Μέσα κυτταρικής καλλιέργειας: Μια γενική επισκόπηση

Στον τομέα των βιοεπιστημών, μία από τις σημαντικότερες μεθοδολογίες είναι η κυτταρική καλλιέργεια. Με τον όρο «κυτταρική καλλιέργεια» εννοείται η αφαίρεση κυττάρων, ιστών ή οργάνων από ζώο ή φυτό και η επακόλουθη εμφύτευσή τους σε ένα τεχνητό περιβάλλον που ευνοεί την επιβίωσή τους και/ή την ανάπτυξή τους. Οι βασικές περιβαλλοντικές απαιτήσεις για τη βέλτιστη ανάπτυξη των κυττάρων είναι η ελεγχόμενη θερμοκρασία, ένα υπόστρωμα για την προσκόλληση των κυττάρων, ένα κατάλληλο μέσο ανάπτυξης και ένας επωαστήρας που διατηρεί το βέλτιστο pH και την οσμωτικότητα. Τα κύτταρα πρέπει να διαθέτουν αυτές τις συνθήκες προκειμένου να αναπτυχθούν στο μέγιστο των δυνατοτήτων τους.

Η επιλογή ενός κατάλληλου μέσου ανάπτυξης για την καλλιέργεια in vitro αποτελεί το στάδιο της κυτταρικής καλλιέργειας που είναι ταυτόχρονα το πιο κρίσιμο και το πιο ζωτικό. Ένα μέσο ανάπτυξης, γνωστό και ως μέσο καλλιέργειας, είναι ένα υγρό ή πήκτωμα που έχει παρασκευαστεί για να ενθαρρύνει την ανάπτυξη οργανισμών σε μικροσκοπική, κυτταρική ή φυτική κλίμακα. Το μέσο που χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια κυττάρων συχνά περιέχει επαρκή ποσότητα ενέργειας και ουσιών που ρυθμίζουν τον κυτταρικό κύκλο. Τα κύρια συστατικά ενός μέσου καλλιέργειας περιλαμβάνουν αμινοξέα, βιταμίνες, ανόργανα άλατα, γλυκόζη και ορό. Ο ορός προστίθεται στο μέσο επειδή λειτουργεί ως πηγή αυξητικών παραγόντων, ορμονών και παραγόντων προσκόλλησης. Εκτός από την παροχή θρεπτικών συστατικών, το μέσο συμβάλλει επίσης στη διατήρηση των επιπέδων pH και οσμωτικότητας.

Τύποι θρεπτικών μέσων που χρησιμοποιούνται στην κυτταρική καλλιέργεια

Τόσο τα ανθρώπινα όσο και τα ζωικά κύτταρα μπορούν να αναπτυχθούν είτε σε τεχνητό ή συνθετικό μέσο είτε σε εντελώς φυσικό μέσο που συμπληρώνεται με φυσικά στοιχεία. Στη συνέχεια, θα σας παρουσιάσουμε μια επισκόπηση των διαφορετικών τύπων μέσων που διατίθενται σήμερα.

Φυσικά μέσα

Στα φυσικά μέσα μπορούν να βρεθούν μόνο βιολογικά υγρά που υπάρχουν στη φυσική τους κατάσταση. Τα φυσικά μέσα είναι πολύ χρήσιμα και εύκολα για την καλλιέργεια μιας ευρείας ποικιλίας τύπων ζωικών κυττάρων. Η έλλειψη κατανόησης των ακριβών συστατικών που συνθέτουν τα φυσικά μέσα είναι ο κύριος παράγοντας που συμβάλλει στη χαμηλή επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται με τη χρήση φυσικών μέσων.

Τεχνητά μέσα

Η παρασκευή τεχνητών ή συνθετικών μέσων περιλαμβάνει την προσθήκη θρεπτικών συστατικών (τόσο οργανικών όσο και ανόργανων), πρωτεϊνών ορού, υδατανθράκων, συμπαραγόντων, βιταμινών και αλάτων, καθώς και αερίων φάσεων O₂ και CO₂ [1].

