NCI-H1299 rakud: NCI-H1299 kopsuvähi rakkude uurimine ja kliiniline tähtsus
NCI-H1299 on immortaliseeritud inimese mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt immuunonkoloogias, vähiuuringutes ja ravimite avastamise uurimistöös. Lisaks on teadlased kasutanud neid rakke ravimite tundlikkuse, aluseks olevate signaaliteede ja kopsuvähiga seotud molekulaarsete mehhanismide uurimiseks. Peale selle kasutatakse neid rakke selliste viirusnakkuste uurimiseks nagu SARS-CoV-2.
- Kasvukeskkond
- RPM1 1640 on ideaalne NCI-H1299 rakuliini kasvukeskkond. Seda täiendatakse 10% veise loote seerumiga, 4500 mg/l glükoosiga, 2,0 mM L-glutamiiniga, 1 mM naatriumpüruvaadiga, 1500 mg/l NaHCO₃ ja 10 mM HEPES-iga. Kasvukeskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
- Kaksikustumisaeg
- NCI-H1299 rakkude kahekordistumisaeg on vahemikus 22–30 tundi.
- Kasvutüüp
- NCI-H1299 on adhesiivne rakuliin.
- Bioloogilise ohutuse tase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli NCI-H1299
- NCI-H1299 rakkude üldised omadused ja päritolu
- Kultiveerimise teave
- NCI-H1299 rakuliini ostmine: kõrgekvaliteedilised uurimisvahendid kopsuvähi bioloogia uurimiseks
- NCI-H1299 rakkude eelised ja puudused
- NCI-H1299 rakkude rakendused teadustöös
- NCI-H1299 rakke käsitlevad teadusartiklid
- NCI-H1299 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud materjalid
- Korduma kippuvad küsimused NCI-H1299 rakuliini kohta
- Viited
- Korduma kippuvad küsimused
NCI-H1299 rakkude üldised omadused ja päritolu
Esimene asi, mida rakuliini kohta teada tuleb, on selle päritolu ja üldised omadused, kuna need aitavad teil kavandada selle kasutamist oma uurimistöös. Artikli käesolev osa aitab teil saada olulist teavet NCI-H1299 päritolu ja omaduste kohta. Näiteks: mis on NCI-H1299 kopsuvähirakud? Millist tüüpi rakud on NCI-H1299? Milline on NCI-H1299 rakkude suurus? Mis on erinevus A549 ja NCI-H1299 vahel?
- NCI-H1299 rakuliin pärineb 43-aastase valgenahalise meespatsiendi kopsu lümfisõlme metastaasist.
- Nendel rakkudel esineb p53-geeni homosügootne osaline deleetsioon; seetõttu ei ekspresseeri need p53-valku. p53-valgu ekspressiooni puudumine NCI-H1299 rakkudes soodustab H1299 kopsuvähirakkude proliferatiivset tendentsi.
- Lisaks p53-le on nendel surematuteks muudetud rakkudel teatatud NCI-H1299 KRAS-mutatsioon, mis vastutab nende kasvu, proliferatsiooni, rände ja invasiivsuse omaduste eest.
- NCI-H1299 kariotüüp on peaaegu diploidne.
- NCI-H1299 rakkudel on epiteelrakkudele sarnane morfoloogia.
- Need rakud on lamedad ja nende paksus on alla 5 µm.
NCI-H1299 ja A549
NCI-H1299 ja A549 on mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliinid. NCI-H1299 rakud on A549-ga võrreldes agressiivsemad ja tundlikumad. Mõlemal on suhteliselt sarnased mutatsioonid, näiteks KRAS. Erinevalt NCI-H1299 rakkudest ekspresseerivad A549 rakud aga P53 geeni.
Kultiveerimise teave
Rakuliini kultuuri hooldamine ei ole lihtne, kuni te ei tea selle kohta kõiki olulisi andmeid, sealhulgas: Milline on NCI-H1299 kahekordistumisaeg? Milline on NCI-H1299 külvitihedus? Milline on NCI-H1299 rakukultuuri kasvukeskkond? Kuidas kasvatada NCI-H1299 rakuliine? Käesolev osa aitab teil leida vastused kõigile nendele NCI-H1299 rakukultuuri kasvatamisega seotud küsimustele.
NCI-H1299 rakkude kasvatamise põhipunktid
Kahekordistumisaeg:
NCI-H1299 kahekordistumisaeg on vahemikus 22–30 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
NCI-H1299 on adhesiivne rakuliin.
Subkultiveerimise suhe:
NCI-H1299 rakke subkultiveeritakse soovitatavas suhtes 1:3 kuni 1:6. Istutamiseks pestakse adhesiivsed rakud 1x PBS-ga ja inkubeeritakse Accutase passaažilahusega 8–10 minutit toatemperatuuril. Lahtikleepunud rakud lisatakse värskele kasvukeskkonnale ja tsentrifuugitakse. Seejärel suspendeeritakse rakupellet uuesti ja rakud valatakse uutesse kasvukeskkonnaga kolvidesse.
