P19-Zellen - Embryonalkarzinomforschung mit P19-Zellen

P19 ist eine murine embryonale Karzinom-Zelllinie. Sie wird häufig in der biomedizinischen Forschung eingesetzt, vor allem zur Untersuchung der Entwicklungsbiologie, der Stammzellbiologie, der Zelldifferenzierung und des Wirkstoffscreenings. Da P19-Zellen die Fähigkeit zur Differenzierung besitzen, können sie bei der Untersuchung komplexer biologischer Prozesse wie der Gewebebildung und der frühen Embryonalentwicklung nützlich sein. In diesem Artikel werden die Grundlagen von P19-Zellen aus der Maus erörtert.

Allgemeine Merkmale und Herkunft von P19-Zellen

Die Kenntnis der allgemeinen Merkmale und der Herkunft einer Zelllinie ist unerlässlich, bevor Sie mit ihr arbeiten. In diesem Abschnitt werden die folgenden Punkte behandelt: Was ist eine P19-Zelllinie? Wie groß ist die P19-Zelle? Welchen Ursprung haben die P19-Zellen?

  • P19 ist ein Typ von pluripotenten embryonalen Karzinomzellen, die ursprünglich aus einem Teratokarzinom der C3H/He-Maus gewonnen wurden. Die Zelllinie wurde erstmals 1982 von McBurney und Rogers etabliert.
  • P19-Zellen können in einem serumgesättigten Kulturmedium kontinuierlich wachsen. Sie können in andere Zelltypen differenziert werden, wenn sie nicht-toxischen Medikamenten wie Retinsäure und Dimethylsulfoxid (DMSO) ausgesetzt werden [1].
  • Diese Mauskarzinomzellen besitzen eine epithelähnliche Morphologie.
  • Die P19-Zelllinie hat einen euploiden männlichen Karyotyp (n=40; XY).

Modellierung der Mitose von embryonalen Stammzellen, vergrößert unter dem Mikroskop.

Informationen über die Kultivierung von P19-Zellen

Die P19-Zelllinie wird aufgrund ihrer einzigartigen Eigenschaften in Forschungslabors häufig kultiviert. Ihre Kultivierung ist einfach und überschaubar. In diesem Abschnitt finden Sie alle wichtigen Informationen, die Sie für die Aufrechterhaltung und das Wachstum der P19-Zellkultur benötigen. Wir werden wissen: Was ist die Verdopplungszeit von P19-Zellen? Wie kultiviert man eine P19-Zelllinie? Ist P19 eine adhärente Zelllinie?

Wichtige Punkte für die Kultivierung von P19-Zellen

Verdopplungszeit:

Die für die P19-Zelllinie angegebene Verdopplungszeit beträgt etwa 2 bis 3 Tage.

Adhärent oder in Suspension:

Die P19-Embryonalkarzinom-Zelllinie ist adhärent.

Subkultivierungsverhältnis:

P19-Zellen sollten alle 48 Stunden subkultiviert werden, und es sollte ein Teilungsverhältnis von 1:10 für diese Zellen beibehalten werden. Adhärente Zellen werden mit 1 X Phosphatpuffersalzlösung gewaschen und mit Accutase inkubiert, bis die Zellen dissoziieren. Die Zellen werden mit Kulturmedium versetzt und durch Zentrifugation geerntet. Die gesammelten Zellen werden vorsichtig resuspendiert und in neue Flaschen verteilt.

Wachstumsmedium:

DMEM/Ham's F12-Medium mit 5 % fötalem Rinderserum, 3,1 g/L Glucose, 1,6 mM L-Glutamin, 1,0 mM Natriumpyruvat, 15 mM HEPES und 1,2 g/L NaHCO3 wird für die Kultur von P19-Zellen verwendet.

Wachstumsbedingungen:

Für das Wachstum und die Kultivierung der P19-Embryonalkarzinom-Zelllinie ist ein befeuchteter Inkubator mit einer Temperatur von 37 °C und einer CO2-Zufuhr von 5 % erforderlich.

Lagerung:

Gefrorene P19-Zellfläschchen sollten bei einer Temperatur unter -150°C in einem Gefrierschrank oder in der Dampfphase von flüssigem Stickstoff gelagert werden, um die Lebensfähigkeit der Zellen längerfristig zu erhalten.