Έχουν αναπτυχθεί διάφοροι τύποι τεχνητών θρεπτικών μέσων προκειμένου να εκπληρώσουν μία ή περισσότερες από τις ακόλουθες λειτουργίες: 1) Άμεση επιβίωση (ένα ισορροπημένο αλατούχο διάλυμα με ακριβές pH και οσμωτική πίεση). 2) Παρατεταμένη επιβίωση (ένα ισορροπημένο αλατούχο διάλυμα συμπληρωμένο με διαφορετικές συνθέσεις οργανικών χημικών ουσιών και/ή ορού). 3) Απεριόριστη ανάπτυξη. 4) Εξειδικευμένες λειτουργίες.

Υπάρχουν τέσσερις διακριτές κατηγορίες τεχνητών μέσων:

Μέσα που περιέχουν ορό

Το πιο συνηθισμένο είδος συμπληρώματος που συναντάται στα μέσα που χρησιμοποιούνται για την καλλιέργεια ζωικών κυττάρων είναι ο εμβρυϊκός βοοειδής ορός. Προστίθεται στο μέσο καλλιέργειας ως συμπλήρωμα χαμηλού κόστους, προκειμένου να επιτευχθούν οι βέλτιστες δυνατές συνθήκες ανάπτυξης. Εκτός από το ότι λειτουργεί ως μεταφορέας ή χηλικός παράγοντας για θρεπτικά συστατικά που είναι ασταθή ή αδιάλυτα στο νερό, ορμόνες και αυξητικούς παράγοντες, αναστολείς πρωτεασών και άλλες ουσίες, ο ορός δεσμεύει και εξουδετερώνει επίσης επιβλαβή μόρια.

Μέσο χωρίς ορό

Η παρουσία ορού στα μέσα καλλιέργειας παρουσιάζει μια σειρά μειονεκτημάτων και ενδέχεται να προκαλέσει σημαντικά σφάλματα στην ερμηνεία των αποτελεσμάτων στην ανοσολογική έρευνα [2, 3]. Έχουν δημιουργηθεί διάφορα μέσα καλλιέργειας χωρίς ορό [4, 5]. Τα μέσα αυτά γενικά έχουν σχεδιαστεί ειδικά για να υποστηρίζουν την καλλιέργεια ενός μόνο τύπου κυττάρων, όπως τα Knockout Serum Replacement και Knockout DMEM της Thermo Fisher Scientific, καθώς και το μέσο mTESR της Stem Cell Technologies [6], για βλαστικά κύτταρα [7].

Επιπλέον, αυτά τα μέσα καλλιέργειας περιέχουν καθορισμένες ποσότητες καθαρισμένων αυξητικών παραγόντων, λιποπρωτεϊνών και άλλων πρωτεϊνών, οι οποίες κατά τα άλλα παρέχονται συνήθως από τον ορό [8]. Αυτά τα μέσα καλλιέργειας αναφέρονται συχνά ως «καθορισμένα μέσα καλλιέργειας», καθώς τα συστατικά από τα οποία αποτελούνται είναι καλά κατανοητά.

Χημικά καθορισμένα μέσα καλλιέργειας

Αυτά τα μέσα περιλαμβάνουν εξαιρετικά καθαρά ανόργανα και οργανικά συστατικά που δεν έχουν μολυνθεί από κανενός είδους μόλυνση. Μπορούν επίσης να περιλαμβάνουν προσθήκες καθαρών πρωτεϊνών, όπως αυξητικοί παράγοντες.

 Η γενετική τροποποίηση βακτηρίων ή ζυμομυκήτων, σε συνδυασμό με την προσθήκη συγκεκριμένων λιπαρών οξέων, βιταμινών, χοληστερόλης και αμινοξέων, οδηγεί στην παραγωγή των συστατικών τους [9].

Μέσα χωρίς πρωτεΐνες

Τα μέσα χωρίς πρωτεΐνες είναι εκείνα που δεν περιέχουν καθόλου πρωτεΐνες, αλλά μόνο μη πρωτεϊνικά στοιχεία. Σε σύγκριση με τα μέσα στα οποία έχει προστεθεί ορός, η χρήση μέσων χωρίς προσθήκη πρωτεΐνης προάγει τον μεγαλύτερο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την έκφραση πρωτεϊνών και διευκολύνει τον καθαρισμό οποιουδήποτε προϊόντος παράγεται σε μια επακόλουθη διαδικασία [10-12]. Η πρωτεΐνη δεν περιλαμβάνεται σε σκευάσματα όπως το MEM και το RPMI-1640. Ωστόσο, μπορεί να χορηγηθεί συμπλήρωμα πρωτεΐνης, εάν αυτό κριθεί απαραίτητο.

