ARPE-19-solut - erikoistunut katsaus verkkokalvon pigmenttiepiteelisolujen tutkimukseen ARPE-19:n avulla

ARPE-19 ovat ihmisestä peräisin olevia spontaanisti syntyneitä verkkokalvon pigmenttiepiteelisoluja. Niitä käytetään verkkokalvon biologian, patologisten tilojen ja terapeuttisten toimenpiteiden (farmakologia) eri näkökohtien tutkimiseen. Tämän artikkelin tavoitteena on tarjota kattava näkemys kuolemattomista ARPE-19-soluista. Pääasiassa käsitellään solulinjan yleisiä ominaisuuksia, viljelyolosuhteita ja erilaisia tutkimussovelluksia. Siksi lukemalla tämän saat perusteellisen käsityksen seuraavista asioista:

ARPE-19-solut: ARPE ARPEPE: Alkuperä ja yleiset ominaisuudet
ARPE-19-solulinja: ARPE ARPEPE: ARPEPE ARPEPE: Viljelyä koskevat tiedot
ARPE-19-solujen edut ja rajoitukset
ARPE-19-solulinjan sovellukset tutkimuksessa
ARPE-19-solut: ARPE ARPEPE: Tutkimusjulkaisut
ARPE-19-solulinjan resurssit: ARPE ARPE: ARPE ARPE: Protokollia, videoita ja muuta: Protokollia, videoita ja muuta

1. ARPE-19-solut: Alkuperä ja yleiset ominaisuudet

Solulinjan alkuperän ja yleisten ominaisuuksien tunteminen on välttämätöntä, jotta sitä voidaan käyttää tehokkaasti tutkimuksessa. Tämä artikkeliosio kattaa kaikki ARPE-solulinjaa koskevat tiedot. Esimerkiksi: Mikä on ARPE-19-solulinja? Miksi käyttää ARPE-19-soluja? Mikä on ARPE-19/HPV-16-solulinja? Ovatko ARPE-19-solut kuolemattomia? Mikä on ARPE-19-solujen morfologia ja koko?

Kuolematon verkkokalvon pigmenttiepiteelisolulinja, ARPE-19, on peräisin 19-vuotiaan miehen silmistä, joka kuoli onnettomuudessa saamaansa päävammaan. Sen perusti Amy Aotaki-Keen vuonna 1986.
Nämä solut ilmentävät verkkokalvon pigmenttiepiteelisolujen merkkiaineita eli CRALBP:tä ja RPE-65:tä, mikä viittaa siihen, että ne voivat muodostaa vakaita monokerroksia, joille on ominaista morfologinen ja toiminnallinen polariteetti.
ARPE-19-soluilla on epiteelisolujen kaltainen morfologia.
ARPE-19-soluilla on enimmäkseen normaali karyotyyppi lukuun ottamatta yhtä deletoitumista ja yhtä lisäystä kromosomin 9 ja 19 pitkässä haarassa. Lisäksi havaitaan myös joitakin aneuploidioita [1].

Pyyhkäisyelektronimikroskooppikuva (SEM) verkkokalvon sauvoista ja kävyistä.

2.aRPE-19-solulinja: Viljelyä koskevat tiedot

Soluviljelyn perustiedot ovat ratkaisevan tärkeitä solulinjan asianmukaisen käsittelyn ja ylläpidon kannalta. Tämä jakso auttaa sinua oppimaan ARPE-19-solulinjan viljelyyn liittyvät keskeiset seikat. Saat tietää: Mikä on arpe-19:n kaksinkertaistumisaika? Mikä on ARPE-19:n kylvötiheys? Mikä on ARPE-19:n solutiheys? Mikä on ARPE-19:n pakastusmedia? Miten ARPE-19-solulinjaa viljellään?

ARPE-19-solujen viljelyä koskevat keskeiset seikat

Populaation kaksinkertaistumisaika:	ARPE-19:n kaksinkertaistumisaika on noin 55-65 tuntia. Ne voivat kokea jopa 48 populaatiokaksinkertaistumista.
Adheesiossa tai suspensiossa:	ARPE-19 on tarttuva solulinja.
Aliviljelysuhde:	ARPE-19:n subkultivointisuhde on 1:3-1:5. Tarttuvat solut huuhdellaan 1x PBS:llä ja inkuboidaan dissosiaatioliuoksella, akkutaasilla, 8-10 minuutin ajan. Irronneet solut lisätään tuoreeseen väliaineeseen ja sentrifugoidaan. Solupelletti resuspendoidaan uudelleen ja kaadetaan tuoretta elatusainetta sisältävään viljelykolviin.
Kasvualusta:	ARPE-19-solulinjan viljelyyn käytetään DMEM- tai Ham's F12 -mediaa. ARPE-19-soluväliaineeseen lisätään 5 % FBS, 3,1 g/l glukoosia, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamiinia, 1,0 mM natriumpyruvaattia ja 1,2 g/l NaHCO3. Väliaine vaihdetaan 2-3 kertaa viikossa.
Kasvuolosuhteet:	ARPE-19-soluja pidetään kostutetussa inkubaattorissa 37 °C:n lämpötilassa, jossa on 5 % CO2.
Varastointi:	Solulinja voidaan säilyttää nestemäisen typen höyryfaasissa tai alle -150 °C:n lämpötilassa solujen elinkelpoisuuden suojaamiseksi pitkällä aikavälillä.
Pakastusprosessi ja väliaine:	ARPE-19:n pakastusmediana käytetään CM-1:tä tai CM-ACF:ää. Lyhyesti sanottuna solut pakastetaan hitaalla pakastusmenetelmällä, joka sallii vain 1 °C:n lämpötilan laskun minuutissa ja suojaa soluja sokilta.
Sulatusprosessi:	Solut sulatetaan vesihauteessa, joka on esiasetettu 37 °C:seen. Kun pieni jääpalanen on jäänyt, solut lisätään tuoreeseen elatusaineeseen ja sentrifugoidaan. Näin poistetaan pakastusmedian osat. Seuraavaksi solupelletti suspendoidaan uudelleen, ja solut annostellaan pulloon viljelyä varten.
Bioturvallisuustaso:	ARPE-19-soluja käsitellään bioturvallisuustaso 1 -laboratorioissa.