Einfrierprozess und Medium:

Zum Einfrieren von P19-Zellen können CM-1- oder CM-ACF-Medien verwendet werden. Dabei wird ein langsames Einfrierverfahren angewandt, das die Zellen vor jeglichem Schock schützt und ihre Lebensfähigkeit erhält.

Auftauprozess:

Eingefrorene P19-Zellen können in einem 37 °C warmen Wasserbad aufgetaut werden, indem ein Fläschchen 40 bis 60 Sekunden lang schnell geschüttelt wird. Die Zellen werden mit frischem Medium versetzt und zentrifugiert, um gefrierende Medienbestandteile zu entfernen. Die Zellpalette wird wieder resuspendiert, und die Zellen werden zum Wachstum in den neuen Kolben gegossen.

Biosicherheitsstufe:

Für die P19-Zelllinie sind Laboreinstellungen der Biosicherheitsstufe 1 erforderlich.

Adhärente und semi-konfluente Schicht von P19-Zellen bei 10- und 20-facher Vergrößerung.

P19-Zelllinie: Vorteile und Nachteile

In diesem Abschnitt werden die Vor- und Nachteile der P19-Zelllinie erörtert.

Vorteile

  • Differenzierungspotenzial: P19-Zellen können sich in verschiedene Zelltypen differenzieren, darunter Kardiomyozyten, Neuronen und Mikrogliazellen. Für die Differenzierung benötigen sie ungiftige Medikamente, wie Retinsäure und Dimethylsulfoxid (DMSO). Retinsäure induziert die Entwicklung von Neuronen, Mikroglia und Astroglia, während DMSO die Entwicklung von schlagenden Kardiomyozyten und glatten Muskelzellen einleitet. Daher eignen sich P19-Zellen für die Untersuchung von Zelldifferenzierungs- und Entwicklungsprozessen
  • Modellsystem: Die pluripotente embryonale Karzinomzelllinie P19 ist ein wertvolles Modell für die Untersuchung der frühen Embryonalentwicklung. Forscher nutzen P19-Zellen, um zelluläre Signalwege und die an diesen Prozessen beteiligten zellulären und molekularen Mechanismen zu erforschen

Nachteile

  • Muriner Ursprung: P19 ist eine embryonale Karzinomzelllinie der Maus. Daher lassen sich die Ergebnisse von Studien mit diesen Zellen möglicherweise nicht vollständig auf die Biologie und Prozesse beim Menschen übertragen

Forschungsanwendungen von P19-Zellen

P19-Zellen werden aufgrund ihrer Differenzierungsfähigkeit und ihrer Bedeutung für die Entwicklungsbiologie und die Stammzellforschung in der Forschung eingesetzt. Einige der wichtigsten Forschungsanwendungen von P19-Embryonalkarzinomzellen sind:

  • Studien zur Zelldifferenzierung: Wie wir wissen, können sich P19-Zellen in Neuronen, Mikrogliazellen, glatte Muskelzellen und Kardiomyozyten differenzieren und werden daher häufig zur Untersuchung von Zelldifferenzierungsprozessen verwendet. Darüber hinaus helfen sie der Forschung bei der Untersuchung der neuronalen und kardialen Entwicklung und der zugrunde liegenden Mechanismen. Eine 2018 durchgeführte Studie ergab, dass reaktive Sauerstoffspezies (ROS) die Differenzierung von P19-Zellen in bestimmte Zelltypen steuern und die Induktion anderer Zelltypen verhindern [3]. Eine andere Studie untersuchte den Retinsäure-vermittelten neuralen Differenzierungsprozess und fand die Beteiligung des PI3K/Akt/GSK3β-Signalwegs [4].
  • Entwicklungsbiologie: P19-Zellen sind ein unschätzbares Modell für die Untersuchung der frühen Embryonalentwicklung. Sie helfen den Forschern, komplexe biologische Prozesse, wie die Gewebebildung während der Embryonalentwicklung, zu verstehen. In der Studie wurden P19-Zellen verwendet und die molekularen Faktoren untersucht, die zur Bildung eines Ventrikelseptumdefekts (VSD) beitragen. Die Ergebnisse zeigten, dass eine lange nichtkodierende RNA SNHG6 zur Entstehung von VSD beiträgt, indem sie die miRNA-101 negativ reguliert und den Wnt/β-Catenin-Weg aktiviert [5].
  • Medikamententests: Die P19-Zelllinie des embryonalen Mauskarzinoms wird auch zum Screening potenzieller Arzneimittelkandidaten verwendet. In einer Studie wurden differenzierte P19-Zellneuronen verwendet und die neuroprotektiven Acetylcholinesterase-hemmenden Wirkungen von synthetischem L-Dopa und wässrigem Extrakt aus Mucuna pruriens-Samen untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass der Pflanzenextrakt im Vergleich zu L-Dopa vielversprechende Ergebnisse lieferte [6].