Μέσα καλλιέργειας και τα βασικά συστατικά τους

Τα εμπορικά μέσα καλλιέργειας διατίθενται σε μορφή σκόνης ή υγρού και συχνά περιλαμβάνουν ποικιλία θρεπτικών συστατικών, όπως αμινοξέα, γλυκόζη, άλατα, βιταμίνες και άλλα συμπληρώματα διατροφής. 

Οι ανάγκες για αυτά τα συστατικά διαφέρουν για κάθε κυτταρική σειρά, και αυτές οι διαφορές ευθύνονται για τον μεγάλο αριθμό διαφορετικών συνθέσεων θρεπτικών μέσων. Κάθε συστατικό είναι υπεύθυνο για μια συγκεκριμένη λειτουργία, η οποία θα περιγραφεί στις ακόλουθες παραγράφους:

Συστήματα ρυθμιστικών διαλυμάτων

Για τη διατήρηση βέλτιστων συνθηκών ανάπτυξης, πρέπει να ελέγχεται το pH, κάτι που συχνά επιτυγχάνεται με ένα από τα δύο συστήματα ρυθμιστικών διαλυμάτων:

Φυσικό σύστημα ρυθμιστικού διαλύματος

Η αναλογία CO₂/H₂CO₃ στην ατμόσφαιρα είναι ίση με εκείνη του θρεπτικού μέσου, δημιουργώντας έναν φυσικό μηχανισμό ρυθμιστικού διαλύματος. Προκειμένου να διατηρηθεί ο φυσικός μηχανισμός ρυθμιστικού διαλύματος, οι καλλιέργειες πρέπει να διατηρούνται σε περιβάλλον αέρα με 5-10% CO₂, κάτι που επιτυγχάνεται συχνά με τη χρήση επωαστήρα CO₂. Ένα από τα μεγαλύτερα πλεονεκτήματα της χρήσης φυσικού ρυθμιστικού διαλύματος είναι το χαμηλό κόστος και η ασφάλειά του.

HEPES

Η χημική ρύθμιση του pH με τη χρήση του ζwitterion HEPES έχει μεγαλύτερη ρυθμιστική ικανότητα στο εύρος pH 7,2-7,4 και δεν απαιτεί ελεγχόμενο αεριώδες περιβάλλον. Για συγκεκριμένους τύπους κυττάρων, μια μεγαλύτερη δόση HEPES μπορεί να είναι επιβλαβής. Τα μέσα που περιέχουν HEPES είναι επίσης πολύ πιο ευαίσθητα στις φωτοτοξικές επιδράσεις του φθορισμού [13].

Φαινόλη Κόκκινη

Ο δείκτης pH «φαινόλη κόκκινη» περιλαμβάνεται συχνά στα εμπορικά διαθέσιμα καλλιεργητικά μέσα, επιτρέποντας τη συνεχή παρακολούθηση του pH. Καθώς τα κύτταρα πολλαπλασιάζονται, οι μεταβολίτες που παράγουν προκαλούν μεταβολή του pH και, κατά συνέπεια, αλλαγή χρώματος του μέσου. Το φαινόλη κόκκινο έχει διπλή επίδραση στο χρώμα του μέσου, καθιστώντας το κίτρινο σε όξινο pH και μωβ σε αλκαλικό pH. Το pH 7,4, η βέλτιστη τιμή για την κυτταρική καλλιέργεια, κάνει το μέσο να εμφανίζεται φθορίζον κόκκινο.

Ωστόσο, το φαινόλη κόκκινο παρουσιάζει ορισμένα μειονεκτήματα: Πρώτον, το φαινόλη κόκκινο είναι ικανό να μιμηθεί τη δράση ορισμένων στεροειδών ορμονών, κυρίως των οιστρογόνων [14]. Επομένως, κατά τη μελέτη κυττάρων ευαίσθητων στα οιστρογόνα, όπως ο ιστός του μαστού, συνιστάται η χρήση μέσου χωρίς φαινόλη κόκκινο. Η ισορροπία νατρίου-καλίου διαταράσσεται από την παρουσία φαινολικού κόκκινου σε διάφορες συνθέσεις χωρίς ορό. Η προσθήκη ορού ή ορμόνης της υπόφυσης βοοειδών στα μέσα καλλιέργειας μπορεί να αντισταθμίσει αυτό το φαινόμενο [15]. Τρίτον, η ανίχνευση σε πειράματα κυτταρομετρίας ροής παρεμποδίζεται από την παρουσία φαινολικού κόκκινου.

