Πρωτογενή ανθρώπινα κύτταρα

Τι είναι τα ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα

Τα πρωτογενή κύτταρα είναι η πιο καθαρή αναπαράσταση των αντίστοιχων ιστών. Απομονώνονται από τον ιστό και υποβάλλονται σε επεξεργασία ώστε να μπορούν να εγκατασταθούν σε περιβάλλον καλλιέργειας με ιδανικές συνθήκες. Μιμούνται περισσότερο την in vivo κατάσταση και εμφανίζουν φυσιολογική φυσιολογία επειδή προέρχονται από ιστό και όχι από τροποποίηση. Εξαιτίας αυτού, μπορούν να χρησιμεύσουν ως χρήσιμα μοντέλα για την έρευνα της κυτταρικής φαρμακολογίας, της τοξικολογίας και της φυσιολογίας (συμπεριλαμβανομένων των μελετών του μεταβολισμού, της γήρανσης και της μεταγωγής σήματος). Λάβετε υπόψη ότι τα πρωτογενή κύτταρα είναι πιο δύσκολο να καλλιεργηθούν και να διατηρηθούν από μια συνεχή κυτταρική γραμμή, επειδή έχουν μικρότερη διάρκεια ζωής και θα σταματήσουν να διαιρούνται (ή να γεράσουν) μετά από έναν ορισμένο αριθμό κυτταρικών διαιρέσεων. Οι μελέτες των μονοπατιών κυτταρικής σηματοδότησης περιπλέκονται από την εγγενή μεταβλητότητα των πρωτογενών κυττάρων που αποκτώνται από δότες και μέσω πρακτικών υποκαλλιέργειας. Πριν από την έναρξη μελετών σηματοδότησης, οι ερευνητές συχνά διεξάγουν μια διαλογή για να καθορίσουν εάν τα κύτταρα ανταποκρίνονται ή όχι σε συνήθη χρησιμοποιούμενα ερεθίσματα. Για να αποφευχθεί η σπατάλη χρόνου και χρημάτων, τα πρωτογενή κύτταρα μπορούν να διεγερθούν για να ενεργοποιήσουν τις κύριες σηματοδοτικές οδούς πριν από τον έλεγχο.

Γιατί να χρησιμοποιήσετε ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα

Οι αθάνατες κυτταρικές σειρές χρησιμοποιούνται συνήθως ως κυτταρική δοκιμή. Παρόλο που οι επιστήμονες έχουν αναγνωρίσει ότι οι βιολογικές αλλαγές που οφείλονται σε κυτταρικές σειρές μπορεί να είναι επιβλαβείς στη μελέτη της φυσιολογικής τους σημασίας. Η χρήση ανθρώπινων πρωτογενών κυττάρων βελτιώνει τη φυσιολογική αξία των δεδομένων που λαμβάνονται μέσω κυτταροκαλλιεργειών και θεωρούνται όλο και περισσότερο σημαντικά για τη μελέτη βιολογικών διεργασιών, την εξέλιξη ασθενειών και την ανάπτυξη φαρμάκων.

Τα ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα χρησιμοποιούνται ευρέως σε in vitro μελέτες της διακυτταρικής και ενδοκυτταρικής επικοινωνίας, της αναπτυξιακής βιολογίας και των μηχανισμών που διέπουν τον καρκίνο, τη νόσο του Πάρκινσον και τον διαβήτη, μεταξύ πολλών άλλων προκλινικών και διερευνητικών τομέων βιολογικής έρευνας. Οι ερευνητές χρησιμοποιούν εδώ και καιρό αθάνατες κυτταρικές σειρές για τη μελέτη της λειτουργίας των ιστών- ωστόσο, οι κυτταρικές σειρές με εμφανείς μεταλλάξεις και χρωμοσωμικές ανωμαλίες μπορεί να μην είναι καλά υποκατάστατα για τα φυσιολογικά κύτταρα και την ανάπτυξη της νόσου στα αρχικά της στάδια. Ένα ακριβέστερο μοντέλο ενός συγκεκριμένου τύπου κυττάρων ιστού μπορεί πλέον να επιτευχθεί με τη χρήση ανθρώπινων πρωτογενών κυττάρων που απομονώνονται από τον εν λόγω ιστό και διατηρούνται σε πρωτογενή μέσα κυτταροκαλλιέργειας και συμπληρώματα.

