A431-solut - Epidermoidikarsinooman solujen syvällinen analyysi ihotautitutkimuksessa

Kaksinkertaistumisaika:

A431-solujen populaation kaksinkertaistumisaika on 80-100 tuntia.

Tarttuvat tai suspensiossa:

A431 on tarttuva solulinja.

Kylvötiheys:

1 x^{104 solua/cm2} solutiheys on ihanteellinen A431-solulinjalle. Solujen konfluentoituminen tällä tiheydellä kestää lähes 4 päivää. Tarttuvat solut pestään PBS:llä (1x) ja inkuboidaan Accutase passaging -liuoksella. Tämän jälkeen solut resuspendoitiin kasvatusmediumiin ja sentrifugoitiin. Kerätyt solut resuspendoitiin uudelleen ja annosteltiin uusiin pulloihin kasvua varten.

Kasvualusta:

A431-solulinjan viljelyyn käytetään DMEM-mediaa, jota on täydennetty 10 %:lla naudan sikiöseerumilla, 4,5 g/l glukoosilla, 1,0 mM natriumpyruvaatilla, 1,5 g/l NaHCO3:lla ja 4 mM L-glutamiinilla. Väliaine on vaihdettava 2-3 päivän välein viikossa.

Kasvuolosuhteet:

A431-syöpäsoluja kasvatetaan kostutetussa inkubaattorissa, jossa on 5 %:n hiilidioksidilähde 37 °C:n lämpötilassa.

Varastointi:

Solulinja voidaan säilyttää sähköisessä pakastimessa tai nestemäisen typen höyryfaasissa alle -150 °C:n lämpötilassa, koska se auttaa suojaamaan solujen elinkelpoisuutta.

Pakastusprosessi ja väliaine:

CM-1 tai CM-ACF ovat kaksi erittäin suositeltavaa pakastusmediaa, joita käytetään A431-soluille. Solut pakastetaan käyttämällä hidasta pakastusmenetelmää, jossa lämpötila laskee vain yhden asteen minuutissa.

Sulatusprosessi:

Pakastetut A431-solut sulatetaan 37 °C:n vesihauteessa, joka sisältää mikrobilääkettä, 40-60 sekunnin ajan. Kun jäljellä on vain pieni jäämöhkäle, solut lisätään elatusaineeseen ja sentrifugoidaan. Kerätyt solut suspendoidaan uudelleen ja kaadetaan kasvatuspulloihin kasvatusta varten.

Bioturvallisuustaso:

A431-viljelmien käsittelyä ja ylläpitoa varten suositellaan bioturvallisuustasoa yksi.