Ανόργανα άλατα

Τα μέσα που περιέχουν ανόργανα άλατα, όπως ιόντα νατρίου, καλίου και ασβεστίου, συμβάλλουν στη διατήρηση της οσμωτικής ισορροπίας και στη ρύθμιση του δυναμικού της μεμβράνης.

Αμινοξέα

Δεδομένου ότι τα αμινοξέα αποτελούν τα θεμελιώδη συστατικά των πρωτεϊνών, αποτελούν απαραίτητο συστατικό κάθε μέσου ανάπτυξης κυττάρων που έχει ποτέ σχεδιαστεί. Επειδή τα κύτταρα δεν είναι ικανά να παράγουν ορισμένα αμινοξέα από μόνα τους, είναι σημαντικό το μέσο καλλιέργειας να περιλαμβάνει απαραίτητα αμινοξέα. Είναι απαραίτητα για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, και η συγκέντρωση στην οποία υπάρχουν καθορίζει τη μέγιστη κυτταρική πυκνότητα που μπορεί να επιτευχθεί. Ειδικότερα, η L-γλουταμίνη, ένα απαραίτητο αμινοξύ, είναι ιδιαίτερα κρίσιμη.

Η L-γλουταμίνη λειτουργεί ως δευτερεύουσα πηγή ενέργειας για το μεταβολισμό και παρέχει άζωτο για την παραγωγή NAD, NADPH και νουκλεοτιδίων. Επειδή η L-γλουταμίνη είναι ένα ασταθές αμινοξύ που, με την πάροδο του χρόνου, μετατρέπεται σε μορφή που τα κύτταρα δεν μπορούν να αξιοποιήσουν, πρέπει να προστίθεται στο μέσο.

Επιπλέον, τα μη απαραίτητα αμινοξέα μπορούν να προστεθούν στο μέσο καλλιέργειας προκειμένου να αναπληρωθούν εκείνα που έχουν καταναλωθεί κατά τη διάρκεια της διαδικασίας ανάπτυξης. Η ανάπτυξη των κυττάρων ενισχύεται και η βιωσιμότητά τους αυξάνεται όταν το μέσο καλλιέργειας συμπληρώνεται με μη απαραίτητα αμινοξέα.

Υδατάνθρακες

Οι υδατάνθρακες υπό μορφή σακχάρων αποτελούν την κύρια πηγή ενέργειας. Πολλά από τα μέσα καλλιέργειας περιλαμβάνουν επίσης μαλτόζη και φρουκτόζη, εκτός από τα πιο συνηθισμένα σάκχαρα, τη γλυκόζη και τη γαλακτόζη.

Πρωτεΐνες και πεπτίδια

Η αλβουμίνη, η τρανσφερίνη και η ινονεκτίνη είναι οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες πρωτεΐνες και πεπτίδια. Έχουν ιδιαίτερη σημασία σε μέσα που δεν περιέχουν ορό. Η αλβουμίνη, η τρανσφερίνη, η απροτινίνη, η φετουΐνη και η ινονεκτίνη είναι μερικές από τις πρωτεΐνες που μπορούν να βρεθούν στον ορό, ο οποίος αποτελεί πλούσια πηγή πρωτεϊνών.

Η αλβουμίνη είναι η κύρια πρωτεΐνη που βρίσκεται στο αίμα και η λειτουργία της είναι να δεσμεύει και να μεταφέρει διάφορες ουσίες, όπως νερό, άλατα, ελεύθερα λιπαρά οξέα, ορμόνες και βιταμίνες, μεταξύ διαφορετικών οργάνων και κυττάρων. Η ικανότητα της αλβουμίνης να προσκολλάται σε χημικές ουσίες την καθιστά αποτελεσματική επιλογή για την απομάκρυνση επιβλαβών ενώσεων από το μέσο στο οποίο καλλιεργούνται τα κύτταρα.

