BxPC-3 rakuliin
BxPC-3 on inimese päritolu pankreasevähirakkude liin. Seda kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes. Teadlased kasutavad neid rakke peamiselt pankreasevähi bioloogia uurimiseks, ravisihte kindlaksmääramiseks ja vähivastaste ravimite väljatöötamiseks.
- Kasvukeskkond
- BxPC-3 rakuliini kasvatamiseks kasutatakse RPMI 1640 keskkonda. Selle ideaalseks rakukasvuks lisatakse 10% loote veise seerumit, 2,1 mM stabiilset glutamiini ja 2,0 g/l NaHCO3. Keskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
- Kahekordistumisaeg
- BxPC-3 rakkude kahekordistumisaeg on 48–60 tundi.
- Kasvutüüp
- BxPC-3 on adhesiivne rakuliin.
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-3
- Saadaval
- Cytion — Telli BxPC-3
Käesolev artikkel sisaldab olulist teavet BxPC-3 rakuliini kohta, mis võib oluliselt aidata sellega töötamisel. Peamiselt käsitletakse järgmisi teemasid:
- BxPC-3 rakuliini üldine teave ja päritolu
- BxPC-3 rakkude kasvatamine
- BxPC-3 rakuliin: eelised ja piirangud
- BxPC-3 rakkude rakendused teadustöös
- BxPC-3 rakke käsitlevad teadusartiklid
- BxPC-3 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
Üldine teave ja BxPC-3 rakuliini päritolu
Rakuliini päritolu tundmine on selle teadustöös kasutamise seisukohalt ülioluline. Rakuliini omaduste, sealhulgas morfoloogia, raku suuruse ja ploidsuse tundmine muudab selle kasutamise lihtsamaks ja mugavamaks. Siit leiate teavet BxPC-3 rakkude päritolu ja üldiste omaduste kohta: Mis on BxPC-3 rakud? Mis on BxPC-3 rakuliin? Mis on BxPC-3 rakuliini päritolu? Milline on BxPC-3 morfoloogia?
- BxPC-3, inimese pankrease kartsinoomi rakud, saadi 1986. aastal 61-aastaselt Euroopa naiselt, kellel oli pankrease adenokartsinoom. Nende rakkude tuumorigeensus kinnitati isegi pärast seda, kui patsient oli läbinud mitu kiiritus- ja keemiaravi seanssi. Seega on loodud rakuliin hindamatu mudel vähi arengu ja progresseerumise uurimiseks.
- BxPC-3 rakkudel on epiteelrakkudele sarnane morfoloogia.
- BxPC-3 tüüpiline kromosoomide arv on 59. Nendel rakkudel on homosügootne deleetsioon kromosoomis 18q, mis kodeerib SMAD4/DPC4 valku. Lisaks puudub rakuliinil BxPC-3 kras-mutatsioon, mis on pankreasevähkide seas levinud. Nendes pankreasevähirakkudes esineb ka BxPC-3 BRAF-deleetsioon.
Mis on erinevus BxPC3 ja PANC-1 vahel?
BxPC-3 PADC (pankrease duktaalne adenokartsinoom) ja PANC-1 rakud on esmased pankreasevähirakuliinid, millel on epiteelne morfoloogia. Siinkohal omavad esimesed rakud rohkem epiteelilaadseid omadusi, samas kui teised näitavad rohkem mesenküümseid omadusi [1].
BxPC-3 rakkude kasvatamine
BxPC-3 rakuliini kasutatakse laialdaselt vähiuuringute laborites. Selle pankreasevähirakuliini tõhusaks kasvatamiseks peate teadma järgmisi põhipunkte. Õpite järgmist: Milline on bxpc3 rakkude kahekordistumisaeg? Kuidas kasvatada BxPC-3 rakuliini?
BxPC-3 rakkude kasvatamise põhipunktid
Populatsiooni kahekordistumisaeg:
BxPC-3 rakkude kahekordistumisaeg on 48–60 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
BxPC-3 on adhesiivne rakuliin.
Jagamissuhe:
BxPC-3 rakke subkultiveeritakse suhtes 1:2 kuni 1:4. Rakud pestakse 1x PBS-ga ja inkubeeritakse passaažilahusega nimega Accutase. 8–10 minuti pärast lisatakse rakkudele värsket kasvukeskkonda ja rakud tsentrifuugitakse. Pelleti suspendeeritakse uuesti keskkonnas ja rakud valatakse kasvamiseks uude kultiveerimisnõusse.
