Μέσο κυτταρικής καλλιέργειας
Τα καλλιεργούμενα κύτταρα απαιτούν σχολαστικό περιβαλλοντικό έλεγχο για επιτυχή ανάπτυξη και συντήρηση. Μια ολοκληρωμένη προσέγγιση περιλαμβάνει τη διασφάλιση της στειρότητας, της παροχής θρεπτικών συστατικών, της σταθερότητας του pH και του ελέγχου της θερμοκρασίας.
Αποστειρωμένες συνθήκες και παροχή θρεπτικών συστατικών
Για την αποφυγή επιμολύνσεων και τη διασφάλιση της βιωσιμότητας των κυττάρων, ένα αποστειρωμένο περιβάλλον είναι ζωτικής σημασίας. Αυτό συνήθως επιτυγχάνεται μέσω ασηπτικών τεχνικών και εξειδικευμένου εξοπλισμού, όπως οι απορροφητήρες στρωτής ροής. Τα θρεπτικά συστατικά παρέχονται μέσω των μέσων καλλιέργειας, τα οποία περιέχουν ένα μείγμα βασικών συστατικών, όπως:
- Ανόργανα άλατα: Ζωτικής σημασίας για τη διατήρηση της οσμωτικής ισορροπίας και την παροχή των απαραίτητων ιόντων για τις κυτταρικές δραστηριότητες.
- Υδατάνθρακες: Η γλυκόζη είναι το πιο συχνά χρησιμοποιούμενο σάκχαρο.
- Αμινοξέα: Τα δομικά στοιχεία των πρωτεϊνών- ορισμένα είναι απαραίτητα και δεν μπορούν να συντεθούν από τα κύτταρα.
- Βιταμίνες: Λειτουργούν ως συμπαράγοντες για ενζυματικές αντιδράσεις- οι βιταμίνες Β είναι απαραίτητες για τον κυτταρικό μεταβολισμό.
- Λιπαρά οξέα και λιπίδια: Απαραίτητα συστατικά για την ακεραιότητα και τη λειτουργία της κυτταρικής μεμβράνης.
- Πρωτεΐνες και πεπτίδια: Σε μέσα χωρίς ορό, αυτά αντικαθιστούν τους αυξητικούς παράγοντες και τις δεσμευτικές πρωτεΐνες που συνήθως παρέχονται από τον ορό.
- Ορός: Συχνά περιλαμβάνεται ως πηγή αυξητικών παραγόντων, αν και οι εναλλακτικές λύσεις χωρίς ορό κερδίζουν όλο και μεγαλύτερη δημοτικότητα για τη μείωση της μεταβλητότητας και των κινδύνων μόλυνσης.
- σταθερότητα pH και θερμοκρασίας: Τα κύτταρα απαιτούν συνήθως ένα εύρος pH 7,2-7,4 για βέλτιστη ανάπτυξη. Αυτό ρυθμίζεται από ρυθμιστικά συστήματα, τα οποία μπορεί να είναι είτε βασισμένα σε CO2/βικαρβονικά είτε να επιτυγχάνονται χημικά με τη χρήση παραγόντων όπως το HEPES. Η θερμοκρασία διατηρείται γύρω στους 37°C για να μιμείται τις φυσιολογικές συνθήκες.
Παραλλαγές μέσων και βελτιστοποίηση
Με την πάροδο των ετών, έχουν αναπτυχθεί διάφορα βασικά μέσα για την εξυπηρέτηση συγκεκριμένων κυτταρικών τύπων:
- Ισορροπημένα διαλύματα αλάτων: Αποτελούν τη βάση πιο σύνθετων συνθέσεων μέσων.
- Βασικά μέσα, όπως το Minimum Essential Medium (MEM), χρησιμοποιούνται για πρωτογενείς καλλιέργειες και διπλοειδή κύτταρα.
- Σύνθετα μέσα: Όπως το RPMI 1640, είναι κατάλληλα για ένα ευρύτερο φάσμα κυττάρων θηλαστικών.
- Μέσα χωρίς ορό: Προσαρμοσμένα για συγκεκριμένες εφαρμογές, μειώνοντας τον κίνδυνο μόλυνσης από συστατικά ζωικής προέλευσης.
Προετοιμασία μέσων και έλεγχος ποιότητας
Τα μέσα μπορούν να παρασκευαστούν εσωτερικά από βασικά συστατικά ή να αγοραστούν ως έτοιμα διαλύματα. Ο ποιοτικός έλεγχος περιλαμβάνει τη διασφάλιση της απουσίας επιμολυντών και της κατάλληλης συγκέντρωσης των συστατικών. Η ανασύσταση των μέσων σε σκόνη απαιτεί νερό υψηλής ποιότητας και τα παρασκευασμένα μέσα πρέπει να αποστειρώνονται, συνήθως με διήθηση.
Χρήση ορού και ζητήματα ασφάλειας
Η χρήση ορού, ιδίως εμβρυϊκού ορού βοοειδών (FBS), είναι συνήθης λόγω της πλούσιας περιεκτικότητάς του σε αυξητικούς παράγοντες. Ωστόσο, λόγω των ανησυχιών για ασθένειες όπως η ΣΕΒ, ακολουθούνται αυστηρά πρωτόκολλα δοκιμών και προμήθειας για να διασφαλιστεί η ασφάλεια.
