Neuro-2a-solulinja
Neuro-2a on hiirestä peräisin oleva hermosolulinja, jota käytetään laajalti neurotieteiden tutkimuksessa. Näitä soluja käytetään pääasiassa hermoston kehityksen, erilaistumisen, neurotoksisuuden, solujen signalointireittien ja aksonien kasvun tutkimiseen. Lisäksi niitä käytetään lääkekehitykseen ja seulontaan.
Tässä artikkelissa keskitytään Neuro-2a-neuroblastoomasolujen tärkeisiin ominaisuuksiin, jotka voivat olla avuksi ennen solujen käytön aloittamista. Artikkelissa käsitellään pääasiassa seuraavia aiheita:
- Neuro-2a-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
- Neuro-2a-solulinjan viljelyohjeet
- Neuro-2a-solulinjan edut ja haitat
- Neuro-2a-solulinjan tutkimussovellukset
- Neuro-2a-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
- Neuro-2a-soluja koskevat resurssit: protokollat, videot ja muuta
Neuro-2a-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Tässä artikkelin osassa käsitellään Neuro-2a-solulinjan taustaa ja perusominaisuuksia, jotka on tärkeää tuntea ennen sen käyttöä. Täältä saat selville: Mikä on Neuro-2a-solulinja? Mikä on Neuro-2a -solulinjan alkuperä? Mitä on Neuro-2a-solujen erilaistuminen? Mikä on Neuro-2a-solun koko? Mikä on Neuro-2a-solujen morfologia?
- Neuro-2a-solut ovat peräisin albiinohiiren (kanta A) spontaanista kasvaimesta (neuroblastooma). Solulinjan perustivat R.J. Klebe ja F.H. Ruddle.
- Neuro-2a-neuroblastoomasolut osoittavat sekä hermosolujen että ameboidisten kantasolujen morfologiaa.
- Neuro-2a-solun korkeus on 12 mikrometriä [1].
- Neuro-2a-solujen kromosomiluku voi vaihdella välillä 59–193, ja modaaliluku on 95. Näiden neuroblastoomasolujen karyotyyppi on epävakaa välillä 94–98 kromosomia.
Neuro-2a-solulinjan viljelyohjeet
Neuro-2a-soluja käytetään laajalti neurotieteiden tutkimuslaboratorioissa. Ennen kuin aloitat näiden solujen käsittelyn, sinun tulee perehtyä alla mainittuihin välttämättömiin soluviljelyohjeisiin. Tämä voi helpottaa työtäsi. Tulet oppimaan: Mikä on Neuro-2a -soluviljelyalusta? Miten Neuro-2a-soluja viljellään? Mikä on Neuro-2a-solujen kaksinkertaistumisaika? Mikä on Neuro-2a -solujen kylvötiheys? Mikä on Neuro-2a-solujen viljelyprotokolla? Mikä on Neuro-2a-soluviljelyalusta?
Neuro-2a-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
Neuro-2a-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 70 tuntia.
Adheesio- vai suspensio-solut:
Neuro-2a on kiinnittyvä solulinja.
Kylvötiheys:
Neuro-2a-solulinjan optimoitu solujen kylvötiheys on 1 x 104 solua/cm2. Kylvöä varten solut pestään magnesium- ja kalsiumittomalla fosfaattipuskuriliuoksella (1x). Myöhemmin lisätään siirto-liuos (Accutase), ja soluja inkuboidaan 8–10 minuuttia huoneenlämmössä. Solujen irrottamisen jälkeen lisätään tuoretta elatusainetta, ja solut sentrifugoidaan. Kerätty solupelletti suspendoidaan huolellisesti uudelleen, ja solut kaadetaan viljelyastiaan kasvattamista varten.
Kasvatusväliaine:
Neuro-2a-solujen viljelyyn käytetään EMEM-kasvatusliuosta. Se sisältää 10 % FBS:ää, 2 mM L-glutamiinia, 1,5 g/l NaHCO₃:ta, EBSS:ää, 1 mM natriumpyruvaattia ja NEAA:ta, jotka takaavat ihanteellisen solujen kasvun. Kasvatusliuos tulee vaihtaa 1–2 kertaa viikossa.
Kasvatusolosuhteet:
Neuro-2a-viljelmiä pidetään 37 °C:n kostutetussa inkubaattorissa, joka on kytketty 5 %:n CO₂-syöttöön.