Kasvukeskkond:
RPM1 1640 on ideaalne NCI-H1299 rakkude kasvukeskkond. Seda täiendatakse 10% loote veise seerumiga, 4500 mg/l glükoosiga, 2,0 mM L-glutamiiniga, 1 mM naatriumpüruvaadiga, 1500 mg/l NaHCO₃ ja 10 mM HEPES-iga. Kasvukeskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
NCI-H1299 kopsuvähi rakukultuure hoitakse niisutatud inkubaatoris temperatuuril 37 °C ja 5% CO₂ sisaldusega.
Säilitamine:
NCI-H1299 rakuliini võib pikaajaliselt säilitada vedela lämmastiku aurufaasis või ultra-madala temperatuuriga sügavkülmikutes temperatuuril alla -150 °C.
Külmutamisprotsess ja kasvukeskkond:
NCI-H1299 rakkude külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF keskkonda. Rakud külmutatakse aeglase külmutamisprotsessi abil, mille käigus temperatuur langeb vaid 1 kraadi minutis, et säilitada rakkude eluvõime.
Sulatusprotsess:
Külmutatud NCI-H1299 rakke segatakse kiiresti eelsoojendatud veevannis 37 kraadi juures 40–60 sekundit, kuni jääb alles vaid väike jää tükk. Sulatatud rakkudele lisatakse värsket kasvatuskeskkonda ja neid saab kasvatada otse uutes kolvides või tsentrifuugida. Esimesel juhul tuleb kasvatuskeskkond vahetada 24 tunni pärast inkubeerimist. Tsentrifuugimine aitab eemaldada külmutuskeskkonda jäävaid osakesi. Seejärel suspendeeritakse saadud rakud uuesti värskes kasvatuskeskkonnas ja jaotatakse uude kolbi kasvatamiseks.
Bioloogilise ohutuse tase:
NCI-H1299 rakukultuuri käitlemiseks on vajalik 1. bioloogilise ohutuse taseme labor.
NCI-H1299 rakuliini ostmine: kõrgekvaliteedilised uurimisvahendid kopsuvähi bioloogia uurimiseks
NCI-H1299 rakkude eelised ja puudused
Nagu teistelgi inimese vähirakkude liinidel, on ka NCI-H1299-l mõned eristatavad omadused, millega kaasnevad konkreetsed eelised ja puudused. Siin oleme kokku võtnud mõned olulisemad neist.
Eelised
NCI-H1299 mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliini peamised eelised on järgmised:
-
In vitro kopsuvähi mudel
NCI-H1299 rakuliinid on arendatud kopsuvähi lümfisõlme metastaasidest ja omavad seetõttu suhteliselt sarnaseid omadusi. Seetõttu võivad need rakud toimida in vitro mudelina kopsuvähi bioloogia, raku- ja molekulaarsete mehhanismide uurimiseks ning potentsiaalsete ravimite sõelumiseks ja testimiseks.
-
Lihtne kasvatada
NCI-H1299 rakke on teaduslaboris lihtne kasvatada ja hooldada. Rakukultuuri kasvatamiseks ei ole vaja keerukaid nõudeid ega protseduure.
-
NCI-H1299 p53 ja NCI-H1299 KRAS-mutatsioon
NCI-H1299 rakkudel puudub p53-geeni ekspressioon, mis võimaldab rakkudel jõuliselt paljuneda. Lisaks on neil KRAS-mutatsioon, mis soodustab rakkude kasvu, paljunemist, invasiivsust ja rännet. Seda arvestades kasutavad teadlased H1299 rakke KRAS- ja P53-mutatsioonidega seotud molekulaarsete mehhanismide uurimiseks.
Puudused
NCI-H1299 rakkude puudused on järgmised:
-
Koespetsiifilisus
NCI-H1299 pärineb kopsukoesest. Seetõttu on selle rakendatavus peamiselt piiratud kopsuvähi uurimisega. See ei pruugi täielikult kajastada teiste vähitüüpide heterogeensust ja üldisi omadusi.
NCI-H1299 rakkude rakendused teadustöös
NCI-H1299 rakuliini kasutatakse laialdaselt kopsuvähi uurimisel. Siin on nimetatud mõned selle rakuliini paljulubavad rakendused.
- Vähibioloogia: NCI-H1299 rakud on suurepärane uurimisvahend vähktõve tekke, progresseerumise ning sellega seotud raku- ja molekulaarsete mehhanismide uurimiseks. Need rakud kannavad teatud mutatsioone, mis võimaldab teadlastel uurida vähirakkude käitumist, signaaliteid ja geeniekspressiooni profiile. Mitmes uuringus on kasutatud NCI-H1299 mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliini kopsuvähi bioloogia uurimiseks. Näiteks uuriti 2018. aastal läbi viidud uuringus NCI-H1299 rakke kasutades kopsuvähi rakkude apoptoosiga seotud signaaliteed. Teadlased leidsid, et PI3K/AKT signaalitee soodustab rakkude proliferatsiooni ning selle pärssimine võib põhjustada vähirakkude surma [1]. Samuti uuriti teises uuringus NCI-H1299 epiteel-mesenküümse ülemineku (EMT) mehhanisme. Selles uuringus esitati hüpotees, et ekstratsellulaarne valk SPARC (sekreteeritud happeline ja tsüsteiinirikas valk) soodustab NCI-H1299 EMT-d ja migratsiooni, edendades seeläbi kasvajate teket rakkudes – SPARC-valk toimib TGF-β1 signaalimise vahendajana [2].