Ρυθμιστικές κατευθυντήριες γραμμές και τάσεις
Οι κανονισμοί καθοδηγούν τα υλικά ζωικής προέλευσης στις καλλιέργειες, τονίζοντας τη σημασία της προμήθειας και των δοκιμών. Η τάση προς την εξάλειψη τέτοιων υλικών, όπου είναι δυνατόν, αντικατοπτρίζεται στην ανάπτυξη εναλλακτικών μέσων χωρίς ορό και χωρίς ζώα.
Εν κατακλείδι, τα μέσα κυτταροκαλλιέργειας διαδραματίζουν θεμελιώδη ρόλο στην ανάπτυξη και συντήρηση των κυττάρων in vitro. Κάθε συστατικό επιλέγεται προσεκτικά και βελτιστοποιείται ώστε να μιμείται το in vivo περιβάλλον, διασφαλίζοντας ότι τα κύτταρα έχουν συνθήκες ανάπτυξης, επιβίωσης και λειτουργικότητας.
Αυτό που κάνει το DMEM να ξεχωρίζει από άλλα μέσα είναι η μοναδική του σύνθεση. Περιέχει εντυπωσιακή τετραπλάσια συγκέντρωση αμινοξέων και βιταμινών σε σύγκριση με το αρχικό Eagle's Minimal Essential Medium. Αρχικά αναπτύχθηκε με χαμηλή γλυκόζη (1 g/L) και πυρουβικό νάτριο, το DMEM χρησιμοποιείται συχνά με υψηλότερα επίπεδα γλυκόζης, είτε με είτε χωρίς πυρουβικό νάτριο. Ειδικότερα, το DMEM δεν περιέχει πρωτεΐνες, λιπίδια ή αυξητικούς παράγοντες, γεγονός που καθιστά αναγκαία τη συμπλήρωση. Για την επίτευξη βέλτιστης ανάπτυξης, μια συνήθης προσέγγιση είναι η συμπλήρωση της DMEM με 10% εμβρυϊκό ορό βοοειδών (FBS). Επιπλέον, η DMEM χρησιμοποιεί ένα ρυθμιστικό σύστημα διττανθρακικού νατρίου, απαιτώντας ένα περιβάλλον 5-10% CO2 για τη διατήρηση ενός φυσιολογικού pH.
Το Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) είναι ιδιαίτερα αναγνωρισμένο μεταξύ των καθορισμένων μέσων για την καλλιέργεια κυττάρων και ιστών, καλύπτοντας τις ανάγκες ανάπτυξης διαφόρων φαινοτύπων προσκολλημένων κυττάρων. Υπερτερεί του αρχικού Eagle's Medium, που αναπτύχθηκε τη δεκαετία του 1950 για την καλλιέργεια κυττάρων κοτόπουλου, μέσω της ενισχυμένης συμπληρωματικής σύνθεσης που είναι γνωστή ως τροποποίηση Dulbecco. Αυτή η τροποποίηση αυξάνει σημαντικά την περιεκτικότητα σε επιλεγμένα αμινοξέα και βιταμίνες έως και τετραπλάσια σε σύγκριση με το αρχικό μέσο.
Στον τομέα της κυτταροκαλλιέργειας, το DMEM διαδραματίζει ζωτικό ρόλο ως μέσο ανάπτυξης για διάφορους τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των πρωτογενών κυττάρων, των βλαστικών κυττάρων και των μετασχηματισμένων κυττάρων. Οι ερευνητές χρησιμοποιούν επίσης την τροποποιημένη έκδοση της DMEM για ένα ευρύ φάσμα ερευνητικών εφαρμογών, όπως η ανακάλυψη φαρμάκων, η μηχανική ιστών και η μελέτη των μονοπατιών κυτταρικής σηματοδότησης.
Ποιοτικός έλεγχος
Αποστειρωμένο φιλτραρισμένο
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Φυλάσσεται στους +2°C έως +8°C, προστατευμένη από το φως.
Μόλις ανοιχτεί, αποθηκεύστε στους 4°C και χρησιμοποιήστε το εντός 6-8 εβδομάδων.
Συνθήκες αποστολής
Θερμοκρασία περιβάλλοντος
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο σε θερμοκρασία +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Αποφύγετε την κατάψυξη και τη συχνή θέρμανση στους +37°C, καθώς μειώνεται η ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο πάνω από τους 37°C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας, όπως συσκευές μικροκυμάτων.
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε την απαιτούμενη ποσότητα και θερμάνετέ το σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.