Kasvukeskkond:
BxPC-3 rakuliini kultiveerimiseks kasutatakse RPMI 1640 keskkonda. Selle ideaalse raku kasvu saavutamiseks lisatakse sellele 10% loote veise seerumit, 2,1 mM stabiilset glutamiini ja 2,0 g/l NaHCO3. Kultuurikeskkonna tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
BxPC-3 rakukultuure hoitakse 37 °C niisutatud inkubaatoris, mis on ühendatud 5% CO2 varustusega.
Säilitamine:
Külmutatud rakke säilitatakse üldjuhul temperatuuril alla -150 °C või vedela lämmastiku aurufaasis, et kaitsta rakkude eluvõimelisust.
Külmutamisprotsess ja keskkond:
BxPC-3 rakukultuuride külmutamiseks võib kasutada CM-1 või CM-ACF. Rakke šoki vältimiseks järgitakse aeglast külmutamisprotsessi, mille käigus temperatuur langeb vaid 1 °C võrra.
Sulatusprotsess:
Külmutatud BxPC-3 rakud sulatatakse eelnevalt 37 °C-le seadistatud veevannis 40–60 sekundit. Kui on jäänud alles väike jääklomp, lisatakse rakkudele värsket kasvukeskkonda ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda sisaldavad osakesed. Seejärel suspendeeritakse rakupellet uuesti ja rakud jaotatakse kasvuks kolbidesse.
Bioloogiline ohutustase:
BxPC-3 rakukultuure hoitakse 1. bioloogilise ohutuse taseme laborites.
BxPC-3 rakuliin: eelised ja piirangud
BxPC-3 on tuntud pankrease adenokartsinoomi rakuliin, millel on mitmeid eeliseid ja piiranguid. Rakuliini peamised eelised ja puudused on loetletud siin.
Eelised
BxPC-3 rakkude peamised eelised on järgmised:
-
Pankreasevähi in vitro mudel
Pankrease adenokartsinoomi patsientidelt saadud BxPC-3 rakud näitavad asjakohaseid omadusi, mis teeb neist sobiva mudeli pankreasevähi käitumise uurimiseks in vitro.
-
Tumorigeenne rakuliin
BxPC-3 rakkudel on tuumorigeensed omadused ja need võivad moodustada kasvajaid, kui neid süstitakse alasti või immuunpuudulikkusega hiirtele. Need kasvajad sarnanevad väga primaarsete pankrease adenokartsinoomi kasvajatega, mistõttu on BxPC-3 ksenotransplantaadi mudel ideaalne vähi kasvu ja progresseerumise uurimiseks.
Piirangud
BxPC-3 rakuliiniga seotud piirangud on järgmised:
-
Ristsaastumine
BxPC-3 rakuliinil, nagu igal teiselgi, on ristsaastumise oht. Teadlased peaksid nende rakkudega töötamisel olema ettevaatlikud ja järgima rangeid saastumisvastaseid protokolle.
-
Aeglane kasvutempo
BxPC-3 rakkudel on suhteliselt aeglane paljunemistempo, mille kahekordistumisaeg on 48–60 tundi. See omadus võib nõuda teatud katsete puhul pikemaid inkubatsiooniperioode, mis võib põhjustada viivitusi teadustöö edenemises.
BxPC-3 rakkude rakendused teadustöös
BxPC-3 rakkudel on palju rakendusi vähiuuringutes. Kõige levinumad rakendused on:
- Pankreasevähi uurimine: BxPC-3 rakud imiteerivad pankrease adenokartsinoomi ja seetõttu kasutatakse neid kasvajate arengu ja kasvu aluseks olevate geneetiliste ja molekulaarsete mehhanismide uurimiseks. Lisaks avastavad teadlased nende rakkude abil uusi biomarkereid ja ravisihte. Lisaks ekspresseerivad BxPC-3 rakud märkimisväärselt angiogeenseid faktoreid, st interleukiin-8 (IL-8), prostaglandiin E2 (PGE2) ja vaskulaarne endoteeli kasvufaktor (VEGF), mis muudab need sobivaks angiogeneesi uurimiseks. Siinkohal on angiogenees oluline protsess, mis on seotud vähi kasvu ja metastaasidega. 2022. aastal avaldatud uuringus uuriti, et laminiin-5 gamma-2 (LAMC2) üleväljendamine BxPC3 PDAC-s (pankrease duktaalne adenokartsinoom) suurendab selle tuumorigeeneesi, reguleerides BxPC3 EGFR /ERK1/2/ AKT/mTOR signaalitee reguleerimise kaudu [2].
