjojen vertailu
- Tee läpimurtoja CHO-soluillamme
- Kymmenen vinkkiä CHO-solujen viljelyyn
- CHO-soluja koskevat protokollat, videot ja tuoreet julkaisut
- Mielenkiintoisia tutkimusjulkaisuja, joissa on käytetty CHO-soluja
- Usein kysyttyjä kysymyksiä CHO-soluista
- Viitteet
- Usein kysyttyjä kysymyksiä
Mikä on CHO-solulinja?
Theodore T. Puckin vuonna 1957 perustamien kiinalaisen hamsterin munasarjasolujen (CHO-solujen) nopean kasvun ja korkean proteiinituotannon ansiosta niistä on tullut vakiintunut osa biologista ja lääketieteellistä tutkimusta. Näitä kiinalaisen hamsterin munasarjasta peräisin olevia epiteelisoluja käytetään laajalti biotuotannossa, genetiikassa, toksisuustutkimuksissa, ravitsemustutkimuksissa ja geeniekspressiotutkimuksissa.
CHO-solut voivat tuottaa proteiineja, joissa on ihmisillä esiintyviä vastaavia translaation jälkeisiä modifikaatioita (PTM). Niillä on myös proliinisynteesin puute, eivätkä ne ilmentä epidermaalisia kasvutekijän reseptoreita (EGFR), mikä tekee niistä ihanteellisia erilaisten EGFR-mutaatioiden tutkimiseen.
Biotuotannossa CHO-soluja käytetään laajasti monoklonaalisten vasta-aineiden, rekombinanttiproteiinien ja rokotteiden tuotantoon. Yli 60 CHO-soluilla valmistettua terapeuttista proteiinia on hyväksytty tuotantoon, ja niiden käyttö laajenee jatkuvasti. Artikkelissamme tarkastellaan CHO-solujen merkittäviä ominaisuuksia ja monipuolisia sovelluksia sekä korostetaan niiden ratkaisevaa roolia biolääketieteen ja muiden alojen kehityksen edistämisessä. Valmistaudu tutustumaan CHO-solujen kiehtovaan maailmaan ja löytämään niiden vertaansa vailla oleva potentiaali biolääketieteellisessä tutkimuksessa!
CHO-solut: biolääketeollisuuden ensisijainen valinta rekombinanttiproteiinien tuotannossa
Bioteknologiateollisuudessa kiinalaisen hamsterin munasarjasoluja (CHO-soluja) käytetään usein monoklonaalisten vasta-aineiden, rekombinanttiproteiinien ja rokotteiden kaltaisten biolääkkeiden valmistukseen.
Vaikka et ehkä ole siitä tietoinen, kiinalaisen hamsterin munasarjasolut (CHO-solut) saattavat olla syynä siihen, jos olet joskus saanut monoklonaalista vasta-ainehoitoa. Biolääketeollisuus käyttää näitä mukautuvia soluja usein rekombinanttiproteiinien tuotantoon, joita käytetään biolääketieteellisessä tutkimuksessa, diagnostiikassa ja erilaisissa hoitomuodoissa. Monoklonaalisiksi vasta-aineiksi (mAb) kutsuttuja proteiinipohjaisia lääkkeitä käytetään monien sairauksien, kuten syövän, autoimmuunisairauksien ja tartuntatautien, hoitoon. Koska CHO-solut suorittavat translaation jälkeisiä modifikaatioita, jotka muistuttavat ihmisen soluissa tapahtuvia, niitä käytetään usein mAb-vasta-aineiden valmistuksessa. Nämä modifikaatiot ovat välttämättömiä, jotta lääkkeet toimivat oikein.