Σύνθεση
Κατηγορία
Συστατικά
Συγκέντρωση (mg/L)
Αμινοξέα
Γλυκίνη
30.00
L-αργινίνη HCl
84.00
L-Κυστίνη 2 HCl
62.57
L-Γλουταμίνη
584.00
L-ιστιδίνη HClH2O
42.00
L-Ισολευκίνη
105.00
L-λευκίνη
105.00
L-Λυσίνη HCl
146.00
L-μεθειονίνη
30.00
L-Φενυλαλανίνη
66.00
L-Σερίνη
42.00
L-Θρεονίνη
95.00
L-Τρυπτοφάνη
16.00
L-Τυροσίνη 2 Na 2H2O
103.79
L-Βαλίνη
94.00
Βιταμίνες
Χλωριούχος χολίνη
4.00
Παντοθενικό D-ασβέστιο
4.00
Φολικό οξύ
4.00
myo-Ινοσιτόλη
7.20
Νικοτιναμίδιο
4.00
Πυριδοξαλικό HCl
4.00
Ριβοφλαβίνη
0.40
Θειαμίνη HCl
4.00
Ανόργανα άλατα
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Άλλα συστατικά
D-γλυκόζη
4500.00
Κόκκινη φαινόλη Αλάτι νατρίου
15.90
Πυρουβικό νάτριο
110.00
Τι περιέχει το EMEM
Το EMEM είναι μια τροποποιημένη έκδοση του ελάχιστου απαραίτητου μέσου Eagle, που περιέχει Earle's Balanced Salt Solution, μη απαραίτητα αμινοξέα, L-γλουταμίνη, πυρουβικό νάτριο και διττανθρακικό νάτριο. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι αυτό το επίπεδο διττανθρακικού νατρίου προορίζεται για χρήση σε αέρα με 5% CO2. Για να διατηρηθεί η αποτελεσματικότητά του, συνιστάται η αποθήκευση του μέσου στους 2°C έως 8°C στο σκοτάδι όταν δεν χρησιμοποιείται.
Για ποιο λόγο χρησιμοποιείται το EMEM
Το Eagle's minimal essential medium (EMEM) είναι ένα μέσο κυτταροκαλλιέργειας που μπορεί να διατηρήσει κύτταρα σε καλλιέργεια ιστών. Το μέσο περιέχει υψηλότερες συγκεντρώσεις αμινοξέων, επιτρέποντας την ακριβέστερη προσέγγιση της πρωτεϊνικής σύνθεσης των καλλιεργούμενων κυττάρων θηλαστικών. Το EMEM μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την καλλιέργεια διαφόρων κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων ινοβλαστών, κυττάρων ανθρώπινης καρκινικής κυτταρικής γραμμής του ήπατος (HepG2) και ανθρώπινων κυττάρων αστροκυττάρων που προέρχονται από εμβρυϊκούς προγονικούς εγκεφάλους (PDA). Συνήθως χρησιμοποιείται παρουσία εμβρυϊκού ορού βοοειδών (FBS), ορών μοσχαριού ή αλόγου.
Πώς διαφέρει το EMEM από άλλα μέσα καλλιέργειας κυττάρων
Ενώ το EMEM και το μέσο Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) μοιράζονται κάποιες ομοιότητες, διαφέρουν επίσης. Και τα δύο μέσα στερούνται πρωτεΐνης και περιέχουν τα αμινοξέα, τα άλατα, τη γλυκόζη και τις βιταμίνες που απαιτούνται για την παροχή ενέργειας σε ένα κύτταρο και τη διατήρησή του σε καλλιέργεια ιστών. Ωστόσο, το σκεύασμα DMEM έχει τροποποιηθεί ώστε να περιέχει έως και τέσσερις φορές περισσότερες βιταμίνες και αμινοξέα και δύο έως τέσσερις φορές περισσότερη γλυκόζη από το EMEM. Αξίζει να σημειωθεί ότι η EMEM είναι επίσης διαφορετική από το αρχικό σκεύασμα MEM.
Ποιοτικός έλεγχος
Αποστειρωμένο και φιλτραρισμένο
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Φυλάσσεται στους +2°C έως +8°C, προστατευμένη από το φως.
Μόλις ανοιχτεί, αποθηκεύστε στους 4°C και χρησιμοποιήστε το εντός 6-8 εβδομάδων.
Συνθήκες αποστολής
Θερμοκρασία περιβάλλοντος
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο σε θερμοκρασία +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Αποφύγετε την κατάψυξη και τη συχνή θέρμανση στους +37°C, καθώς μειώνεται η ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο πάνω από τους 37°C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας, όπως συσκευές μικροκυμάτων.
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε την απαιτούμενη ποσότητα και θερμάνετέ το σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.
Σύνθεση
Κατηγορία
Συστατικά
Συγκέντρωση (mg/L)
Αμινοξέα
L-αργινίνη HCl
126.00
L-Κυστίνη 2 HCl
31.30
L-Γλουταμίνη
292.00
L-ιστιδίνη HClH2O
42.00
L-Ισολευκίνη
52.00
L-λευκίνη
52.00
L-Λυσίνη HCl
72.50
L-μεθειονίνη
15.00
L-Φενυλαλανίνη
32.00
L-θρεονίνη
48.00
L-Τρυπτοφάνη
10.00
L-Τυροσίνη 2 Na 2H2O
51.90
L-Βαλίνη
46.00
Βιταμίνες
Χλωριούχο χολίνη
1.00
Βιταμίνες
Παντοθενικό D-ασβέστιο
1.00
Φολικό οξύ
1.00
myo-Ινοσιτόλη
2.00
Νικοτιναμίδιο
1.00
Πυριδοξαλικό HCl
1.00
Ριβοφλαβίνη
0.10
Θειαμίνη HCl
1.00
Ανόργανα άλατα
CaCl2 2H2O
265.00
Ανόργανα άλατα
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Άλλα συστατικά
D-γλυκόζη
1000.00
Άλλα συστατικά
Αλάτι νατρίου κόκκινης φαινόλης
11.00
Ένα από τα αξιοσημείωτα πλεονεκτήματά του είναι η ικανότητα υποστήριξης της ανάπτυξης των κυττάρων χωρίς την ανάγκη συμπλήρωσης ορού. Αυτό εξαλείφει τις πιθανές παρεμβολές που προκαλούνται από τα συστατικά του ορού, εξασφαλίζοντας συνεπή και αξιόπιστα πειραματικά αποτελέσματα. Παρέχοντας ένα περιβάλλον καλλιέργειας χωρίς ορό, το Ham's F-12 Medium προσφέρει στους ερευνητές μεγαλύτερο έλεγχο των ερευνών τους.