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P19-Zellen: Veröffentlichungen zur Forschung

In diesem Artikelabschnitt werden einige interessante Forschungspublikationen über P19-Zellen vorgestellt.

Neue Belege dafür, dass Hypophysen-Sexualhormone die Migration, Adhäsion und Proliferation von embryonalen Stammzellen und Teratokarzinomzellen regulieren

Dieser Artikel wurde 2017 in Oncology Reports veröffentlicht. Die Studie legt nahe, dass hypophysäre Sexualhormone die Adhäsion, Proliferation und Migration von Teratokarzinom-Zelllinien, einschließlich P19-Zellen, steuern.

Die lange nicht-kodierende RNA uc. 4 beeinflusst die Zelldifferenzierung über den TGF-beta-Signalweg

In dieser Veröffentlichung in der Zeitschrift Experimental & Molecular Medicine (2018) wurden P19-Zellen verwendet und die Funktion der langen nichtkodierenden RNA uc.4 untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass uc.4 die Zelldifferenzierung über die Modulation des TGF-Beta-Signalwegs beeinflusst.

Die kombinierten Auswirkungen von dreidimensionaler Zellkultur und natürlichem Gewebeextrakt auf die neurale Differenzierung von P19-Stammzellen des embryonalen Karzinoms

Dieser Forschungsartikel wurde 2018 im Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine veröffentlicht. Die Studie ergab, dass natürlicher Hirngewebeextrakt und 3D-Zellkultur die Differenzierung von P19-Embryonalkarzinomzellen in neurale Zellen beschleunigen können.

In-vitro-Differenzierungsinduktion von embryonalen Karzinom-Stammzellen in insulinproduzierende Zellen durch Blattextrakt von Cichorium intybus L

Diese Studie wurde im Jahr 2020 im Journal of Ethnopharmacology veröffentlicht. Die Studie schlug vor, dass der Blattextrakt von Cichorium intybus L. die Differenzierung von P19 embryonalen Karzinomzellen in Insulin produzierende β-Zellen der Bauchspeicheldrüse induzieren kann.

Wässriger Extrakt ausMucuna pruriens-Samen verbesserte neuroprotektive und Acetylcholinesterase-hemmende Effekte im Vergleich zu synthetischem L-Dopa

Diese Forschungsarbeit wurde in Molecules (2022) veröffentlicht. Diese Studie untersuchte die neuroprotektiven und acetylcholinesterasehemmenden Wirkungen von Mucuna pruriens-Samenextrakt auf P19-Zellneuronen.

Ressourcen für die P19-Zelllinie: Protokolle, Videos und mehr

Im Folgenden finden Sie einige Ressourcen zu P19-Zellen.

Der folgende Link enthält das P19-Zellkulturprotokoll.

  • P19-Zellen: Diese Website enthält alle nützlichen Informationen über die P19-Zelllinie, einschließlich ihrer Kulturbedingungen, P19-Zellmedien, Zellteilung und vieles mehr.

Erforschung der P19-Zelllinie: Häufig gestellte Fragen

Referenzen

  1. McBurney, M.W., P19 embryonale Karzinomzellen. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
  2. Bressler, J., et al., P19 Embryonalkarzinom-Zelllinie: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
  3. Pashkovskaia, N., U. Gey, and G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
  4. Fu, F., et al., All-trans-Retinoid-Säure induziert die Differenzierung von P19-Zellen in Neuronen, die am PI3K/Akt/GSK3β-Signalweg beteiligt sind. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
  5. Jiang, Y., et al., Long noncoding RNA SNHG6 contributes to ventricular septal defect formation via negative regulation of miR-101 and activation of Wnt/β-catenin pathway. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
  6. Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens seed aqueous extract improved neuroprotective and acetylcholinesterase inhibitory effects compared with synthetic L-dopa. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.

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