Η απροτινίνη αποτελεί προστατευτικό παράγοντα στα συστήματα κυτταρικής καλλιέργειας, καθώς είναι σταθερή σε ουδέτερο και όξινο pH, καθώς και ανθεκτική σε υψηλές θερμοκρασίες και στην καταστροφή που μπορεί να προκαλέσουν τα πρωτεολυτικά ένζυμα. Είναι ικανή να αναστέλλει μια σειρά πρωτεασών σερίνης, συμπεριλαμβανομένης της τρυψίνης, μεταξύ άλλων.

Η φετουίνη είναι μια γλυκοπρωτεΐνη που μπορεί να ανιχνευθεί σε υψηλότερες συγκεντρώσεις στον ορό εμβρύων και νεογέννητων ζώων σε σύγκριση με τον ορό ενηλίκων. Επιπλέον, δρα ως αναστολέας των πρωτεασών της σερίνης. Η πρωτεΐνη ινονεκτίνη αποτελεί βασικό συστατικό στη διαδικασία της κυτταρικής προσκόλλησης. Η τρανσφερίνη είναι μια πρωτεΐνη που μεταφέρει σίδηρο και είναι υπεύθυνη για τη μεταφορά του σιδήρου στις κυτταρικές μεμβράνες.

Λιπαρά οξέα και λιπίδια

Διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στο μέσο χωρίς ορό όταν απουσιάζει ορός.

Βιταμίνες

Πολλές βιταμίνες είναι απαραίτητες για την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Οι βιταμίνες δεν μπορούν να παραχθούν σε επαρκείς ποσότητες από τα κύτταρα και, ως εκ τούτου, είναι απαραίτητες στην καλλιέργεια ιστών ως συμπληρώματα διατροφής.

Στην κυτταρική καλλιέργεια, ο ορός αποτελεί την κύρια πηγή βιταμινών· ωστόσο, τα μέσα καλλιέργειας εμπλουτίζονται επίσης με διάφορες βιταμίνες, ώστε να καταστούν κατάλληλα για έναν συγκεκριμένο τύπο κυττάρων. Συνήθως, οι βιταμίνες της ομάδας Β χρησιμοποιούνται για την τόνωση της ανάπτυξης.

Ιχνοστοιχεία

Χημικά στοιχεία όπως ο χαλκός, ο ψευδάργυρος, το σελήνιο και τα ενδιάμεσα τρικαρβοξυλικών οξέων είναι γνωστά ως ιχνοστοιχεία. Τα ιχνοστοιχεία προστίθενται συχνά σε μέσα που δεν περιέχουν ορό, προκειμένου να αντικαταστήσουν εκείνα που συνήθως υπάρχουν στον ορό. Αυτά τα στοιχεία είναι σημαντικά χημικά συστατικά που απαιτούνται για την υγιή ανάπτυξη των κυττάρων. Πολλές βιοχημικές αντιδράσεις εξαρτώνται από συγκεκριμένα μικροθρεπτικά συστατικά, όπως η ενζυμική δραστηριότητα.

Συμπληρώματα καλλιεργητικών μέσων

Το πλήρες μέσο ανάπτυξης που προτείνεται για ορισμένες κυτταρικές σειρές χρειάζεται επιπλέον συστατικά που απουσιάζουν από τα βασικά μέσα και τον ορό. Αυτά τα συμπληρώματα διατροφής υποστηρίζουν την κυτταρική ανάπτυξη και την κατάλληλη μεταβολική λειτουργία.

Αν και οι ορμόνες, οι αυξητικοί παράγοντες και τα μόρια σηματοδότησης είναι απαραίτητα για τον κατάλληλο πολλαπλασιασμό συγκεκριμένων κυτταρικών σειρών, πρέπει πάντα να λαμβάνονται οι ακόλουθες προφυλάξεις: Δεδομένου ότι η προσθήκη συμπληρωμάτων ενδέχεται να μεταβάλει την οσμωτικότητα του πλήρους μέσου ανάπτυξης, γεγονός που μπορεί να αναστείλει την ανάπτυξη των κυττάρων, συνιστάται πάντα να επαληθεύεται η οσμωτικότητα μετά την προσθήκη συμπληρωμάτων. Για την πλειονότητα των κυτταρικών σειρών, η βέλτιστη οσμωτικότητα κυμαίνεται μεταξύ 260 και 320 mOSM/kg.