Ένα άλλο βασικό χαρακτηριστικό του Ham's F-12 Medium είναι η καταλληλότητά του για επιμερισμό μεμονωμένων κυττάρων. Αυτό το καθιστά εξαιρετική επιλογή για μια ποικιλία κυτταρικών σειρών, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων CHO, των κυττάρων του πνεύμονα και των κυττάρων L του ποντικού. Η βελτιστοποιημένη σύνθεση θρεπτικών συστατικών του μέσου διευκολύνει την αποτελεσματική προσκόλληση και ανάπτυξη μεμονωμένων κυττάρων, επιτρέποντας τη δημιουργία ομοιογενών κυτταρικών καλλιεργειών με βελτιωμένη αναπαραγωγιμότητα.
Επιπλέον, το Ham's F-12 Medium έχει κερδίσει την αναγνώριση ως το προτιμώμενο μέσο για τη δοκιμασία κλωνικής τοξικότητας (CTA). Η δοκιμασία αυτή διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην αξιολόγηση των κυτταροτοξικών επιδράσεων ουσιών στα κύτταρα. Χρησιμοποιώντας το Ham's F-12 Medium στην CTA, οι ερευνητές μπορούν να αξιολογήσουν με ακρίβεια την επίδραση διαφόρων ενώσεων ή θεραπειών σε μεμονωμένα κύτταρα, παρέχοντας πολύτιμες πληροφορίες για το τοξικολογικό προφίλ.
Ποιοτικός έλεγχος
pH = 7,2 +/
- 0,02 στους 20-25°C.
Κάθε παρτίδα έχει ελεγχθεί για στειρότητα και απουσία μυκοπλάσματος και βακτηρίων.
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο στους +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Η κατάψυξη και η θέρμανση έως τους +37° C ελαχιστοποιούν την ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο σε θερμοκρασία άνω των 37° C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας (π.χ. συσκευές μικροκυμάτων).
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε αυτή την ποσότητα από τη φιάλη και ζεστάνετε τη σε θερμοκρασία δωματίου.
Η διάρκεια ζωής για οποιοδήποτε μέσο εκτός από το βασικό μέσο είναι 8 εβδομάδες από την ημερομηνία παρασκευής.
Σύνθεση
Συστατικά
mg/L
Ανόργανα άλατα
Χλωριούχο ασβέστιο x 2H2O
44,00
Θειικός χαλκός(ΙΙ) x 5H2O
0,00
Θειικός σίδηρος (ΙΙ) x 7H2O
0,83
Χλωριούχο μαγνήσιο x 6H2O
122,00
Χλωριούχο κάλιο
223,65
Χλωριούχο νάτριο
7599,00
φωσφορικό δινάτριοάνυδρο
142,04
Θειικός ψευδάργυρος x 7H2O
0,86
Άλλα συστατικά
D(+)-γλυκόζη άνυδρη
1801,60
Υποξανθίνη
4,08
Λινολεϊκό οξύ
0,08
DL-α-λιποϊκό οξύ
0,21
Κόκκινη φαινόλη
1,20
Πουτρεσκίνη x 2HCl
0,16
Πυρουβικό νάτριο
110,00
Θυµιδίνη
0,73
NaHCO3
1176,00
Αμινοξέα
L-αλανίνη
8,91
L-αργινίνη x HCl
210,70
L-ασπαραγίνη x H2O
15,01
L-ασπαρτικό οξύ
13,31
L-κυστεΐνη x HCl x H2O
35,12
L-αλανυλο-L-γλουταμίνη
217,30
L-γλουταμινικό οξύ
14,71
Γλυκίνη
7,51
L-ιστιδίνη x HCl x H2O
20,96
L-ισολευκίνη
3,94
L-λευκίνη
13,12
L-Λυσίνη x HCl
36,54
L-μεθειονίνη
4,48
L-φαινυλαλανίνη
4,96
L-προλίνη
34,53
L-σερίνη
10,51
L-θρεονίνη
11,91
L-Τρυπτοφάνη
2,04
L-τυροσίνη
5,44
L-Βαλίνη
11,71
Βιταμίνες
D(+)-Βιοτίνη
0,01
D-παντοθενικό ασβέστιο
0,24
Χλωριούχο χολίνη
13,96
Φολικό οξύ
1,32
μυο-ινοσιτόλη
18,02
Νικοτιναμίδιο
0,04
Πυριδοξίνη x HCl
0,06
Ριβοφλαβίνη
0,04
Θειαμίνη x HCl
0,34
Βιταμίνη Β12
1,36
Αυτό το μοναδικό σκεύασμα συνδυάζει Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) και Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) σε ακριβή αναλογία 1:1. Η προσθήκη L-γλουταμίνης ενισχύει περαιτέρω τη σύνθεσή του.