Τι είναι η πρωτογενής κυτταρική καλλιέργεια

Αντί της χρήσης αθάνατων κυτταρικών σειρών, η πρωτογενής κυτταρική καλλιέργεια περιλαμβάνει την καλλιέργεια κυττάρων απευθείας από έναν πολυκύτταρο οργανισμό εκτός του σώματος. Σε ορισμένες χώρες, όπως το Ηνωμένο Βασίλειο, υπάρχει νομική αναγνώριση του γεγονότος ότι οι πρωτογενείς κυτταροκαλλιέργειες είναι πιο αντιπροσωπευτικές των in vivo ιστών από ό,τι οι κυτταρικές σειρές. Παρ' όλα αυτά, τα πρωτογενή κύτταρα χρειάζονται το κατάλληλο υπόστρωμα και τα κατάλληλα θρεπτικά συστατικά για να αναπτυχθούν, και μετά από έναν ορισμένο αριθμό διαιρέσεων, αναπτύσσουν έναν γεροντικό φαινότυπο που τα αναγκάζει να σταματήσουν οριστικά να διαιρούνται. Αυτοί οι δύο παράγοντες αποτελούν κίνητρο για τη δημιουργία κυτταρικών σειρών. Τόσο τα φυσικά αθάνατα πρωτογενή κύτταρα (π.χ. κύτταρα HeLa) όσο και τα τεχνητά αθάνατα πρωτογενή κύτταρα (π.χ. κύτταρα HEK) μπορούν να καλλιεργηθούν επ' αόριστον σε κυτταροκαλλιέργειες.

Ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα ανά τύπο ιστού

Τα επιθηλιακά κύτταρα, οι ινοβλάστες, τα κερατινοκύτταρα, τα μελανοκύτταρα, τα ενδοθηλιακά κύτταρα, τα μυϊκά κύτταρα, τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος και τα βλαστικά κύτταρα, όπως τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, είναι από τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα στην επιστημονική μελέτη. Αρχικά, οι καλλιέργειες είναι ετερογενείς (αντιπροσωπεύουν ένα μείγμα κυτταρικών τύπων που υπάρχουν στον ιστό) και μπορούν να διατηρηθούν ζωντανά in vitro μόνο για συγκεκριμένο χρονικό διάστημα. Ο μετασχηματισμός είναι μια in vitro διαδικασία που επιτρέπει τον χειρισμό των ανθρώπινων πρωτογενών κυττάρων για απεριόριστες υποκαλλιέργειες. Ο μετασχηματισμός μπορεί να συμβεί φυσικά ή μπορεί να προκληθεί από χημικές ουσίες ή ιούς. Αφού υποστεί γενετικό μετασχηματισμό, μια πρωτογενής καλλιέργεια μπορεί να διαιρείται επ' αόριστον σε μια αθάνατη δευτερογενή κυτταρική σειρά, εάν της δοθούν αρκετά θρεπτικά συστατικά και χώρος.

Ενδοθηλιακά κύτταρα

Η θεραπεία του καρκίνου, η επούλωση τραυμάτων, η έρευνα κυτταρικής σηματοδότησης, ο έλεγχος υψηλής απόδοσης και υψηλού περιεχομένου και ο τοξικολογικός έλεγχος είναι μερικοί μόνο από τους τομείς που μπορούν να επωφεληθούν από τη χρήση πρωτογενών ενδοθηλιακών κυττάρων ως ερευνητικό εργαλείο.

Κερατινοκύτταρα

Τα κερατινοκύτταρα, που προέρχονται από την επιδερμίδα είτε του ενήλικου ανθρώπινου δέρματος είτε της ακροποσθίας νεογνών, διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στη μελέτη δερματικών ασθενειών όπως η ψωρίαση και ο καρκίνος.

Επιθηλιακά κύτταρα

Από τις μελέτες του καρκίνου έως τις τοξικολογικές έρευνες, τα πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα έχουν αποδειχθεί ανεκτίμητοι πόροι για τη μοντελοποίηση της φυσικής άμυνας του οργανισμού.

Ινοβλάστες

Η επαγωγή πολυδύναμων βλαστικών κυττάρων (iPS) και η μελέτη της επούλωσης πληγών είναι μερικές μόνο από τις πολλές χρήσεις των πρωτογενών ινοβλαστών.