Αντιβιοτικά

Τα αντιβιοτικά χρησιμοποιούνται συχνά για την αναστολή της ανάπτυξης βακτηριακών και μυκητιακών μολυσματικών παραγόντων [16], αν και δεν είναι απαραίτητα για την κυτταρική ανάπτυξη. Δεδομένου ότι τα αντιβιοτικά ενδέχεται να συγκαλύψουν τη μόλυνση από μυκόπλασμα και ανθεκτικά βακτήρια, η συστηματική χρήση τους δεν συνιστάται για την κυτταρική καλλιέργεια [17, 18].

Επιπλέον, τα αντιβιοτικά ενδέχεται να διαταράξουν το μεταβολισμό των υπερευαίσθητων κυττάρων. Χρησιμοποιούνται συχνά οι συνδυασμοί πενικιλλίνης-στρεπτομυκίνης που παράγονται από τις εταιρείες MilliporeSigma και Life Technologies. Η πλασμοκίνη έχει χρησιμοποιηθεί στην καλλιέργεια των κυτταρικών σειρών γλοιώματος TS603, TS516 και BT260 [19], και έχει αποδειχθεί αποτελεσματική στην εξάλειψη της μόλυνσης από μυκόπλασμα (20).

Ορός

Στον ορό υπάρχουν αλβουμίνες, αυξητικοί παράγοντες και αναστολείς ανάπτυξης. Ο ορός αποτελεί ένα από τα σημαντικότερα συστατικά του μέσου κυτταρικής καλλιέργειας, καθώς παρέχει αμινοξέα, πρωτεΐνες, βιταμίνες (ιδιαίτερα λιποδιαλυτές βιταμίνες όπως οι Α, D, Ε και Κ), υδατάνθρακες, λιπίδια, ορμόνες, αυξητικούς παράγοντες, ανόργανα άλατα και ιχνοστοιχεία.

Ο ορός που προέρχεται από έμβρυα και μοσχάρια χρησιμοποιείται συχνά για την προώθηση της ανάπτυξης των καλλιεργούμενων κυττάρων. Ο εμβρυϊκός ορός αποτελεί πλούσια πηγή αυξητικών παραγόντων και είναι κατάλληλος για την κλωνοποίηση κυττάρων και την ανάπτυξη ευαίσθητων κυττάρων. Λόγω των μειωμένων ικανοτήτων του στην προώθηση της ανάπτυξης, ο ορός μοσχαριού χρησιμοποιείται σε πειράματα αναστολής επαφής. Τα συνήθη καλλιεργητικά μέσα περιέχουν συχνά 2% έως 10% ορό. Η προσθήκη ορού στο καλλιεργητικό μέσο εξυπηρετεί τους ακόλουθους σκοπούς [21]:

• Ο ορός παρέχει τα απαραίτητα θρεπτικά συστατικά για τα κύτταρα (τόσο σε διάλυμα όσο και προσδεδεμένα σε πρωτεΐνες).

• Ο ορός περιέχει διάφορους αυξητικούς παράγοντες και ορμόνες που εμπλέκονται στην προώθηση της ανάπτυξης και στην εξειδικευμένη κυτταρική δραστηριότητα.

• Παρέχει πολλές πρωτεΐνες πρόσδεσης, όπως η αλβουμίνη και η τρανσφερίνη, οι οποίες μεταφέρουν άλλες χημικές ουσίες στο κύτταρο. Για παράδειγμα, η αλβουμίνη μεταφέρει λίπη, βιταμίνες, ορμόνες κ.λπ. στα κύτταρα.

• Παρέχει επίσης πρωτεΐνες, όπως η ινονεκτίνη, οι οποίες αυξάνουν την προσκόλληση των κυττάρων στο υπόστρωμα. Επιπλέον, παράγει στοιχεία εξάπλωσης που βοηθούν στην επέκταση των κυττάρων πριν από την διαίρεση.

• Παρέχει αναστολείς πρωτεάσης που εμποδίζουν την πρωτεόλυση στα κύτταρα.

• Περιέχει επίσης μέταλλα όπως Na+, K+, Zn2+ και Fe2+.

• Αυξάνει το ιξώδες του μέσου, προστατεύοντας έτσι τα κύτταρα από μηχανική βλάβη κατά τη διάρκεια της ανάδευσης της καλλιέργειας σε εναιώρημα.

• Λειτουργεί επίσης ως ρυθμιστικό διάλυμα.