Geenitekniikan avulla luotuja proteiineja kutsutaan rekombinanttiproteiineiksi. Ne toimivat paitsi tutkimusreagensseina myös lääkkeinä ja diagnostiikassa. Koska CHO-solut voivat käydä läpi translaation jälkeisiä modifikaatioita ja niillä on monimutkaisia glykosylaatioita, jotka muistuttavat ihmisen soluissa esiintyviä, ne sopivat erityisen hyvin rekombinanttiproteiinien valmistukseen nopean kasvunsa, korkean proteiini-ilmentymisensä ja kykynsä ilmentää suuria määriä proteiinia ansiosta. Tuotoksensa ollessa 3–10 grammaa litraa viljelmää kohti CHO-solulinja on mullistanut biolääkkeiden alan sen vertaansa vailla olevan kyvyn ansiosta tuottaa terapeuttisia proteiineja massatuotantona. CHO-solut ovat nykyään olennainen osa nykyaikaista biolääketiedettä geneettisen optimoinnin ansiosta, joka lisää niiden kykyä tuottaa suuria määriä rekombinanttiproteiineja.
Rokotteet ovat biolääkkeitä, joita käytetään virusten ja bakteerien aiheuttamien infektioiden ehkäisyyn ja hoitoon. COVID-19-rokotteet kuuluvat CHO-soluilla valmistettuihin lääkkeisiin. Tutkijat ovat kehittäneet useita tekniikoita, kuten geenitekniikan, viljelyalustojen optimoinnin ja prosessikehityksen, parantaakseen CHO-solujen suorituskykyä biolääkkeiden tuotannossa. Nämä tekniikat ovat johtaneet korkeatuottoisten ja edullisten viljelyjärjestelmien kehittämiseen CHO-soluja käyttävien biolääkkeiden tuotantoa varten. CHO-solujen laaja sovellusala kattaa muun muassa:
CHO-solut biolääkkeiden tuotannossa
CHO-soluja käytetään erilaisten biolääkkeiden tuotantoon, mukaan lukien rekombinanttiproteiinit ja monoklonaaliset vasta-aineet, joita käytetään esimerkiksi syövän, autoimmuunisairauksien ja tartuntatautien hoidossa. CHO-solujen käyttö biolääkkeissä johtuu suurelta osin niiden kyvystä suorittaa translaation jälkeisiä modifikaatioita samalla tavalla kuin ihmisen solut, mikä tekee niistä ihanteellisia nisäkäsisäntäsoluja ihmiselle sopivien terapeuttisten proteiinien tuottamiseen. CHO-isäntäsolujen proteiiniprofiilien kattava ymmärtäminen ja isäntäsolujen proteiini-ELISA-tekniikoiden käyttöönotto ovat olennaisia tekijöitä CHO-solujärjestelmissä tuotettujen biolääkkeiden puhtauden ja turvallisuuden varmistamisessa. Tämän seurauksena CHO-solut ovat vakiinnuttaneet asemansa monitoimisena alustana bioteknologiateollisuudessa.
Edistysaskeleet CHO-soluun perustuvassa vasta-aineiden tuotannossa
CHO-soluja käytetään laajalti monoklonaalisten vasta-aineiden tuotannossa, jotka ovat mullistaneet biolääketieteen alan tarjoamalla kohdennettuja hoitoja erilaisille sairauksille. CHO-solut ovat nousseet rekombinanttisten vasta-aineiden ilmentymisen ja proteiinihoitojen tuotannon kulmakiveksi niiden kyvyn ansiosta taittaa, koota ja modifioida ihmisen proteiineja oikein. CHO-solujen vasta-aineiden tuotanto on kehittynyt soluviljelytekniikoiden ja CHO-solujen muokkauksen parannusten myötä, mikä on johtanut korkealaatuisiin CHO-soluille, jotka ovat keskeisiä biolääkkeiden kehittämisessä. Kattavia bioteknologisia lähestymistapoja, mukaan lukien DNA-tekniikka ja kehittyneet soluviljelymenetelmät, on sovellettu CHO-solujärjestelmien optimoimiseksi vasta-aineiden tuotannon tehokkuuden parantamiseksi.
