NIH-3T3 rakud: fibroblastide uuringute edendamine ja NIH-3T3 rakendused
NIH-3T3 rakuliin, mille Howard Green ja George Todaro asutasid 1962. aastal New Yorgi Ülikooli meditsiinikoolis 17-päevase Šveitsi albiino hiire embrüo koest, on muutunud biomeditsiinilise uurimistöö oluliseks ressursiks. NIH-3T3 rakud, mida tunnustatakse nende suure vastuvõtlikkuse poolest leukeemia- ja sarkoomiviiruste fookuste moodustumisele, on oluline vahend paljude teaduslike uuringute läbiviimisel, sealhulgas viirusonkoloogia uuringutes, geeniekspressiooni analüüsis ja rakkude kasvudünaamika uurimisel. Nimetus „3T3“ peegeldab rakukultuuri kasvatamise meetodit, tähistades „3-päevast ülekandmist“ (3-day transfer) algse külvitihedusega 3 × 10^5 rakku, rõhutades standardiseeritud tingimusi, milles neid rakke esmakordselt kasvatati ja paljundati.
- Kasvukeskkond
- Vaata tootelehte
- Kahekordistumisaeg
- Vaata toote lehekülge
- Kasvutüüp
- Adherentne
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli NIH-3T3
NIH-3T3 rakkude mitmekesised morfoloogiad ja rakendused
NIH-3T3 rakkude üks iseloomulikke omadusi on nende morfoloogiline kohanemisvõime, mis varieerub märkimisväärselt sõltuvalt kultuuri tihedusest. Madalamal tihedusel on need fibroblastid värtjaskujulised üksikrakkudena, kuid kui populatsioon saavutab tiheduse, muutuvad need tihedateks, keerlevateks mustriteks. Keskmise läbimõõduga umbes 18 μm pakuvad NIH-3T3 rakud mitmekülgset mudelit põhjalikeks rakubioloogia uuringuteks, ulatudes kudede taastumismehhanismidest kuni rakutsükli reguleerimise keeruliste radadeni.
Kasvatamisjuhised
Peamised kasvatamisandmed:
Populatsiooni kahekordistumisaeg: umbes 20 tundi.
Kasvutüüp: adhesiivsed kultuurid.
Seemendustihedus: soovitatav: 3–4 × 10⁴ rakku/cm².
Kasvukeskkond: DMEM või Ham's F12, millele on lisatud 5% FBS ja 2,5 mM L-glutamiini.
Kasvatustingimused: hoida 37 °C juures niisutatud inkubaatoris, kus on 5% CO₂.
Säilitamine: hoida temperatuuril alla -195 °C vedela lämmastiku aurufaasis.
Külmutamismeetod: Kasutada CM-1 või CM-ACF keskkonda; rakendada aeglast külmutamismeetodit (temperatuuri langus 1 °C).
Sulatusprotokoll: kiire soojendamine 37 °C veevannis, millele järgneb tsentrifuugimine külmutuskeskkonda eemaldamiseks, seejärel resuspendeerimine kasvukeskkonnas.
Bioloogilise ohutuse tase: Kasvatamiseks on vaja 1. bioloogilise ohutuse taseme tingimusi.
Šveitsi albiinohiir laboris.
NIH 3T3 rakkude kasutamise plussid ja miinused
Eelised
Transfektsiooni efektiivsus: NIH-3T3 rakud on tuntud oma kõrge transfektsioonimäära poolest ning sobivad suurepäraselt nii ajutise kui ka stabiilse geeniekspressiooni uuringuteks, võimaldades kasutada mitmesuguseid transfektsioonitehnikaid.
Toetava kihi kasulikkus: Need rakud toimivad sageli toetava kihina ko-kultuurides koos selliste rakkudega nagu keratinotsüüdid ja tüvirakud, tänu kasvufaktorite vabanemisele, mis soodustavad ko-kultuuris olevate rakkude kasvu.
Tüvirakkude uurimine: NIH-3T3 rakud on tüvirakkude uurimisel eelistatud valik, kuna need võimaldavad indutseerida pluripotentsust ilma geneetilise modifitseerimiseta ning pakuvad soodsat keskkonda tüvirakkude diferentseerumiseks.
Kultuuri stabiilsus: NIH-3T3 rakud on tuntud oma stabiilsuse ja spontaanse transformatsiooni madala esinemissageduse poolest. Teatavatel tingimustel või pärast kokkupuudet teatud onkogeenide või mutageenidega võivad NIH-3T3-rakud siiski läbida spontaanse transformatsiooni. See transformatsioon võib viia vähiliste omaduste omandamiseni, nagu kontrollimatu kasv, kontaktinhibitsiooni kadu ja võime moodustada kasvajaid, kui neid süstitakse vastuvõtlikesse peremeesorganismidesse.
Puudused
Rakusuuruse ebajärjekindlus: NIH-3T3-rakkude piklik, värttaoline morfoloogia võib varieeruda, mis raskendab pildianalüüsi katsetes.
Infektsioonitundlikkus: Need rakud on vastuvõtlikud bakteriaalsetele ja mükoplasma infektsioonidele, kui neid ei hoita rangetes aseptilistes tingimustes, mis võib mõjutada katse tulemuste usaldusväärsust.
NIH-3T3-rakkude rakendused teadusuuringutes
DNA transfektsiooni uuringud: NIH-3T3 rakkude vastupidavus teeb need ideaalseks erinevate geenide sisseviimiseks ja nende funktsiooni uurimiseks, mida on demonstreeritud uuringutes, milles on uuritud valke nagu NAB2-STAT6 ja nende rolli rakulistes protsessides.