Το DMEM, που προέρχεται από το Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), προσφέρει αυξημένη συγκέντρωση αμινοξέων και βιταμινών σε σύγκριση με τον προκάτοχό του. Αντίθετα, το Ham's F-12 βασίζεται στο μέσο Ham's F-10, παρέχοντας ένα συμπληρωματικό σύνολο βασικών συστατικών.
Για την υποστήριξη της βέλτιστης ανάπτυξης των κυττάρων, είναι κοινή πρακτική να συμπληρώνεται το DMEM:Ham's F12 με FBS σε τυπική συγκέντρωση 5-10%. Η προσθήκη αυτή είναι απαραίτητη, καθώς το μέσο στερείται αυξητικών ορμονών, λιπιδίων και πρωτεϊνών ζωτικής σημασίας για την κυτταρική ανάπτυξη.
Η DMEM:Ham's F12 ενσωματώνει ένα ρυθμιστικό σύστημα pH και συχνά συμπληρώνεται με κόκκινο της φαινόλης, έναν δείκτη pH. Τα καλλιεργούμενα κύτταρα σε DMEM:Ham's F12 ή σε οποιοδήποτε μέσο που χρησιμοποιεί το ρυθμιστικό σύστημα διττανθρακικών, απαιτούν ελεγχόμενο περιβάλλον CO2 5-10% για τη διατήρηση των κατάλληλων επιπέδων pH.
Ποιοτικός έλεγχος
Αποστειρωμένο και φιλτραρισμένο
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Φυλάσσεται στους +2°C έως +8°C, προστατευμένο από το φως.
Μόλις ανοιχτεί, αποθηκεύστε στους 4°C και χρησιμοποιήστε το εντός 6-8 εβδομάδων.
Συνθήκες αποστολής
Θερμοκρασία περιβάλλοντος
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο σε θερμοκρασία +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Αποφύγετε την κατάψυξη και τη συχνή θέρμανση στους +37°C, καθώς μειώνεται η ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο πάνω από τους 37°C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας, όπως συσκευές μικροκυμάτων.
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε την απαιτούμενη ποσότητα και θερμάνετέ το σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.
Σύνθεση
Κατηγορία
Συστατικά
Συγκέντρωση (mg/L)
Αμινοξέα
Γλυκίνη
18.75
L-αλανίνη
4.45
L-αργινίνη HCl
147.50
L-ασπαραγίνη H₂O
7.50
L-ασπαρτικό οξύ
6.65
L-κυστεΐνη HCl H₂O
17.56
L-Κυστίνη 2 HCl
31.29
L-γλουταμινικό οξύ
7.35
L-Γλουταμίνη
365.00
L-ιστιδίνη HCl H₂O
31.48
L-Ισολευκίνη
54.47
L-λευκίνη
59.05
L-Λυσίνη HCl
91.25
L-μεθειονίνη
17.24
L-φαινυλαλανίνη
35.48
L-προλίνη
17.25
L-Σερίνη
26.25
L-θρεονίνη
53.45
L-Τρυπτοφάνη
9.02
L-Τυροσίνη Δισόξινο άλας
48.10
L-βαλίνη
52.85
Βιταμίνες
D-Biotin
0.0035
Χλωριούχος χολίνη
8.98
Παντοθενικό D-ασβέστιο
2.24
Φολικό οξύ
2.66
myo-Ινοσιτόλη
12.60
Νικοτιναμίδιο
2.02
Πυριδοξίνη HCl
0.031
Πυριδοξαλικό HCl
2.00
Ριβοφλαβίνη
0.219
Θειαμίνη HCl
2.17
Βιταμίνη Β12
0.68
Ανόργανα άλατα
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Άλλα συστατικά
D-γλυκόζη
3151.00
Υποξανθίνη
2.40
HEPES
3574.50
Λινολεϊκό οξύ
0.042
Λιποϊκό οξύ
0.105
Κόκκινο νατριούχο άλας φαινόλης
8.63
Πουτρεσκίνη 2 HCl
0.081
Πυρουβικό νάτριο
55.00
Θυµιδίνη
0.365
Το μέσο Ham's F-12K (Kaighn's) Medium είναι προσεκτικά διαμορφωμένο για τη βελτιστοποίηση των συνθηκών καλλιέργειας κυττάρων. Διαθέτει εμπλουτισμένη σύνθεση, παρέχοντας αυξημένα επίπεδα βασικών συστατικών, όπως αμινοξέα και πυρουβικό νάτριο, καθώς και πρόσθετα στοιχεία, όπως πουτρεσκίνη, θυμιδίνη, υποξανθίνη και ψευδάργυρο. Αυτές οι προσθήκες επιτρέπουν στους ερευνητές να συμπληρώνουν το μέσο με ελάχιστο ορό ή καθορισμένα συστατικά για συγκεκριμένους κυτταρικούς τύπους, διευκολύνοντας ακριβείς πειραματικές συνθήκες.