Molekyylibiologia ja CHO-solujen muokkaus
Molekyylibiologisten tekniikoiden yhdistäminen CHO-soluviljelyyn on johtanut transgeenisten CHO-solulinjojen luomiseen ja kiinalaisten hamsterisolujen mutanttien manipulointiin haluttujen ominaisuuksien saavuttamiseksi. Nämä edistysaskeleet solujen muokkauksessa ja DNA-tekniikassa ovat helpottaneet sellaisten CHO-solujen kehittämistä, jotka kykenevät tuottamaan tiettyjä rekombinanttiproteiineja erittäin tehokkaasti. Eukaryoottisten soluviljelymenetelmien, mukaan lukien CHO- ja HeLa-solut, tutkiminen on edistänyt solumekanismien parempaa ymmärtämistä ja nisäkässoluviljelmien optimointia terapeuttisten proteiinien tuotantoa varten.
Mutta se ei ole vielä kaikki! CHO-soluilla on muita kiehtovia sovelluksia biolääketieteellisessä tutkimuksessa, mukaan lukien:
- Toksisuustutkimus: CHO-soluja käytetään lääkkeiden, kuten syöpälääkkeiden ja viruslääkkeiden, toksisuuden arviointiin. Esimerkiksi yhdessä tutkimuksessa selvitettiin Etelämantereen mikrolevistä peräisin olevien rasvahappojen rintasyöpää estävää vaikutusta käyttämällä CHO-soluja kontrollisolulinjana.
- Geenien ilmentyminen: CHO-soluja käytetään geenien vakaaseen ja väliaikaiseen ilmentämiseen geenitoimintatutkimuksissa tai kohdennetussa proteiinituotannossa. Geenimuokkausvälineitä käytetään geenien knock-in- ja knockout-mallien kehittämiseen CHO-solulinjoissa.
CHO-solujen tutkimuksen tulevaisuudennäkymät
CHO-solujärjestelmien jatkuva tutkimus ja kehitys keskittyy näiden solujen tehokkuuden ja monipuolisuuden parantamiseen biolääkkeiden tuotannossa. Koska CHO-solut ovat edelleen rekombinanttiproteiinihoitojen eturintamassa, niiden rooli lääketieteen ja bioteknologian tulevaisuudessa on merkittävä, ja ne lupaavat uusia edistysaskeleita vasta-aineiden kehittämisessä ja hengenpelastavien hoitojen tuotannossa.
Tutustu mahtavien CHO-solujen etuihin
Tässä on joitakin CHO-solulinjan keskeisiä etuja, jotka tekevät siitä houkuttelevan tutkimusvälineen.
- Helppo viljely: CHO-solulinjan viljelymenetelmät ja -olosuhteet eivät ole vaativia. Nämä solut ovat kestäviä ja sietävät vaihtelevia lämpötila- ja pH-muutoksia. Siksi ne ovat ihanteellisia laajamittaiseen viljelyyn.
- Translaation jälkeiset modifikaatiot: Nämä solut ovat samanlaisia kuin ihmisen solut ja kykenevät tuottamaan samanlaisia translaation jälkeisiä modifikaatioita. Siten CHO-soluja voidaan käyttää biolääketieteellisten tuotteiden tuottamiseen, joilla on erinomainen farmakologinen vaikutus.
- Korkea tuottavuus: CHO-soluja käytetään laajalti rekombinanttiproteiinien suurten saantojen tuottamiseen. CHO-solulinjan geneettinen optimointi on johtanut noin 3–10 gramman proteiinisaantoon viljelylitraa kohti.
- Geenien ilmentyminen: CHO-solut ovat helppoja transfektoida, minkä vuoksi niitä käytetään usein väliaikaisten ja vakaiden ilmentymistutkimusten tekemiseen. Lisäksi CHO-solulinjaa käytetään monien geneettisten työkalujen avulla geenien knock-in- ja knockout-mallien kehittämiseen.
- Viranomaishyväksynnät: CHO-soluja on käytetty lähes 50:ssä Yhdysvalloissa ja EU:ssa hyväksytyssä biolääkkeessä.
- Alhainen alttius viruksille: Hamsterin alkuperän ansiosta ihmisvirusten leviämisriski on pienentynyt, mikä vähentää tuotantotappioita ja parantaa bioturvallisuutta.