Ανοσοποιητικά κύτταρα

Τα μονοπύρηνα κύτταρα του περιφερικού αίματος, εν συντομία PBMC, είναι μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος με στρογγυλό κυτταρικό πυρήνα. Περιλαμβάνουν κυρίως λεμφοκύτταρα και μονοκύτταρα, τα οποία αναλαμβάνουν σημαντικές λειτουργίες κατά τη διάρκεια μιας ανοσολογικής απόκρισης. Τα μονοπύρηνα κύτταρα του περιφερικού αίματος χρησιμοποιούνται συχνά για τη διάγνωση λοιμώξεων ή για την ανίχνευση πιθανής προστασίας από εμβολιασμό. Η κατανόηση της κυτταρικής ανοσολογικής απόκρισης που μεσολαβείται από τα Τ κύτταρα είναι συχνά ζωτικής σημασίας.

Μελανοκύτταρα

Τα μελανοκύτταρα, τα εξειδικευμένα κύτταρα του δέρματος που παράγουν τη χρωστική ουσία μελανίνη, είναι χρήσιμα ως μοντέλα για την έρευνα σε θέματα όπως η επούλωση πληγών, η τοξικότητα, το μελάνωμα, η δερματική απόκριση στην υπεριώδη ακτινοβολία (UV), οι δερματικές ασθένειες και τα καλλυντικά.

Βλαστικά κύτταρα

Τα βλαστικά κύτταρα έχουν τη δυνατότητα να διαφοροποιούνται σε μεγάλη ποικιλία κυτταρικών τύπων. Λόγω της ικανότητάς τους να διαφοροποιούνται, παρέχουν νέες ευκαιρίες για τη μοντελοποίηση ανθρώπινων ιστών και καταστάσεων υγείας.

Μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα

Τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, γνωστά και ως MSCs, μπορούν να ληφθούν από διάφορες ανθρώπινες πηγές, όπως ο μυελός των οστών, το λίπος (λιπώδης ιστός), ο ιστός του ομφάλιου λώρου (ζελέ Wharton) και το αμνιακό υγρό (το υγρό που περιβάλλει ένα έμβρυο) και μπορούν να επεκταθούν in vitro. Αυτά τα ενήλικα στρωματικά βλαστικά κύτταρα έχουν την ικανότητα να αναπτύσσονται σε μια μεγάλη ποικιλία κυτταρικών τύπων. Ορισμένοι από αυτούς τους τύπους κυττάρων περιλαμβάνουν οστικά κύτταρα, κύτταρα χόνδρου, μυϊκά κύτταρα, νευρικά κύτταρα, κύτταρα δέρματος και κύτταρα κερατοειδούς.

Ομαλά μυϊκά κύτταρα

Μέσα σε κοίλα όργανα, τα πρωτογενή λεία μυϊκά κύτταρα (SMCs) επενδύουν το εσωτερικό και μεσολαβούν στη συσταλτικότητα. Εκτός από τον καρκίνο και άλλες ασθένειες, τα SMC μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη μοντελοποίηση της ίνωσης της υπέρτασης.

Πρωτογενή κύτταρα και κυτταρικές σειρές

Είτε μέσω αυθόρμητης μετάλλαξης, όπως στις μετασχηματισμένες καρκινικές κυτταρικές σειρές, είτε μέσω σκόπιμης τροποποίησης, όπως στην τεχνητή παραγωγή καρκινικών γονιδίων, οι συνεχείς κυτταρικές σειρές έχουν αποκτήσει τη δυνατότητα να αναπαράγονται ατελείωτα (αθανατισμένες). Κατά κανόνα, οι συνεχείς κυτταρικές σειρές είναι πιο αξιόπιστες και βολικές στην επεξεργασία από τα πρωτογενή κύτταρα. Μπορούν να επεκτείνονται επ' αόριστον και παρέχουν ταχεία πρόσβαση σε ουσιώδη δεδομένα. Η χρήση των συνεχών κυτταρικών σειρών έχει ορισμένους περιορισμούς, όπως το γεγονός ότι είναι γενετικά τροποποιημένες/μετασχηματισμένες, γεγονός που μπορεί να αλλάξει τα φυσιολογικά χαρακτηριστικά και να μην ταιριάζει με την κατάσταση in vivo, και ότι αυτό μπορεί να αλλάξει περαιτέρω με την πάροδο του χρόνου με σημαντική παθητικοποίηση.