Ειδικότερα, το μέσο Ham's F-12K (Kaighn's) δεν περιέχει πρωτεΐνες ή αυξητικούς παράγοντες. Κατά συνέπεια, η συμπλήρωση με αυξητικούς παράγοντες και ορό εμβρύου βοοειδών (FBS) είναι συχνά απαραίτητη, επιτρέποντας στους ερευνητές να προσαρμόσουν το μέσο στις απαιτήσεις των συγκεκριμένων κυτταρικών σειρών τους. Για βέλτιστη απόδοση, η συγκέντρωση του FBS πρέπει να βελτιστοποιείται προσεκτικά για κάθε κυτταρική σειρά, εξασφαλίζοντας τη βέλτιστη ανάπτυξη και λειτουργικότητα.
Για τη διατήρηση του φυσιολογικού pH, το μέσο Ham's F-12K (Kaighn's) χρησιμοποιεί ρυθμιστικό σύστημα διττανθρακικού νατρίου (2,5 g/L), καθιστώντας απαραίτητο ένα ελεγχόμενο περιβάλλον 5-10% CO2 κατά τη διάρκεια της καλλιέργειας. Αυτό διασφαλίζει ότι το pH του μέσου παραμένει εντός του ιδανικού εύρους για την ανάπτυξη και τη βιωσιμότητα των κυττάρων
Ποιοτικός έλεγχος
pH = 7,2 +/
- 0,02 στους 20-25°C.
Κάθε παρτίδα έχει ελεγχθεί για στειρότητα και απουσία μυκοπλάσματος και βακτηρίων.
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο στους +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Η κατάψυξη καθώς και η θέρμανση έως τους +37°C ελαχιστοποιούν την ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο σε θερμοκρασία άνω των 37°C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας (π.χ. συσκευές μικροκυμάτων).
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε αυτή την ποσότητα από τη φιάλη και ζεστάνετε τη σε θερμοκρασία δωματίου.
Η διάρκεια ζωής οποιουδήποτε μέσου εκτός από το βασικό μέσο είναι 8 εβδομάδες από την ημερομηνία παρασκευής.
Σύνθεση
Συστατικά
mg/L
Ανόργανα άλατα
Χλωριούχο ασβέστιο x 2H2O
135,24
Θειικός χαλκός(ΙΙ) x 5H2O
0,00
Θειικός σίδηρος (ΙΙ) x 7H2O
0,83
Χλωριούχο μαγνήσιο x 6H2O
105,72
Θειικό μαγνήσιο x 7H2O
394,49
Χλωριούχο κάλιο
283,29
Φωσφορικό διυδρογόνο κάλιο
58,52
Χλωριούχο νάτριο
7597,20
φωσφορικό δινατριούχο νάτριοάνυδρο
115,02
Θειικός ψευδάργυρος x 7H2O
0,14
Άλλα συστατικά
D(+)-γλυκόζη άνυδρη
1260,00
Υποξανθίνη
4,08
DL-α-λιποϊκό οξύ
0,21
Κόκκινη φαινόλη
3,00
Πουτρεσκίνη x 2HCl
0,32
Πυρουβικό νάτριο
220,00
NaHCO3
2500,00
Θυµιδίνη
0,73
Αμινοξέα
L-αλανίνη
17,82
L-αργινίνη x HCl
421,40
L-ασπαραγίνη x H2O
30,02
L-ασπαρτικό οξύ
26,62
L-κυστεΐνη x HCl x H2O
70,24
L-Γλουταμίνη
292,20
L-γλουταμινικό οξύ
29,42
Γλυκίνη
15,01
L-ιστιδίνη x HCl x H2O
41,92
L-ισολευκίνη
7,87
L-λευκίνη
26,24
L-Λυσίνη x HCl
73,04
L-μεθειονίνη
8,95
L-φαινυλαλανίνη
9,91
L-προλίνη
69,06
L-Σερίνη
21,02
L-θρεονίνη
23,82
L-Τρυπτοφάνη
4,08
L-τυροσίνη
10,87
L-Βαλίνη
23,42
Βιταμίνες
D(+)-Βιοτίνη
0,07
D-παντοθενικό ασβέστιο
0,48
Χλωριούχο χολίνη
13,96
Φολικό οξύ
1,32
μυο-ινοσιτόλη
18,02
Νικοτιναμίδιο
0,04
Πυριδοξίνη x HCl
0,06
Ριβοφλαβίνη
0,04
Θειαμίνη x HCl
0,34
Βιταμίνη Β12
1,36
