Células U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
800,00 €*
Los productos se envían congelados en hielo seco en criotubos. Cada criotubo contiene normalmente 3 × 10 6 células para líneas adherentes o 5 × 106 células para líneas en suspensión (consulte el certificado de análisis del lote para obtener más detalles).
Información general
| Descripción | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 es una línea celular de osteosarcoma humano editada genómicamente derivada de células U2OS en la que se ha modificado el gen SEH1L (SEH1) endógeno mediante la tecnología CRISPR/Cas9 para codificar una etiqueta SNAPf en marco. SEH1 es un componente del complejo Y (también conocido como complejo NUP107-160), un módulo estructural central del complejo de poros nucleares (NPC) que contribuye al ensamblaje y la estabilidad del andamio de los poros. Al insertar la secuencia codificante SNAPf en el locus endógeno, la proteína SEH1 etiquetada se expresa bajo control regulador nativo, lo que preserva los niveles de expresión fisiológicos y minimiza las perturbaciones en la composición de los poros nucleares. La etiqueta SNAPf es una variante modificada genéticamente y de rápida reacción de la etiqueta SNAP que se une covalentemente a sustratos conjugados con bencilguanina, lo que permite un marcaje fluorescente selectivo y estable en células vivas o fijadas. En las células U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, la proteína de fusión se localiza en la envoltura nuclear con un patrón punteado característico de la distribución del NPC. Dado que el marcaje se produce a niveles de proteína endógena, este sistema es muy adecuado para la microscopía de fluorescencia cuantitativa, la obtención de imágenes de superresolución y los análisis de seguimiento de partículas individuales destinados a diseccionar la organización y la estequiometría de los NPC. La morfología plana y los núcleos grandes de las células U2OS facilitan aún más la visualización de alta resolución de las estructuras de la envoltura nuclear. SEH1 participa en la biogénesis de los NPC y también se ha implicado en procesos asociados al cinetocoro durante la mitosis. En consecuencia, esta línea celular proporciona una plataforma sólida para investigar el ensamblaje y desensamblaje de los NPC dependientes del ciclo celular, la organización espacial del complejo Y dentro del andamio del poro y las posibles funciones duales de SEH1 en la envoltura nuclear y los cinetocoros mitóticos. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 permite realizar estudios mecánicos de la arquitectura y la dinámica de los poros nucleares en condiciones de expresión fisiológicamente relevantes. |
|---|---|
| Organismo | Humano |
| Tejido | Hueso |
| Enfermedad | Osteosarcoma |
Características
| Edad | 15 años |
|---|---|
| Género | Mujer |
| Etnia | Caucásico |
| Morfología | De tipo epitelial |
| Propiedades de crecimiento | Adherente |
Datos reglamentarios
| Cita | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (número de catálogo de Cytion 300664) |
|---|---|
| Nivel de bioseguridad | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Depositante | Laboratorio Ellenberg (EMBL) |
| Situación de los OMG | GMO-S1: Esta línea celular de osteosarcoma humano (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) contiene una fusión SNAPf-SEH1 mediada por CRISPR que permite el marcaje selectivo de la nucleoporina SEH1. La modificación está presente de forma estable. Esta clasificación sólo se aplica en Alemania y puede diferir en otros países. |
Datos biomoleculares
| Expresión de proteínas | SEH1, SNAPf-tag |
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Manejo de
| Medio de cultivo | McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosa, w: Glutamina estable, w: 2,0 mM Piruvato sódico, w: 2,2 g/L NaHCO3 (número de artículo de Cytion 820200a) |
|---|---|
| Suplementos | Suplementar el medio con 10% FBS, 3,0 g/L de Glucosa, Glutamina estable, 2,0 mM de Piruvato sódico, 2,2 g/L de NaHCO3, 1% de NEAA |
| Reactivo de disociación | Accutase |
| Subcultivo | Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco. |
| Medio de congelación | Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido. |
| Descongelación y cultivo de células |
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| Atmósfera de incubación | 37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada. |
| Recubrimiento de matraces | Para una fijación y viabilidad óptimas tras la descongelación, recomendamos utilizar matraces o placas recubiertos de colágeno. |
| Procedimiento de congelación | Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado. |
| Condiciones de envío | Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado. |
| Condiciones de almacenamiento | Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido. |
Control de calidad / Perfil genético / HLA
| Esterilidad | La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia. Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias. |
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