Εξελίξεις στην πρωτογενή κυτταροκαλλιέργεια

Τα πρωτογενή κύτταρα έχουν τη φήμη ότι είναι δύσκολο να εργαστούν. Η διαδικασία, ωστόσο, γίνεται ευκολότερη από ποτέ, χάρη στις εξελίξεις στην πρωτογενή κυτταροκαλλιέργεια, τη διαθεσιμότητα εμπορικών πρωτογενών κυττάρων με πλήρως βελτιστοποιημένα πρωτόκολλα και τις νέες τεχνικές ανάλυσης που απαιτούν λιγότερες εισροές.

Η μετάβαση από τη δισδιάστατη στην τρισδιάστατη καλλιέργεια κυττάρων θεωρείται σημαντικό ορόσημο στον τομέα. Η ειδική για τον ιστό αρχιτεκτονική, οι αλληλεπιδράσεις κυττάρου-κυττάρου και η μηχανική/βιοχημική σηματοδότηση μπορεί να εξασθενήσουν σε μια καλλιέργεια 2D. Έτσι, υπάρχει ένα ανώτατο όριο στη βιολογική αξία αυτών των καλλιεργειών.

Από την άλλη πλευρά, η τρισδιάστατη κυτταρική καλλιέργεια επιτρέπει στα κύτταρα να επεκταθούν και να αλληλεπιδράσουν με ένα τρισδιάστατο εξωκυτταρικό πλαίσιο. Αυτό επιτρέπει στα κύτταρα να αλληλεπιδρούν μεταξύ τους και με την εξωκυτταρική μήτρα, καθιστώντας τις 3D καλλιέργειες πιο φυσιολογικά σχετικές. Η ακρίβεια αυτής της μεθόδου στην πρόβλεψη των in vivo αποκρίσεων την έχει καταστήσει επαναστατική σε τομείς όπως η ανακάλυψη και η ανάπτυξη φαρμάκων. Εξαιτίας αυτού, οι τεχνολογίες αιχμής, όπως τα οργανοειδή που προέρχονται από ασθενείς και τα όργανα-on-a-chip, παρέχουν μοντέλα με υψηλή συνάφεια με το περιβάλλον για τον έλεγχο και την ανάπτυξη φαρμάκων.

Η παραγωγή πρωτογενών κυττάρων αποτελεί σημείο συμφόρησης στην πρωτογενή καλλιέργεια. Συνήθως απαιτείται μεγαλύτερος όγκος ιστού για να ξεπεραστεί αυτό το πρόβλημα, το οποίο μπορεί να είναι δύσκολο να επιτευχθεί. Ωστόσο, η βελτιωμένη αναλυτική ευαισθησία προσφέρει μια διέξοδο προς τα εμπρός. Για παράδειγμα, η ανάγκη καλλιέργειας μεγάλων ποσοτήτων πρωτογενών κυττάρων μειώνεται με τη χρήση τεχνολογίας μεμονωμένων κυττάρων, η οποία περιλαμβάνει αλληλουχία, δυτική κηλίδα και κυτταρομετρία μάζας.

Ελπιδοφόρες προοπτικές για την καλλιέργεια πρωτογενών κυττάρων

Οι συνολικές δυσκολίες της καλλιέργειας πρωτογενών κυττάρων μετριάζονται από τις τεχνολογικές εξελίξεις. Με τη σειρά της, η μέθοδος αυτή αντικαθιστά ταχέως άλλες ως το χρυσό πρότυπο στη μελέτη και την πρακτική της κυτταρικής και μοριακής βιολογίας. Η παρασκευή εμβολίων, η αντικατάσταση οργάνων, οι θεραπείες με βλαστοκύτταρα, η έρευνα για τον καρκίνο και πολλά άλλα θα ωφεληθούν σημαντικά από τις συνεχείς εξελίξεις στην πρωτογενή κυτταροκαλλιέργεια.