Rakupõhised analüüsid: Nende usaldusväärsus hõlmab mitmesuguseid analüüse, sealhulgas eluvõimelisuse, apoptoosi ja fookuse moodustumise analüüse, pakkudes ülevaadet rakkude reaktsioonidest erinevates katsetingimustes.
Rakutsükli uurimine: Kuna selle rakuliini rakutsüklit on võimalik seerumi taseme kaudu lihtsalt mõjutada, on see võimas mudel rakutsükli reguleerimise ja selle häirete uurimiseks haiguste kontekstis.
Tõstke oma teadustöö uuele tasemele NIH-3T3 rakkude abil
Fibroblastide rakuliini NIH 3T3 hõlmavate olulisemate uuringute tutvustus
NIH-3T3 rakuliin on olnud kesksel kohal arvukates uurimisprojektides, mis hõlmavad rakubioloogia erinevaid aspekte. Allpool on toodud mõned olulised uuringud, milles on kasutatud neid rakke:
- NAB2-STAT6-fusioonvalgu uurimine: ajakirjas „Biochemical and Biophysical Research Communications” avaldatud uuring käsitleb NAB2-STAT6-fusioonvalgu mõju NIH-3T3 rakkudele, eelkõige selle rolli rakkude kasvu ja rände soodustamisel EGR-1 regulatsiooni kaudu.
- APOBEC3 ja hiire leukeemiaviiruse uurimine: ajakirjas „Virology“ avaldatud uuringus uuritakse AKV hiire leukeemiaviiruse hüpermutatsiooni NIH-3T3 rakkudes, mis ekspresseerivad hiire APOBEC3 geeni.
- Epigeneetiliste ravimite metastaasivastase potentsiaali hindamine: Ajakirjas „Oncotargets and Therapy“ avaldatud uuringus hinnatakse hüdralasiini ja valproehappe metastaasivastast mõju RAS-transformeeritud NIH-3T3 rakkudele.
- Baicaleini mõju NIH-3T3 rakkude proliferatsioonile ja kollageeni sünteesile: Selles uuringus kasutatakse NIH-3T3 rakke, et uurida, kuidas baicaleini mõjutab rakkude proliferatsiooni ja kollageeni tootmist miR-9/insuliini-sarnase kasvufaktori-1 telje modulatsiooni kaudu.
- Riboflaviini puuduse ja tuumorigeeneesi uurimine: Käesolevas uuringus esitatakse tulemused selle kohta, kuidas riboflaviini puudus NIH-3T3 rakkudes soodustab tuumorigeeneesi, edendades rakkude proliferatsiooni ja häirides rakutsükli geenide regulatsiooni.
Olulised ressursid NIH-3T3-rakkude uurimiseks
NIH-3T3-rakkudega töötamisest huvitatud teadlastele on saadaval mitmesugused ressursid, mis juhendavad rakkude kasvatamist ja eksperimentaalseid protokolle:
- Sfääride moodustumine NIH-3T3 rakkudes: See video annab üksikasjaliku ülevaate sfääride moodustamisest – 3D-rakukultuuri tehnikast, mis koondab NIH-3T3 rakud klastriteks, pakkudes uuringuteks füsioloogiliselt asjakohasemat mudelit.
- NIH-3T3 rakkude kasvu jälgimine: JuLI Br elusrakkude pildistamissüsteemi abil jäädvustab see video NIH-3T3 rakkude kasvudünaamikat 65 tunni jooksul, näidates rakkude paljunemist reaalajas.
Nende materjalide eesmärk on toetada teie teadustööd NIH-3T3 rakkudega, pakkudes alust edukateks katseteks ja avastusteks.
Korduma kippuvad küsimused NIH-3T3 rakkude kohta
Viited
- Rahimi, A.M., M. Cai ja S. Hoyer-Fender, „NIH3T3 fibroblastide rakuliini heterogeensus”. Cells, 2022. 11(17): lk 2677.
- Leibiger, C. jt., NIH 3T3 rakuliini esimene molekulaar-tsütogeneetiline kõrglahutusega iseloomustus hiire multicolor banding meetodil. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): lk 306–312.
- Wang, H.-X. jt., Erinevate toitekihide võrdlev analüüs 3T3-fibroblastidega küülikute limbaalsete tüvirakkude kultiveerimisel. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): lk 1021.
- Wang, Z. jt., Neuronaalsete rakkude diferentseerumine NIH/3T3-fibroblastidest määratletud tingimustes. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): lk 357–365.
- Park, Y.-S. jt., NAB2-STAT6-fusioonvalk vahendab rakkude proliferatsiooni ja onkogeenset progresseerumist EGR-1 regulatsiooni kaudu. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): lk 287–292.
- Mattsson, M., Sloppymerase™ ekspressioon NIH/3T3 rakkudes: veaprobleemidega fusioonpolümeraasi mitmekülgsuse uurimine. 2021.
- Sahinturk, V. jt., Akrüülamiid avaldab NIH/3T3 fibroblastides tsütotoksilist toimet apoptoosi kaudu. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): lk 481–489.
- Lusi, E.A. ja F. Caicci, Esimese inimese retro-hiiglasviiruse avastamine: selle morfoloogia, retroviirusliku kinaasi ja hiirtel kasvajate tekitamise võime kirjeldus. bioRxiv, 2019: lk 851063.
- Endo, M. jt., E2F1‐Ror2 signaalitee vahendab koordineeritud transkriptsiooniregulatsiooni, et soodustada G1/S-faasi üleminekut bFGF-ga stimuleeritud NIH/3T3 fibroblastides. The FASEB Journal, 2020. 34(2): lk 3413–3428.
- Long, L. jt., Riboflaviini puudus soodustab kasvajate teket HEK293T- ja NIH3T3-rakkudes, säilitades rakkude proliferatsiooni ja reguleerides rakutsükliga seotud geenide transkriptsiooni. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): lk 834–843.