- Ravimite avastamine ja arendamine: BxPC-3 rakuliin on hindamatu väärtusega vähivastaste ravimite testimise mudel. Teadlased uurivad potentsiaalsete ravimite tsütotoksilist, metastaasivastast ja apoptootilist mõju BxPC3 PDAC-le. Alexandria Turneri ja kolleegide poolt 2020. aastal läbi viidud uuringus uuriti Elaeocarpus reticulatus'e viljaekstraktide apoptootilisi omadusi BxPC-3 pankreasevähirakkudes [3]. Samamoodi viidi 2020. aastal läbi uuring, milles määrati kindlaks Oxialis obtriangulata nimelise taime metanooliekstrakti vähivastane potentsiaal BxPC-3 rakkudes. Lisaks uurisid teadlased ka rakkude mehhanistlikku teed, mille kaudu taimeekstrakt avaldas terapeutilist mõju [4].
5. BxPC-3 rakke käsitlevad teadusartiklid
Käesolevas jaotises on loetletud mõned kõige sagedamini tsiteeritud ja huvitavamad publikatsioonid, milles käsitletakse BxPC-3 rakuliini.
Likokumaron indutseerib BxPC-3 pankrease adenokartsinoomi rakkude surma, inhibeerides DYRK1A-d
Selles ajakirjas Chemico-Biological Interactions (2020) avaldatud artiklis uuriti loodusliku ühendi, likokumarone, apoptootilist mõju BxPC-3 pankreasevähirakkudele.
See teadusartikkel avaldati ajakirjas Anticancer Research (2022). Uuringus väideti, et hüdroksüklorokiin põhjustab BxPC3-rakkude surma, inhibeerides BCL-XL-geeni.
See uurimus avaldati 2020. aastal ajakirjas Journal of Cellular Biochemistry. Uurimuses väidetakse, et looduslik ühend salidrosiid avaldab BxPC-3 rakkudes vähivastast toimet, reguleerides HIF-1α (hüpoksiast indutseeritav faktor) ja LOXL2 signaalikaskadi.
Ibrutinibi mõju pankreasevähirakkude radiosensitiivsusele, suunates EGFR/AKT/mTOR signaaliteed
Ajakirjas Biomedicine & Pharmacotherapy avaldatud artikkel viitab sellele, et ibrutinibi võib kasutada suurepärase radiosensibilisaatorina pankreasevähiga patsientidel. In vitro uuring BxPC-3 rakkudel näitab, et see vähendab BxPC3 EGFR fosforüleerimist ning pAKT ja allavoolu geenide ekspressiooni, mida kiiritusravi ülesreguleerib.
Chelidoniin indutseerib apoptoosi GADD45a-p53 regulatsiooni kaudu inimese pankreasevähirakkudes
Ajakirjas Integrative Cancer Therapies avaldatud uuringus väidetakse, et looduslik toode chelidoniin avaldab apoptootilist toimet inimese pankrease rakkudes BxPC-3, reguleerides BxPC3 p53 ja GADD45a signaalimist.
BxPC-3 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
BxPC-3 rakuliinil on palju huvitavaid eeliseid, mis muudavad selle sobivaks teadustööks. Paljudes BxPC-3 rakuliini käsitlevates veebivahendites mainitakse selle käitlemise, hooldamise ja transfektsiooni protokolle.
- BxPC3 transfektsioon: See video on samm-sammuline juhend BxPC-3 rakkude transfektsiooniprotokolli õppimiseks.
Artikli selles osas on toodud mõned lingid, mis selgitavad BxPC3 rakukultuuri protokolle.
- BxPC3 rakukultuur: See veebisait aitab teil õppida protokolle krüokonserveeritud ja proliferatiivsete BxPC-3 kultuuride subkultiveerimiseks ja käitlemiseks.
Viited
- Kim, Y. jt, Pankrease duktaalse adenokartsinoomi rakuliinide võrdlev proteoomiline profiil. Mol Cells, 2014. 37(12): lk 888–98.
- Kirtonia, A. jt, Laminiin-5 gamma-2 üliekspressioon soodustab pankrease duktaalse adenokartsinoomi tuumorigeeneesi EGFR/ERK1/2/AKT/mTOR kaskaadi kaudu. Cellular and Molecular Life Sciences, 2022. 79(7): lk 362.
- Turner, A. jt., Elaeocarpus reticulatus'e viljaekstraktid vähendavad eluvõimet ja indutseerivad apoptoosi pankreasevähirakkudes in vitro. Molecular biology reports, 2020. 47: lk 2073–2084.
- An, E.-J. jt, Oxialis obtriangulata vähivastane potentsiaal pankreasevähirakkudes ERK/Src/STAT3-vahendatud signaalitee reguleerimise kaudu. Molecules, 2020. 25(10): lk 2301.