Αναφορές

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Διατροφή ζωικών κυττάρων σε καλλιέργεια ιστών· αρχικές μελέτες σχετικά με ένα συνθετικό μέσο. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Ταχεία προσρόφηση συστατικού εμβρυϊκού ορού μοσχαριού από θηλαστικά κύτταρα σε καλλιέργεια. Μια πιθανή πηγή τεχνητών παραμορφώσεων σε μελέτες αντιορών έναντι κυτταρικά ειδικών αντιγόνων. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Η προσθήκη ορού στο μέσο που χρησιμοποιείται για την παρασκευή κυτταρικών εναιωρημάτων ως πιθανή πηγή ψευδών αποτελεσμάτων σε κυτταρομεσολαβούμενες αντιδράσεις που μελετήθηκαν μέσω της δοκιμής του ιγνυακού λεμφαδένα. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Εμπορικά μέσα καλλιέργειας χωρίς ορό: ανάπτυξη υβριδωμάτων και παραγωγή μονοκλωνικών αντισωμάτων. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Μέθοδοι ανάπτυξης καλλιεργούμενων κυττάρων σε μέσο χωρίς ορό. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, κ.ά. Οι συνοδοί HSP70 μεταφέρουν το TDP-43 χωρίς RNA σε ανισότροπα ενδοπυρηνικά υγρά σφαιρικά κελύφη. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. Η γήρανση που προκαλείται από το σύνδρομο Down διαταράσσει την πυρηνική αρχιτεκτονική των νευρικών προγόνων. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Πλήρης αντικατάσταση του ορού με αλβουμίνη, τρανσφερίνη και λιπίδια σόγιας σε καλλιέργειες Β-λεμφοκυττάρων που αντιδρούν σε λιποπολυσακχαρίτες. J Exp Med. 1978;147:923-33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Συστηματική βελτίωση ενός χημικά καθορισμένου μέσου χωρίς πρωτεΐνες για την ανάπτυξη υβριδομάτων και την παραγωγή μονοκλωνικών αντισωμάτων. J Biotechnol. 1996;45:111-23

[10] Darfler F. Ένα μέσο χωρίς πρωτεΐνες για την ανάπτυξη υβριδωμάτων και άλλων κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78

[11] Barnes D, Sato G. Καλλιέργεια κυττάρων χωρίς ορό: μια ενοποιητική προσέγγιση. Cell. 1980;22:649-55

[12] Hamilton W, Ham R. Κλωνική ανάπτυξη κυτταρικών σειρών κινέζικου χάμστερ σε μέσα χωρίς πρωτεΐνες. In Vitro. 1977;13:537-47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Ανάλυση των κυτταροτοξικών επιδράσεων καλλιεργητικού μέσου που περιέχει HEPES και έχει εκτεθεί στο φως. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Η φαινόλη κόκκινη στα μέσα καλλιέργειας ιστών είναι ένα ασθενές οιστρογόνο: επιπτώσεις στη μελέτη των κυττάρων που ανταποκρίνονται στα οιστρογόνα σε καλλιέργεια. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500

[15] Karmiol S. Ανάπτυξη μέσων χωρίς ορό. Σε: Master JRW, επιμ. Animal Cell culture, 3η έκδ. Οξφόρδη: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Χρήση αντιβιοτικών στα μέσα κυτταρικής καλλιέργειας. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Εξάπλωση και έλεγχος της μυκοπλασματικής λοίμωξης σε κυτταρικές καλλιέργειες. In Vitro. 1976;12:643-8

[18] Masters J, Stacey G. Αλλαγή μέσου και αναπαραγωγή κυτταρικών σειρών. Nat Protoc. 2007;2:2276-84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Η απομεθυλάση ιστονών KDM6A ανιχνεύει άμεσα το οξυγόνο για τον έλεγχο της χρωματίνης και της κυτταρικής μοίρας. Science. 2019;363:1217-1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Αποτελεσματικότητα του Plasmocin™ σε διάφορες κυτταρικές σειρές θηλαστικών που έχουν μολυνθεί από μολικούτες, σε σύγκριση με τα συνήθως χρησιμοποιούμενα αντιβιοτικά στην κυτταρική καλλιέργεια: μια τοπική εμπειρία. Cytotechnology. 2011;63:609-20

[21] Kragh Hansen U. Μοριακές πτυχές της σύνδεσης του προσδέτη με την αλβουμίνη του ορού. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53