- Ravimite avastamine ja sõelumine: inimese kopsuvähi rakuliini NCI-H1299 kasutatakse laialdaselt potentsiaalsete ravimite toksilisuse ja efektiivsuse hindamiseks. Lisaks kasutavad teadlased seda kasvajavastaste ravimite toime mehhanismide uurimiseks. Uuringutes on neid rakke kasutatud ka võimalike ravimisihtmärkide ja resistentsusmehhanismide kindlakstegemiseks. Näiteks uurisid Xiao-Yun Shen ja tema kolleegid loodusliku ühendi bruceiini D (BD) vähivastast potentsiaali. Tulemused näitasid, et BD pärsib märkimisväärselt NCI-H1299 rakkude proliferatsiooni, invasiivsust ja rännet. Seetõttu võib seda pidada potentsiaalseks adjuvantraviks mitteväikerakk-kopsuvähi ravis [3]. Samamoodi hinnati ühes uuringus ksantohumooli tsütotoksilist mõju nii eraldi kui ka kombinatsioonis kemoteraapiavahendiga tsisplatiiniga NCI-H1299 kopsuvähirakkudel [4].
NCI-H1299 rakke käsitlevad teadusartiklid
Siin on toodud mõned olulised ja enim tsiteeritud teadusartiklid NCI-H1299 kopsuvähirakkude liini kohta.
See artikkel on avaldatud ajakirjas „Human and Experimental Toxicology“ (2021). Uuringus väidetakse, et indool-3-karbinool indutseerib H1299-rakkudes apoptoosi reaktiivsete hapnikuühendite (ROS) taseme tõusu kaudu.
See uurimus avaldati 2018. aastal ajakirjas „Cellular Physiology and Biochemistry“. Uurimistulemused näitasid, et kofeiinhappe ja paklitakseeli kombinatsioon avaldab sünergilist vähivastast toimet mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliinis NCI-H1299.
Käesolev teadusartikkel avaldati ajakirjas „Molecular Medicine Reports“ (2018). Uuringus hinnati triterpenoidsaponiini tubeimosiid-1 kasvajavastast toimet ja selle aluseks olevaid mehhanisme NCI-H1299 rakuliinis.
Ajakirjas „Journal of Cancer“ (2020) avaldatud artiklis väideti, et looduslik ühend pristimeriin pärsib NCI-H1299 rakkude proliferatsiooni ja migratsiooni.
VIPR1-geeni toimemehhanism inimese kopsu adenokartsinoomi H1299 rakkudes
Ajakirjas „Medical Oncology“ (2019) avaldatud uuringus uuriti VIPR1-geeni üliekspressiooni võimalikke mõjusid NCI-H1299 adenokartsinoomi rakuliinile.
NCI-H1299 rakuliini alased materjalid: protokollid, videod ja muud
Siin on mõned veebivahendid, mis käsitlevad NCI-H1299 rakke.
- NCI-H1299 transfektsioon: selles videos selgitatakse NCI-H1299 rakuliinide ajutise transfektsiooni protokolli.
- Adherentse rakuliini subkultiveerimine: Selles videos tutvustatakse adherentse rakuliini üldist subkultiveerimisprotseduuri.
Järgmine link sisaldab NCI-H1299 rakkude kultiveerimise teavet.
- NCI-H1299 rakuliin: Selle lingi kaudu saate tutvuda NCI-H1299 rakkude subkultiveerimise ja transfektsiooni protokolliga.
Korduma kippuvad küsimused NCI-H1299 rakuliini kohta
Viited
- Gu, J. jt., Uuring EGCG poolt indutseeritud apoptoosi kohta kopsuvähirakkudes PI3K/Akt signaalitee inhibeerimise kaudu. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): lk 4557–4563.
- Sun, W. jt., SPARC toimib TGF-β1 vahendajana, soodustades epiteeli-mesenküümse üleminekut A549 ja H1299 kopsuvähirakkudes. Biofactors, 2018. 44(5): lk 453–464.
- Shen, X.-Y. jt., Uuring bruceiini D toimemehhanismi kohta mitteväikerakk-kopsuvähi H1299 rakkude ravis. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): lk 500.
- Long, B. jt., Ksantohumooli ja selle kombinatsiooni tsisplatiiniga tsütotoksiline toime inimese metastaatilise kopsuvähi H1299 rakkudel. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): lk 1–15.