CHO-solujen tärkeimmät ominaisuudet
Morfologia: CHO-solut ovat ulkonäöltään epiteelisolujen kaltaisia, pitkänomaisia ja fibroblastien kaltaisia. Ne ovat adheesiivisia ja kasvavat tyypillisesti monokerroksina.
Solun koko: CHO-solujen keskimääräinen halkaisija on 12–14 μm.
Genomi ja ploidisuus: CHO-solut ovat aneuploidisia, ja niillä on 21 kromosomia, mikä eroaa kiinalaisen hamsterin euploidisesta kromosomimäärästä. CHO-solujen karyotyyppiä leimaavat useat rakenteelliset uudelleenjärjestelyt, mukaan lukien kromosomin 2 ja X-materiaalin osittainen menetys.
CHO- ja CHO-K1-solulinjojen vertailu
Alkuperäisen CHO-solulinjan raportoinnin jälkeen vuonna 1956 on luotu monia solulinjan muunnoksia eri tarkoituksiin. CHO-K1 luotiin yhdestä CHO-solukloonista vuonna 1957, ja CHO-DXB11 (tunnetaan myös nimellä CHO-DUKX) luotiin myöhemmin etyylimetaanisulfonaatin avulla suoritetun mutageneesin kautta. Niiden käyttökelpoisuus oli kuitenkin rajoitettua, koska ne palautuivat DHFR-aktiivisuuteen mutageneesin jälkeen. Myöhemmin CHO-soluja mutageneesattiin gammasäteilyllä, jolloin saatiin aikaan CHO-DG44, josta molemmat DHFR-alleelit oli poistettu kokonaan. Nämä DHFR-puutteiset kannat tarvitsevat kasvunsa varten glysiiniä, hypoksantiinia ja tymidiiniä, ja niitä käytetään laajalti teollisessa proteiinituotannossa. Myöhemmin muut valintajärjestelmät ovat yleistyneet, ja isäntäsolujen, kuten CHO-K1:n, CHO-S:n ja CHO-Pro minus:n, on osoitettu tuottavan suuria määriä proteiineja. Geneettisen epävakauden vuoksi näitä solulinjoja viljellään usein eläinperäisiä aineosia sisältämättömissä tai kemiallisesti määritellyissä elatusaineissa suspensiokulttuuribioreaktoreissa. Keskustelussa käsiteltiin myös CHO-solujen genetiikan ja kloonien johdannon monimutkaisuutta.
CHO-solujen avulla saavutetaan läpimurtoja
Kymmenen vinkkiä CHO-solujen viljelyyn
- CHO-solulinja on helppohoitoinen solulinja, jota on helppo viljellä.
- CHO-solujen populaation kaksinkertaistumisaika on nopea, 14–17 tuntia.
- CHO-solut ovat adheesiivisia ja kasvavat monokerroksina, mutta ne voidaan myös sopeuttaa kasvamaan suspensiossa.
- Väliviljele CHO-soluja 80–90 %:n konfluenssissa käyttäen Accutasea.
- Kylvä CHO-soluja tiheydellä 1 x 104 solua/cm2, jolloin saadaan konfluentti monokerros noin 4 päivässä.
- Optimaalisen viljelyn saavuttamiseksi käytä 50:50 DMEM- ja Ham's F12 -seosta, johon on lisätty 5 % FBS:ää ja L-glutamiinia.
- Vaihda kasvualusta 2–3 kertaa viikossa.
- Viljele CHO-soluja kostutetussa inkubaattorissa, johon on lisätty 5 % CO2-kaasua, 37 °C:ssa.
- Säilytä CHO-soluja nestemäisen typen höyryssä tai nestemäisessä faasissa (-196 °C).
- Noudata bioturvallisuustason 1 ohjeita CHO-solulinjan käsittelyssä ja viljelyssä.
CHO-soluja koskevat protokollat, videot ja tuoreet julkaisut
Tässä on eräitä erinomaisia lähteitä, joista saat lisätietoa CHO-solulinjan viljelystä ja ylläpidosta.