ARPE-19-solut 10-kertaisella suurennoksella subkultivaation jälkeen ja puoliksi juoksevina.

3.aRPE-19-solujen edut ja rajoitukset

ARPE-19-soluja käytetään laajalti verkkokalvon solubiologisissa tutkimuksissa. Kuten muihinkin soluihin, myös niihin liittyy joitakin etuja ja rajoituksia. Tässä jaksossa luetellaan muutamia niistä:

Edut

ARPE-19-solulinjan tärkeimmät edut ovat seuraavat:

Verkkokalvon solumalli	ARPE-19-solut muistuttavat läheisesti ihmisen verkkokalvon pigmenttiepiteelisoluja, joten ne ovat ihanteellisia verkkokalvosairauksien tutkimiseen ja lääkkeiden testaamiseen.
Vakaa kasvunopeus	Näillä soluilla on vakaa kasvu ja niitä voidaan ylläpitää pitkiä aikoja, mikä helpottaa pitkäaikaisia kokeita.
Transfektiokelpoisuus	ARPE-19-solulinja on erinomainen transfektio-isäntä, jota käytetään laajalti sekä ohimenevissä että stabiileissa ekspressiotutkimuksissa.

Rajoitukset

Seuraavassa on joitakin ARPE-19-solulinjaan liittyviä rajoituksia:

Rajoitettu erilaistuminen

ARPE-19:n erilaistuminen on rajoitettua verrattuna primaarisiin verkkokalvosoluihin. Tämä voi mahdollisesti vaikuttaa tiettyihin erilaistumiseen liittyviin tutkimuksiin.

4.aRPE-19-solulinjan sovellukset tutkimuksessa

ARPE-19-solulinjalla on lukuisia sovelluksia verkkokalvon tutkimuksessa. Tässä on kerrottu tämän verkkokalvon pigmenttiepiteelisolulinjan eräistä erityisistä ja merkittävistä tutkimuskäytöistä.

Verkkokalvosairauksien tutkimus: ARPE-19-solut tarjoavat arvokasta tietoa verkkokalvon patogeneesistä. Tutkijat käyttävät soluja tautimekanismien ja mahdollisten hoitojen tutkimiseen. Vuonna 2020 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että sirkulaarinen RNA hsa_circ_0041795 on vuorovaikutuksessa miRNA-646:n ja VEGFC:n kanssa helpottaakseen korkean glukoosipitoisuuden aiheuttamaa vammaa ihmisen verkkokalvon pigmenttiepiteelisoluissa ARPE-19. Siksi tutkimuksessa ehdotetaan tätä kiertävää RNA:ta tehokkaaksi terapeuttiseksi ja diagnostiseksi kohteeksi diabeettisen retinopatian torjumiseksi [2]. Vastaavasti Jing Yang ja kollegat käyttivät ARPE-19-soluja ja antoivat näkemyksiä diabeettisen retinopatian patogeneesistä. He tutkivat, että lncRNA SNHG1:n (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) inhiboiminen voi tukahduttaa korkean glukoosipitoisuuden kanssa käsiteltyjen ARPE-19-solujen tulehdusreaktion ja epiteelin ja mesenkyymin välisen siirtymän [3].
Huumeiden testaus: ARPE-19-soluja käytetään lääkkeiden ja yhdisteiden tehokkuuden ja turvallisuuden arviointiin, mikä auttaa kehittämään hoitoja tai terapioita verkkokalvosairauksiin. Esimerkiksi vuonna 2019 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin Syzygium malaccense -bioaktiivisten aineiden suojaavat vaikutukset vetyperoksidin aiheuttamaa stressiä vastaan ihmisen verkkokalvon pigmenttiepiteelisoluissa, ARPE-19-soluissa [4]. Tämän jälkeen tutkimuksessa havaittiin Prunella vulgaris var. L -uutteen terapeuttinen rooli sinisen valon aiheuttamaa vammaa vastaan ARPE-19-soluissa ja hiirimallissa [5].