Συμβουλές και κόλπα για την καλλιέργεια πρωτογενών κυττάρων

Οι ανάγκες της επέκτασης των κυττάρων

Οι δύο πιο συνηθισμένες μέθοδοι για την καλλιέργεια πρωτογενών κυττάρων είναι σε εναιώρημα ή σε επιφάνεια (2D). Ορισμένα κύτταρα είναι σε θέση να επιπλέουν ελεύθερα στην κυκλοφορία του αίματος χωρίς ποτέ να προσκολλώνται σε μια επιφάνεια (για παράδειγμα εκείνα που προέρχονται από το περιφερικό αίμα). Διάφορες κυτταρικές σειρές έχουν κατασκευαστεί ώστε να ευδοκιμούν σε καλλιέργειες εναιωρήματος, όπου μπορούν να επιτύχουν πυκνότητες ανέφικτες σε συνθήκες ανάπτυξης 2D. Τα πρωτογενή κύτταρα που χρειάζονται αγκύρωση για να αναπτυχθούν in vitro ονομάζονται προσκολλημένα κύτταρα και περιλαμβάνουν εκείνα που βρίσκονται σε στερεούς ιστούς. Για τη βελτίωση των ιδιοτήτων προσκόλλησης και την παροχή άλλων σημάτων που απαιτούνται για την ανάπτυξη και τη διαφοροποίηση, τα κύτταρα αυτά καλλιεργούνται συνήθως σε ένα επίπεδο μη επικαλυμμένο πλαστικό δοχείο, αλλά περιστασιακά σε έναν μικροφορέα. Αυτή η τελευταία επιλογή μπορεί να είναι επικαλυμμένη με πρωτεΐνες εξωκυτταρικής μήτρας (όπως το κολλαγόνο και η λαμινίνη). Τα μέσα που χρησιμοποιούνται στην κυτταροκαλλιέργεια αποτελούνται από ένα βασικό μέσο που έχει συμπληρωθεί με τους κατάλληλους αυξητικούς παράγοντες και κυτταροκίνες. Η κυτταρική θερμοκοιτίδα είναι ένας ειδικός τύπος εργαστηριακής θερμοκοιτίδας που χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια και διατήρηση κυττάρων σε συγκεκριμένη θερμοκρασία και μίγμα αερίων (συνήθως 37 °C, 5% CO2 για κύτταρα θηλαστικών). Ανάλογα με τον τύπο του κυττάρου που καλλιεργείται, οι βέλτιστες συνθήκες μπορεί να είναι πολύ διαφορετικές. Ανάλογα με τους τύπους των κυττάρων που καλλιεργούνται, το βέλτιστο μέσο ανάπτυξης θα έχει έναν μοναδικό συνδυασμό παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων, μεταξύ άλλων, του pH, της συγκέντρωσης γλυκόζης, των αυξητικών παραγόντων και της παρουσίας άλλων θρεπτικών συστατικών.

Τα αντιβιοτικά στο μέσο ανάπτυξης είναι ζωτικής σημασίας κατά την εγκατάσταση πρωτογενούς καλλιέργειας για την αποφυγή μόλυνσης από τον ιστό του ξενιστή. Ορισμένα αντιβιοτικά σχήματα διαθέτουν συνδυασμό γενταμικίνης, πενικιλλίνης, στρεπτομυκίνης και αμφοτερικίνης Β. Ωστόσο, δεν συνιστάται η χρήση αντιβιοτικών για παρατεταμένο χρονικό διάστημα, επειδή ορισμένα αντιδραστήρια (όπως η αμφοτερικίνη Β) μπορεί να είναι τοξικά για τα κύτταρα μακροπρόθεσμα.

Τα περισσότερα πρωτογενή κύτταρα περνούν από γήρανση και σταματούν να διαιρούνται μετά από ορισμένο αριθμό διπλασιασμών του πληθυσμού, γεγονός που καθιστά ζωτικής σημασίας τη διατήρησή τους στη ζωή μετά την απομόνωση. Η μακροχρόνια βιωσιμότητα των κυττάρων απαιτεί εξειδικευμένες τεχνικές καλλιέργειας κυττάρων και ιδανικές συνθήκες καλλιέργειας (συμπεριλαμβανομένου του σωστού μέσου, της σωστής θερμοκρασίας, του σωστού μίγματος αερίων, του σωστού pH, της σωστής συγκέντρωσης αυξητικών παραγόντων, της παρουσίας θρεπτικών ουσιών και της παρουσίας γλυκόζης). Δεδομένου ότι πολλοί από τους αυξητικούς παράγοντες που χρησιμοποιούνται για τη συμπλήρωση των μέσων λαμβάνονται από ζωικό αίμα (τα συστατικά που προέρχονται από το αίμα διαθέτουν τη δυνατότητα μόλυνσης), συνιστάται η ελαχιστοποίηση ή η πλήρης αποφυγή της χρήσης τους. Είναι επίσης σημαντικό να χρησιμοποιείται άσηπτη τεχνική.