- Kattava soluviljelyprotokolla CHO-soluille: Tämän linkin avulla voit oppia kaiken CHO-solujen aliviljelystä ja transfektiosta.
- CHO-solut: Tältä sivustolta löydät perustietoa CHO-solulinjan viljelystä, mukaan lukien solujen jakaminen, säilyttäminen, pakastaminen ja sulattaminen jne.
- CHO-solujen sulatus: Tämä video esittelee esimerkillisen sulatusohjeen pakastetuille CHO-soluille.
Transfektioprotokollat CHO-solulinjalle
CHO-solut soveltuvat erinomaisesti sekä väliaikaiseen että pysyvään geenien transfektioon. Tässä on joitakin lähteitä, jotka tarjoavat hyödyllistä tietoa CHO-solulinjan transfektio-ohjeista.
- CHO-solujen transfektio: Tässä julkaistussa artikkelissa esitetään väliaikaisen transfektion protokolla CHO-solulinjalle käyttäen lineaarista polyetyleeni-imiiniä (PEI).
- Transfektiomenetelmät CHO-soluille: Tässä artikkelissa selitetään erilaisia strategioita CHO-solulinjojen tehokkaaseen transfektioon käyttäen erilaisia transfektioreagensseja.
- CHO-solujen väliaikainen transfektio: Tässä videossa selitetään kuvien avulla CHO-solujen väliaikaista ilmentymistä koskevien tutkimusten peruskäsitteitä.
Mielenkiintoisia tutkimusjulkaisuja, joissa on käytetty CHO-soluja
Seuraavassa on yhteenveto erilaisista tutkimuksista, joissa on käytetty CHO-soluja:
Tutkimus: "SARS-CoV-2-spike-proteiinin täyspitkän ektodomaiinin nopea ja tuottava tuotanto väliaikaisella geeniekspressiolla CHO-soluissa" (2021)
- Tarkoitus: SARS-CoV-2-spike-ektodomeenin ilmentäminen CHO-soluissa käyttäen kolmea väliaikaista transfektiomenetelmää korkean tuottavuuden saavuttamiseksi.
- Menetelmä: CHO-solut transfektoitiin täyspitkän SARS-CoV-2-spike-ektodomeenin koodaavilla plasmideilla käyttäen kolmea väliaikaista transfektiomenetelmää. Proteiinin ilmentymistä arvioitiin ELISA- ja Western blot -menetelmillä.
- Keskeiset tulokset: Kaikilla kolmella väliaikaisella transfektiomenetelmällä saavutettiin korkea proteiinin ilmentymistaso, ja suurin saanto saatiin polyetyleeniiminimenetelmällä.
Tutkimus: "Engineering a stable CHO cell line for the expression of a MERS-coronavirus vaccine antigen" (2018)
- Tarkoitus: Tuottaa MERS-koronaviruksen antigeeniä CHO-soluissa käytettäväksi tulevana rokotekandidaattina.
- Menetelmä: CHO-solut transfektoitiin MERS-koronavirusantigeenia koodaavalla plasmidilla ja valittiin stabiilin ilmentymisen varmistamiseksi käyttämällä geneticinia. Proteiinin ilmentymistä arvioitiin ELISA- ja Western blot -menetelmillä.
- Keskeiset havainnot: Vakaa CHO-solulinja osoitti korkeita proteiinin ilmentymistasoja ja vakautta useiden passagointien ajan.
Tutkimus: "Antarktiksen makrolevien rasvahappojen sytotoksinen vaikutus ihmisen rintasyöpäsolujen kasvuun" (2018)
- Tarkoitus: Käyttää CHO-soluja kontrollina arvioitaessa syöpälääkkeiden myrkyllisyyttä normaaleille soluille.
- Menetelmä: CHO-soluja viljeltiin ja käsiteltiin Etelämantereen makrolevyjen rasvahapoilla, ja solujen elinkelpoisuus arvioitiin MTT-määrityksellä.