Säilytys:
Solut tulee säilyttää pitkäaikaisesti alle -150 °C:n lämpötilassa erittäin matalan lämpötilan sähköpakastimessa tai nestemäisen typen höyryvaiheessa.
Jäädytysprosessi ja elatusaine:
Neuro-2a-solujen pakastamiseen käytetään CM-1- tai CM-ACF-kasvatusväliaineita. Solut pakastetaan hitaalla pakastusprosessilla, jossa lämpötila laskee vain 1 °C minuutissa. Tämä suojaa soluja lämpöshokilta ja säilyttää niiden elinkelpoisuuden.
Sulatusprosessi:
Jäädytettyjen viljelmien sulattamiseksi pullo asetetaan 37 °C:n vesihauteeseen 40–60 sekunniksi, kunnes jäljellä on vain pieni jääpalanen. Sen jälkeen lisätään viljelyväliainetta, ja solut sentrifugoidaan. Tämä vaihe auttaa poistamaan pakastusväliaineen komponentit. Solupelletti suspendoidaan uudelleen, ja solut siirretään uuteen, viljelyväliaineella täytettyyn pulloon. Tämän jälkeen solut asetetaan 37 °C:n inkubaattoriin vähintään 24 tunniksi.
Bioturvallisuustaso:
Neuro-2a-viljelmien käsittely ja ylläpito edellyttävät bioturvallisuustason 1 laboratorio-olosuhteita.
Neuro-2a-solulinjan edut ja haitat
Neuro-2a-soluilla on joitakin etuja ja haittoja, jotka erottavat ne muista hermosolulinjoista. Tässä on lueteltu joitakin näiden solujen merkittävimpiä etuja ja haittoja.
Edut
Neuro-2a-hiiren neuroblastoomasolulinjan edut ovat:
-
Helppo ylläpitää:
Neuro-2a-solulinjaan ei liity monimutkaisia tai vaativia soluviljelymenettelyjä. Niitä on helppo viljellä ja ylläpitää tutkimuslaboratorioissa.
-
In vitro -hermosolumalli:
Neuro-2a on kätevä hermosolumalli, jota tutkijat käyttävät laajalti hermosolujen kehitystä ja erilaistumista koskevissa tutkimuksissa.
Haitat
Neuro-2a-solujen haittapuolia ovat:
-
Hiirperäisyys:
Neuro-2a on peräisin hiiristä, ja tutkijoiden tulee olla varovaisia yleistäessään hiiripohjaisten tutkimusten tuloksia ihmisten terveyteen ja sairauksiin, sillä hiiren ja ihmisen biologia voivat poiketa toisistaan merkittävästi.
Neuro-2a-solulinjan tutkimuskäyttö
Neuro-2a-soluilla on monia sovelluksia neurotieteiden tutkimusalalla. Tässä käsitellään muutamia tämän solulinjan lupaavia käyttötarkoituksia:
- Hermoston kehitys: Neuro-2a on in vitro -hermosolumalli, jota käytetään laajalti hermosolujen kehityksen ja siihen liittyvien prosessien, kuten erilaistumisen, aksonien kasvun ja synapsien muodostumisen, tutkimiseen. Vuonna 2020 tehdyssä tutkimuksessa käytettiin Neuro-2a-soluja mikroRNA-124:n roolin selvittämiseen retinoiinihapon indusoimassa hermosolujen erilaistumisessa [2]. Toisessa tutkimuksessa selvitettiin Neuro-2a-retinoiinihapon reseptori gamma (RARG) ja miRNA-124:n ilmentymistä neuroblastoomasolulinjassa (N2A). Tutkimuksessa esitettiin, että miR-124 kohdistuu RARG:hen ja estää neuritien kasvua [3].
- Neurotoksisuus: Neuro-2a-soluja käytetään myös arvioimaan lääkkeiden, kemikaalien tai ympäristötekijöiden myrkyllisiä vaikutuksia hermosoluihin. Esimerkiksi Zhihong Yinin ja hänen työryhmänsä tekemässä tutkimuksessa selvitettiin ympäristökemikaalin bisfenoli A:n (BPA) neurotoksisuutta Neuro-2a-soluilla. He havaitsivat, että BPA estää hermosolujen erilaistumista ja lisääntymistä häiritsemällä solujen ja synapsien eheyttä [4].