- 0,02 στους 20-25 °C. Κάθε παρτίδα έχει ελεγχθεί για στειρότητα και απουσία μυκόπλασμα και βακτηρίων. Συντήρηση Φυλάσσεται στο ψυγείο σε θερμοκρασία +2°C έως +8°C, σε σκοτεινό μέρος. Η κατάψυξη και η θέρμανση σε θερμοκρασία +37°C μειώνουν την ποιότητα του προϊόντος. Μην θερμαίνετε το μέσο σε θερμοκρασία μεγαλύτερη από 37°C και μην χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας (π.χ. φούρνους μικροκυμάτων). Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε την ποσότητα αυτή από το μπουκάλι και θερμάνετε την σε θερμοκρασία δωματίου. Η διάρκεια ζωής για όλα τα μέσα εκτός από το βασικό μέσο είναι 6 έως 8 εβδομάδες από την ημερομηνία ανοίγματος. Σύνθεση Συστατικά mg/L Ανόργανα άλαταΧλωριούχο ασβέστιο x 2H2O132,0 Θειικό μαγνήσιο97,67 Χλωριούχο κάλιο400 Χλωριούχο νάτριο6.460 Υδρογενικό φωσφορικό νάτριο (άνυδρο)504,00 Άλλα συστατικάD(+)-Γλυκόζη (άνυδρη)3.000 Γλουταθειόνη (αναγμένη)0 Πεπτόνη κρέατος600 Φαινόλη κόκκινη νάτριο άλας11 ΑμινοξέαL-αλανίνη13,36 L-αργινίνη x HCl42,14 L-ασπαραγίνη x H2O45,03 L-ασπαρτικό οξύ19,97 L-Κυστεΐνη x HCl x H2O31,75 L-γλουταμίνη (σταθερή)219,15 L-γλουταμινικό οξύ22,07 Γλυκίνη7,5 L-ιστιδίνη x HCl x H2O20,96 L-υδροξυπρολίνη19,67 L-ισολευκίνη39,36 L-Λευκίνη39,36 L-Λυσίνη x HCl36,54 L-Μεθειονίνη14,92 L-φαινυλαλανίνη16,52 L-προλίνη17,27 L-σερίνη26,28 L-Θρεονίνη17,87 L-Τρυπτοφάνη3,06 Δισόξινο άλας L-τυροσίνης26,10 L-βαλίνη17,57 Βιταμίνεςp-αμινοβενζοϊκό οξύ1 Ασκορβικό οξύ0,56 D(+)-Βιοτίνη0 D-παντοθενικό ασβέστιο0 Χλωριούχο χολίνη5 Φολικό οξύ10 Μυο-ινοσιτόλη36 Νικοτιναμίδιο0 Νικοτινικό οξύ0 Πυριδοξάλη HCl0,5 Πυριδοξίνη HCl0,5 Ριβοφλαβίνη0 Θειαμίνη HCl0 Βιταμίνη Β122,0
Το IMDM είναι κατάλληλο για ταχέως πολλαπλασιαζόμενες καλλιέργειες κυττάρων υψηλής πυκνότητας, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων Jurkat, COS-7 και μακροφάγων. Οι διάφορες τροποποιήσεις του IMDM που διατίθενται για μια σειρά εφαρμογών κυτταροκαλλιέργειας μπορούν να βρεθούν χρησιμοποιώντας το εργαλείο επιλογής μέσων. Τα υγρά μέσα παρέχουν βασικά θρεπτικά συστατικά για όλες τις εφαρμογές κυτταροκαλλιέργειας. Κάθε ένα από τα υψηλής ποιότητας μέσα κυτταροκαλλιέργειας που διαθέτουμε παρασκευάζεται σύμφωνα με τον αρχικά δημοσιευμένο τύπο ή τις τροποποιήσεις που είναι απαραίτητες για τη συνεπή απόδοση και σταθερότητα του μέσου καλλιέργειας.
IMDM έναντι DMEM
Το IMDM περιέχει νιτρικό κάλιο αντί για νιτρικό σίδηρο και HEPES και πυρουβικό νάτριο. Τα πρόσθετα συστατικά στο IMDM το καθιστούν καταλληλότερο για εξειδικευμένους τύπους κυττάρων και ειδικές εφαρμογές από ό,τι το DMEM.
IMDM έναντι RPMI
Το IMDM και το RPMI έχουν διαφορετικές συνθέσεις που μπορεί να έχουν σημασία για τη διέγερση με PMA/ιονομυκίνη. Μια σημαντική διαφορά είναι η συγκέντρωση του Ca2+. Ενώ το RPMI περιέχει 0,42 mM Ca2+, το IMDM περιέχει 1,49 mM.
Ποιοτικός έλεγχος
pH = 7,2 +/
- 0,02 στους 20-25°C.
Κάθε παρτίδα έχει ελεγχθεί για στειρότητα και απουσία μυκοπλάσματος και βακτηρίων.
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο στους +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Η κατάψυξη και η θέρμανση έως τους +37° C ελαχιστοποιούν την ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο σε θερμοκρασία άνω των 37° C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας (π.χ. συσκευές μικροκυμάτων).
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε αυτή την ποσότητα από τη φιάλη και ζεστάνετε τη σε θερμοκρασία δωματίου.
Η διάρκεια ζωής για οποιοδήποτε μέσο εκτός από το βασικό μέσο είναι 8 εβδομάδες από την ημερομηνία παρασκευής.