Υποκαλλιέργεια και συντήρηση

Όταν τα κύτταρα σε απομόνωση προσκολλώνται στην επιφάνεια του τρυβλίου καλλιέργειας, αυτό σηματοδοτεί την έναρξη της φάσης συντήρησης. Η προσκόλληση συμβαίνει συνήθως 24 ώρες μετά την έναρξη της καλλιέργειας. Τα κύτταρα πρέπει να υποκαλλιεργούνται όταν έχουν φτάσει σε ένα ορισμένο ποσοστό συρροής και αναπαράγονται ενεργά. Δεδομένου ότι τα κύτταρα μετά τη συρροή μπορεί να υποστούν διαφοροποίηση και να παρουσιάσουν βραδύτερο πολλαπλασιασμό μετά τη διέλευση, είναι καλύτερο να υποκαλλιεργούνται οι πρωτογενείς κυτταρικές καλλιέργειες πριν φθάσουν στο 100% της συρροής.

Η υποκαλλιέργεια σε φρέσκα μέσα διατηρεί την εκθετική ανάπτυξη των εξαρτώμενων από την αγκύρωση κυττάρων. Η υποκαλλιέργεια μονοστρωματικών κυττάρων διαταράσσει τις δια- και ενδοκυτταρικές αλληλεπιδράσεις κυτταρικής επιφάνειας. Χαμηλές συγκεντρώσεις πρωτεολυτικών ενζύμων, όπως η τρυψίνη/EDTA, χρησιμοποιούνται για την εξαγωγή προσκολλημένων πρωτογενών κυττάρων από μονοστρώματα ή ιστούς. Αφού διαχωριστούν και αραιωθούν σε διάλυμα ενός κυττάρου, τα κύτταρα καταμετρώνται και μεταφέρονται σε νέα δοχεία καλλιέργειας για να επαναπροσκολληθούν και να πολλαπλασιαστούν.

Κρυοσυντήρηση και ανάκτηση

Η κρυοσυντήρηση συντηρεί ζωντανά κύτταρα με την κατάψυξή τους σε χαμηλές θερμοκρασίες. Η κρυοσυντήρηση και η απόψυξη ανθρώπινων πρωτογενών κυττάρων αποτρέπει τον κυτταρικό θάνατο και τη βλάβη κατά την αποθήκευση και τη χρήση. Τα ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα κρυοπροστατεύονται χρησιμοποιώντας DMSO ή γλυκερίνη (στη σωστή θερμοκρασία και με ελεγχόμενο ρυθμό κατάψυξης). Η διαδικασία κατάψυξης πρέπει να είναι προοδευτική, στους -1 °C κάθε λεπτό, ώστε να αποφεύγεται ο σχηματισμός παγοκρυστάλλων. Η μακροχρόνια αποθήκευση απαιτεί υγρό άζωτο (-196 °C) ή θερμοκρασίες κάτω από -130 °C.

Η εμβάπτιση των κατεψυγμένων κυττάρων σε υδατόλουτρο 37 °C για περίπου 1 έως 2 λεπτά αρκεί για την απόψυξη των κρυοσυντηρημένων κυττάρων. Τα ανθρώπινα πρωτογενή κύτταρα δεν πρέπει να φυγοκεντρίζονται μετά την απόψυξη από την κατάψυξη (καθώς είναι εξαιρετικά ευαίσθητα σε βλάβες κατά την ανάκτηση από την κρυοσυντήρηση). Είναι κατάλληλο για την εκκόκκιση κυττάρων αμέσως μετά την απόψυξη και προάγει την προσκόλληση στις καλλιέργειες κατά τις πρώτες 24 ώρες μετά την εκκόκκιση. 1. Αφού προσκολληθούν τα κρυοσυντηρημένα πρωτογενή κύτταρα, το χρησιμοποιημένο μέσο πρέπει να αφαιρεθεί (καθώς το DMSO είναι επιβλαβές για τα πρωτογενή κύτταρα και μπορεί να προκαλέσει πτώση της βιωσιμότητας μετά την απόψυξη).