- Lääkeaineiden seulonta: Neuro-2a-soluja käytetään myös useiden lääkeaineiden, yhdisteiden ja luonnontuotteiden terapeuttisen vaikutuksen arviointiin. Esimerkiksi eräässä tutkimuksessa käytettiin Neuro-2a-soluja ja tutkittiin Gingko biloba -kasviuutteen antioksidanttista potentiaalia. Lisäksi tutkimuksessa esitettiin, että se vähentää Aβ-aggregaatiota ja voi olla potentiaalinen hoitomuoto Alzheimerin tautiin [5].
5. Neuro-2a-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
Seuraavassa on esitetty joitakin mielenkiintoisia tutkimusartikkeleita, joissa käsitellään Neuro-2a-solulinjaa.
Tässä Journal of Natural Medicines -lehdessä vuonna 2018 julkaistussa tutkimuksessa selvitettiin valkopippurista (P. nigrum) eristettyjen alkamidien terapeuttisia vaikutuksia Neuro-2a-hermosoluihin.
Tässä Acta Biochimica et Biophysica Sinica -lehdessä vuonna 2020 julkaistussa tutkimuksessa esitettiin, että Nkx2.1-geeni on tärkeässä roolissa hiiren aivojen kehityksessä säätelemällä Shh-signaalikaskadia.
Tämä artikkeli julkaistiin lehdessä Toxicology and Industrial Health (2023), ja siinä esitettiin, että ympäristökemikaali bisfenoli A laukaisee neurotoksisuutta neuro-2a-soluissa ja häiritsee niiden synapsien ja solukon toimintaa.
Tässä Pharmaceuticals-lehdessä (2021) julkaistussa artikkelissa esitettiin, että lääkeaine heksareliini moduloi PI3K/AKT- ja MAPK-signaalikaskadeja neuroblastoomasoluissa (Neuro-2a) ja estää vetyperoksidin aiheuttamaa Neuro-2a-solujen apoptoosia.
Tässä Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine -lehdessä (2021) julkaistussa tutkimusartikkelissa esitettiin, että Emblica officinalis -hedelmäuute hillitsee neuroinflammaatiota Neuro-2a-soluissa ja voi siten olla hyödyllinen neuroinflammatoristen sairauksien hoidossa.
Neuro-2a-soluja koskevat lähteet: protokollat, videot ja muuta
Seuraavassa on lueteltu Neuro-2a-soluista saatavilla olevat verkkoresurssit. Niihin sisältyy Neuro-2a-soluviljely- ja transfektioprotokolla.
- Neuro-2a-transfektioprotokolla: Neuro-2a on sopiva transfektiokohde. Tästä linkistä löydät ohjeet kyseisen solulinjan transfektioprotokollasta. Neuro-2a-solujen transfektiotehokkuus vaihtelee reagenssista toiseen.
Seuraava linkki sisältää Neuro-2a-soluviljelyohjeet.
- Neuro-2a-soluviljelyohjeet: Tästä linkistä löydät ohjeet Neuro-2a-solujen aliviljelyyn.
- Neuro-2a-solut: Verkkosivusto sisältää kattavaa tietoa Neuro-2a-soluviljelyalustoista, siemennustiheydestä sekä aliviljely- ja käsittelyohjeista kryosäilytettyjen ja proliferaatiokulttuurien osalta.
Viitteet
- Lulevich, V., et al., Yksisolutekniikka tarjoaa herkän ja kvantitatiivisen menetelmän amyloidi-beeta-peptidin ja hermosolujen välisten vuorovaikutusten tutkimiseen. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872–7.
- You, Q. ym., miR-124:n rooli retinoiinihapon indusoiman Neuro-2A-solujen erilaistumisen säätelyssä. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133–1139.
- Su, X. ym., MikroRNA-124 kohdistuu retinoiinihapon gamma-reseptoriin ja estää neuritien kasvua. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z. ym., Bisfenoli-A-altistuksen aiheuttama neurotoksisuus liittyy synapseihin ja sytoskeletoniin Neuro-2A-soluissa. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L. ym., Ginkgo biloba -uute (EGb) estää oksidatiivista stressiä APPsw:tä yli-ilmentävissä Neuro-2A-soluissa. BioMed Research International, 2019. 2019.