Σύνθεση
Συστατικά
mg/L
Ανόργανα άλατα
Χλωριούχο ασβέστιο x 2 H2O
219,00
Χλωριούχο κάλιο
330,00
Νιτρικό κάλιο
0.076
Θειικό μαγνήσιο άνυδρο
97,73
Χλωριούχο νάτριο
4,505.00
Φωσφορικό διυδρογόνο νάτριο άνυδρο
109,00
Σεληνιούχο νάτριο
0,02
Άλλα συστατικά
D(+)-γλυκόζη άνυδρη
4,500.00
HEPES
5,958.00
Πυρουβικό νάτριο
110,00
Κόκκινη φαινόλη
15,00
Αμινοξέα
L-αλανίνη
25,00
L-αργινίνη x HCl
84,00
L-ασπαραγίνη x H2O
25,00
L-ασπαρτικό οξύ
30,00
L-Κυστίνη x 2HCl
91,24
L-Γλουταμίνη
584,00
L-γλουταμινικό οξύ
75,00
Γλυκίνη
30,00
L-ιστιδίνη x HCl x H2O
42,00
L-ισολευκίνη
104,80
L-λευκίνη
104,80
L-Λυσίνη x HCl
146,20
L-μεθειονίνη
30,00
L-Φενυλαλανίνη
66,00
L-προλίνη
40,00
L-Σερίνη
42,00
L-Θρεονίνη
95,20
L-Τρυπτοφάνη
16,00
L-Τυροσίνη x 2Na
104,20
L-Βαλίνη
93,60
Βιταμίνες
D(+)-Βιοτίνη
0.013
D-παντοθενικό ασβέστιο
4,00
Χλωριούχος χολίνη
4,00
Φολικό οξύ
4,00
myo-Ινοσιτόλη
7,20
Αρχικά σχεδιασμένο για την υποστήριξη της ανάπτυξης ανθρώπινων λευχαιμικών κυττάρων τόσο σε καλλιέργειες εναιωρήματος όσο και σε μονοστρωματικές καλλιέργειες, το μέσο RPMI 1640 έχει εξελιχθεί μέσω τροποποιήσεων από ερευνητές και εμπορικούς προμηθευτές ώστε να καταστεί κατάλληλο για ένα ευρύ φάσμα κυττάρων θηλαστικών. Είναι εξαιρετικά συμβατό με κυτταρικές σειρές όπως HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, αστροκύτταρα και καρκινώματα.
Το μέσο RPMI 1640 Medium ξεχωρίζει από άλλα μέσα κυτταροκαλλιέργειας λόγω της μοναδικής του σύνθεσης. Περιέχει σημαντική ποσότητα φωσφορικών αλάτων, αμινοξέων και βιταμινών. Ειδικότερα, περιλαμβάνει βιοτίνη, βιταμίνη Β12 και PABA, που απουσιάζουν από το Minimal Essential Medium του Eagle ή το Dulbecco's Modified Eagle Medium. Επιπλέον, το μέσο RPMI 1640 παρουσιάζει σημαντικά αυξημένες συγκεντρώσεις βιταμινών ινοσιτόλης και χολίνης. Ωστόσο, δεν περιέχει πρωτεΐνες, λιπίδια ή αυξητικούς παράγοντες. Κατά συνέπεια, απαιτείται συνήθως η συμπλήρωση με 10% εμβρυϊκό ορό βοοειδών (FBS) για την παροχή βέλτιστων συνθηκών για την ανάπτυξη των κυττάρων.
Το ρυθμιστικό σύστημα του RPMI 1640 Medium βασίζεται στο διττανθρακικό νάτριο και απαιτεί ένα περιβάλλον 5-10% CO2 για τη διατήρηση ενός φυσιολογικά κατάλληλου pH. Η συμπερίληψη του αναγωγικού παράγοντα γλουταθειόνη διακρίνει περαιτέρω αυτό το μέσο από άλλα.
Ποιοτικός έλεγχος
Αποστειρωμένο και φιλτραρισμένο
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Φυλάσσεται στους +2°C έως +8°C, προστατευμένο από το φως.
Μόλις ανοιχτεί, αποθηκεύστε στους 4°C και χρησιμοποιήστε το εντός 6-8 εβδομάδων.
Συνθήκες αποστολής
Θερμοκρασία περιβάλλοντος
Συντήρηση
Διατηρείται στο ψυγείο στους +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Αποφύγετε την κατάψυξη και τη συχνή θέρμανση στους +37°C, καθώς μειώνεται η ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο πάνω από τους 37°C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας, όπως συσκευές μικροκυμάτων.
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε την απαιτούμενη ποσότητα και θερμάνετέ το σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.
Σύνθεση
Κατηγορία
Συστατικά
Συγκέντρωση (mg/L)
Αμινοξέα
Γλυκίνη
10.00
L-αλανυλο-L-γλουταμίνη
434.40
L-αργινίνη
200.00
L-ασπαραγίνηH2O
56.82
L-ασπαρτικό οξύ
20.00
L-Κυστίνη 2HCl
65.20
L-γλουταμινικό οξύ
20.00
L-ιστιδίνη HClH2O
20.27
L-Υδροξυ-L-προλίνη
20.00
L-Ισολευκίνη
50.00
L-λευκίνη
50.00
L-Λυσίνη HCl
40.00
L-μεθειονίνη
15.00
L-Φενυλαλανίνη
15.00
L-προλίνη
20.00
L-σερίνη
30.00
L-θρεονίνη
20.00
L-Τρυπτοφάνη
5.00
L-Τυροσίνη 2Na 2H2O
28.83
L-Βαλίνη
20.00
Βιταμίνες
p-αμινοβενζοϊκό οξύ
1.00
D-Biotin
0.20
Χλωριούχο χολίνη
3.00
Παντοθενικό D-ασβέστιο
0.25
Φολικό οξύ
1.00
myo-Ινοσιτόλη
35.00
Νικοτιναμίδιο
1.00
Πυριδοξίνη HCl
1.00
Ριβοφλαβίνη
0.20
Θειαμίνη HCl
1.00
Βιταμίνη Β12
0.005
Ανόργανα άλατα
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Άλλα συστατικά
D-γλυκόζη
2000.00
L-γλουταθειόνη μειωμένη
1.00
Κόκκινο νατριούχο άλας φαινόλης
5.30