- Keskeiset havainnot: Etelämantereen makrolevistä peräisin olevilla rasvahapoilla ei ollut sytotoksisia vaikutuksia CHO-soluille, mikä viittaa niiden potentiaaliseen käyttöön syöpäsoluja selektiivisesti vaikuttavana syöpälääkkeenä.
Tutkimus: "Kaspasi-7-geenin poistaminen parantaa rekombinantin proteiinin ilmentymistä CHO-solulinjassa solusyklin pysähtymisen kautta G2/M-vaiheessa" (2022)
- Tarkoitus: Geneettisesti manipuloida CHO-soluja rekombinanttiproteiinien ilmentymisen parantamiseksi.
- Menetelmä: Caspase-7-geeni poistettiin CHO-soluista CRISPR/Cas9-tekniikalla, ja proteiinin ilmentymistä arvioitiin Western blot -menetelmällä ja fluoresenssimikroskopialla.
- Keskeiset havainnot: Caspase-7-geenin poistaminen CHO-soluista johti proteiinin ilmentymisen paranemiseen, mikä johtui todennäköisesti caspase-7:n menetyksen aiheuttamasta solusyklin pysähtymisestä G2/M-vaiheessa.
Tutkimus: "CHO-solulinjan kehittäminen ihmisen MMP9:ää vastaan suunnattujen rekombinanttisten vasta-aineiden vakaaseen tuotantoon" (2015)
- Tarkoitus: Tuottaa monoklonaalisia vasta-aineita ihmisen MMP9-proteiinia vastaan CHO-soluissa.
- Menetelmät: CHO-solut transfektoitiin plasmidiilla, jotka koodasivat ihmisen MMP9:ää vastaan suunnattua vasta-ainetta, ja valittiin stabiilin ilmentymisen perusteella käyttämällä geneticinia. Proteiinin ilmentymistä arvioitiin ELISA- ja Western blot -menetelmillä.
- Keskeiset tulokset: Vakaa CHO-solulinja osoitti korkeita vasta-aineen ilmentymistasoja ja vakautta useiden passagointien aikana, mikä viittaa sen potentiaaliseen käyttöön ihmisen MMP9:ää kohdentavissa terapeuttisissa sovelluksissa.
CHO-soluja koskevia usein kysyttyjä kysymyksiä
Lähteet
- Reinhart, D. ym., Rekombinanttien CHO-K1-, CHO-DG44- ja CHO-S-solujen bioprosessointi: CHO-ilmentymisalustat suosivat joko monoklonaalisten vasta-aineiden tuotantoa tai biomassan synteesiä. Biotechnology Journal, 2019. 14(3): s. 1700686.
- Pan, X., et al., CHO-solujen koon kasvuvaiheen metabolinen karakterisointi fed-batch-viljelmissä. Applied microbiology and biotechnology, 2017. 101: s. 8101–8313.
- Turilova, V.I., T.S. Goryachaya ja T.K. Yakovleva, Kiinalaisen hamsterin munasarjasolulinja DXB-11: kromosomien epävakaus ja karyotyypin heterogeenisyys. Molecular Cytogenetics, 2021, 14(1): s. 1–12.
- Hunter, M. ym., proteiinin ilmentymisen optimointi nisäkässoluissa. Current protocols in protein science, 2019. 95(1): s. e77.
- Nyon, M.P. ym., Stabiilin CHO-solulinjan kehittäminen MERS-koronavirusrokoteantigeenin ilmentämistä varten. Vaccine, 2018. 36(14): s. 1853–1862.
- Pacheco, B.S., et al., Antarktiksen makrolevien rasvahappojen sytotoksinen vaikutus ihmisen rintasyöpäsolujen kasvuun. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2018. 6: s. 185.
- Ryu, J., et al., CHO-solulinjan kehittäminen ihmisen MMP9:ää vastaan suunnattujen rekombinanttisten vasta-aineiden vakaaseen tuotantoon. BMC biotechnology, 2022. 22(1): s. 8.