650,00 €*

Sisältö: 1.5 milliliter

Hinnat ilman veroja ja toimituskuluja

cryovial

Tuotenumero: 305025

5.aRPE-19-solut: ARPEPE ARPE: Tutkimusjulkaisut

Seuraavassa on joitakin mielenkiintoisia tutkimusjulkaisuja, joissa käsitellään ARPE-19-verkkokalvon pigmenttiepiteelisoluja.

ARPE-19-solujen mikroRNA-vasteiden arviointi hapetusstressiä vastaan

Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2018 Cutaneous and Ocular Toxicology -lehdessä. Tässä tutkimuksessa arvioitiin miRNA-ekspressiota vasteena hapettumisstressille, joka on indusoitu ARPE-19-ihmisen verkkokalvon pigmenttiepiteelisoluissa vetyperoksidikäsittelyn avulla.

ARPE-19-konditionoitu väliaine edistää rasvakudoksesta peräisin olevien mesenkymaalisten kantasolujen hermostollista erilaistumista

Tässä World Journal of Stem Cells -lehdessä (2021) julkaistussa julkaisussa ehdotettiin, että ARPE-19-solujen ilmastoitu väliaine sisältää kasvutekijöitä, jotka edistävät rasvakudoksesta peräisin olevien mesenkymaalisten kantasolujen hermostollista erilaistumista.

Kversetiini estää IL-1β:n aiheuttamien tulehdussytokiinien ja kemokiinien tuotantoa ARPE-19-soluissa MAPK- ja NF-κB-signalointireittien kautta

Tämä tutkimus julkaistiin International Journal of Molecular Sciences -lehdessä (2019). Siinä todetaan, että kversetiini suojaa IL-1β-stimuloitua kemokiinien vapautumista ARPE-19-soluissa estämällä MAPK- ja NF-κB-kaskadien aktivoitumista tulehdusvasteen parantamiseksi.

Resveratroli moduloi SIRT1:n ja DNMT:n toimintoja ja palauttaa LINE-1-metylaatiotasot ARPE-19-soluissa oksidatiivisen stressin ja tulehduksen alaisena

Tämä tutkimusartikkeli on julkaistu International Journal of Molecular Sciences -lehdessä (2018). Tässä tutkimuksessa arvioitiin oksidatiivisen stressin ja tulehduksen mahdollisia vaikutuksia SIRT1:n (Sirtuin 1) ja DNMT:ien (DNA-metyylitransferaasit) toimintaan sekä LINE-1:n (long interspersed nuclear element-1) metylaatiotasoihin ARPE-19-soluissa.

Chrysanthemum boreale -kukkauutteiden suojaava vaikutus A2E:n aiheuttamilta verkkokalvon vaurioilta ARPE-19-soluissa

Tässä Antioxidants-lehdessä (2022) julkaistussa artikkelissa todettiin, että Chrysanthemum boreale -kukkauutteilla on suojaavia vaikutuksia N-retinyylideeni-N-retinyylietanoliamiinin (A2E) aiheuttamilta verkkokalvon vaurioilta ARPE-19-soluissa.

6.aRPE-19-solulinjan resurssit: ARPEPEPE: protokollat, videot ja muuta

ARPE-19 on laajalti käytetty verkkokalvon epiteelisolulinja. Saatavilla olevat resurssit, jotka kattavat ARPE-19-solujen viljely- ja transfektioprotokollat, on lueteltu tässä:

ARPE-19 transfektio: ARPE-19-solulinjan transfektioprotokollan opettaminen vaihe vaiheelta.

Tässä on joitakin ARPE-19-soluviljelyprotokollaa kuvaavia resursseja:

ARPE-19-soluviljelyprotokolla: Tämä linkki sisältää tietoa ARPE-19-solujen viljelystä ja ylläpidosta. Se sisältää tietoja ARPE-19-solualustasta, viljelyolosuhteista, subkulturointiprotokollista sekä proliferatiivisten ja kryosäilöttyjen viljelmien käsittelystä.

Viitteet

Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
Sun, H. ja X. Kang, hsa_circ_0041795 edistää ihmisen verkkokalvon pigmenttiepiteelisolujen (ARPE 19) vaurioita, jotka ovat korkean glukoosin aiheuttamia miR-646:n spongeerauksen ja VEGFC:n aktivoinnin kautta. Gene, 2020. 747: p. 144654.
Yang, J., et al., Silenced SNHG1 Inhibited Epithelial-Mesenchymal Transition and Inflammatory Response of ARPE-19 Cells Induced by High Glucose. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
Arumugam, B., et al., Syzygium malaccense -lajin myritsetiinijohdannaisten suojaava vaikutus vetyperoksidin aiheuttamaa stressiä vastaan ARPE-19-soluissa. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
Kim, J., K. Cho ja S.-Y. Choung, Prunella vulgaris var. L -uutteen suojaava vaikutus sinisen valon aiheuttamia vaurioita vastaan ARPE-19-soluissa ja hiiren verkkokalvolla. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: p. 622-631.