HT-29-Zelllinie
HT-29 ist eine menschliche Darmkrebs-Zelllinie mit einem breiten Spektrum an Anwendungen in der Krebs- und Toxikologieforschung. So reagieren diese Zellen beispielsweise empfindlich auf gängige chemotherapeutische Behandlungen gegen Darmkrebs. Darüber hinaus ist die HT-29-Zelllinie ein gut charakterisiertes In-vitro-Modell zur Untersuchung der Reaktion des Darmepithels auf bakterielle Infektionen. Die HT-29-Zellen ahmen die Eigenschaften reifer Darmzellen, d. h. Enterozyten, nach und eignen sich daher für Adhäsions- und Mechanismusstudien.
- Wachstumsmedium
- Siehe Produktseite
- Verdopplungszeit
- Siehe Produktseite
- Wachstumsart
- Adhärent
- Einstufung der biologischen Sicherheit
- BSL-1
- Erhältlich bei
- Cytion – HT-29 bestellen
HT-29-Zellen: Herkunft und allgemeine Informationen
Bevor Sie eine Zelllinie verwenden, sollten Sie sich über die allgemeinen Eigenschaften und die Herkunft der Zelllinie informieren. In diesem Abschnitt erfahren Sie: Was sind HT-29-Zellen? Ist HT-29 eine Darmkrebs-Zelllinie? Wie sieht die Morphologie von HT-29-Zellen aus?
Was ist die HT-29-Zelllinie? HT-29 ist eine Zelllinie für kolorektales Adenokarzinom, die 1964 von Trempe und Fogh etabliert wurde. Die Zellen wurden ursprünglich aus dem Primärtumor einer kaukasischen Frau (44 Jahre alt) mit kolorektalem Adenokarzinom gewonnen [1]. Seit ihrer Etablierung wird diese Zelllinie zur Erforschung der Biologie von Krebserkrankungen verwendet.
Morphologie von HT-29-Zellen: Die HT-29-Zelllinie weist im Allgemeinen eine epithelähnliche Morphologie auf. Differenzierte Zellen wachsen in Monolayern, bilden enge Zell-Zell-Verbindungen und besitzen eine apikale Bürstensaum. Werden diese Zellen in glukosearmem Medium gezüchtet oder mit Induktoren wie Butyrat oder Säure behandelt, zeigen sie enterozytenähnliche Merkmale.
Zellgröße: Der Durchmesser der HT-29-Kolorektalkrebs-Zelllinie beträgt 11 μm.
Genom und Ploidie: Die modale Chromosomenzahl der HT-29-Zelllinie beträgt 71. Sie kann zwischen 68 und 72 variieren. Darüber hinaus ist die optimierte Chromosomenzahl für HT-29-Zellen hypertriploid, wobei die 2S-Komponente mit einer Häufigkeit von 2,4 % auftritt.
Was ist HT29 MTX? HT29 MTX ist eine Methotrexat-resistente Zelllinie, die durch Anpassung an 10 µM Methotrexat aus der ursprünglichen menschlichen HT-29-Kolonkarzinom-Zelllinie isoliert wurde. Diese Zellen weisen Merkmale von schleimproduzierenden reifen Becherzellen auf.
Informationen zur Zellkultur der HT-29-Zelllinie
Die Kenntnis der grundlegenden Kulturbedingungen einer Zelllinie kann Ihnen die Arbeit damit erleichtern. Sie sollten wissen: Wie lang ist die Verdopplungszeit der HT-29-Zelllinie? Wie hoch ist die Aussaatdichte von HT-29-Zellen? Welches Medium eignet sich für HT-29-Zellen?
Verdopplungszeit
Die mittlere Verdopplungszeit der HT-29-Zelllinie beträgt 24 Stunden.
Adhärent/Suspension
HT-29 ist eine adhärente Zelllinie.
Aussaatdichte
Die für HT-29-Zellen empfohlene Aussaatdichte beträgt 3 × 10⁴ Zellen/cm². Die gewachsenen Zellen werden mit 1× PBS gewaschen und nach einer Inkubation mit Accutase für 8–10 Minuten abgelöst. Frisches Medium wird hinzugefügt, und die Zellen werden zentrifugiert. Das Zellpellet wird resuspendiert, und die Zellen werden in der empfohlenen Zelldichte in neue Flaschen dispensiert.
Wachstumsmedium
Für die optimale Kultivierung von HT-29-Zellen wird Eagle’s Minimum Essential Medium (EMEM), ergänzt mit 2,5 mM L-Glutamin und 10 % FBS, verwendet. Das Medium sollte 2- bis 3-mal pro Woche gewechselt werden.
Wachstumsbedingungen
HT-29-Zellen benötigen für ihr Wachstum einen befeuchteten Inkubator mit einer Temperatur von 37 °C und einer CO₂-Zufuhr von 5 %.
Lagerung
Diese Zellen werden in der Dampfphase von flüssigem Stickstoff bei Temperaturen unter -195 °C gelagert.
Einfriermedium und -verfahren
Das für die HT-29-Zelllinie verwendete Einfriermedium ist CM-1 oder CM-ACF. Die Zellen werden durch ein langsames Einfrierverfahren eingefroren, das einen Temperaturabfall von 1 °C bewirkt und die Lebensfähigkeit der Zellen wirksam schützt.
Auftauprozess
Gefrorene HT-29-Zellen werden in einem auf 37 °C eingestellten Wasserbad aufgetaut. Diese Zellen können resuspendiert und direkt in die Flasche mit frischem Wachstumsmedium dispensiert werden. Alternativ können die aufgetauten Zellen zentrifugiert werden, um Bestandteile des Gefriermediums zu entfernen, in frischem Medium resuspendiert und in Flaschen kultiviert werden.
Sicherheitsstufe
Für die Handhabung und Aufbewahrung der HT-29-Zelllinie gilt die Biosicherheitsstufe 1.
HT-29-Zellen: Vorteile und Einschränkungen
Jede Zelllinie hat ihre eigenen Vor- und Nachteile, die sie von anderen Zelllinien unterscheiden. In diesem Abschnitt werden die wichtigsten Vorteile und Einschränkungen im Zusammenhang mit HT-29-Zellen behandelt.
Vorteile
Die wichtigsten Vorteile von HT-29-Zellen sind:
-
Einfach zu kultivieren
Die HT-29-Zelllinie ist einfach zu handhaben und zu pflegen und stellt keine komplexen Anforderungen an die Kultivierung. Sie wird in Forschungslabors weit verbreitet kultiviert.
-
In-vitro-Modell für Darmzellen
HT-29-Zellen können sich unter bestimmten Kulturbedingungen zu reifen Darmzellen (Enterozyten und schleimproduzierende Zellen) differenzieren. Sie werden als zelluläres Modell zur Untersuchung der Nahrungsverdauung und der Bioverfügbarkeit verwendet.
-
Hohe Transfektionseffizienz
HT-29-Darmkrebszellen weisen eine hohe Transfektionseffizienz auf, wodurch sie sich für Studien zur Genexpression und -regulation eignen. Sowohl transiente als auch stabile Transfektionsexperimente können mit verschiedenen Methoden durchgeführt werden.
-
Arzneimittelsensitivität
HT-29-Zellen reagieren empfindlich auf Chemotherapeutika wie Fluorouracil und Oxaliplatin, die häufig in der Darmkrebsbehandlung eingesetzt werden. Sie werden zur Untersuchung von Arzneimittelresistenzen und zum Screening potenzieller Therapeutika für das kolorektale Karzinom verwendet.
Einschränkungen
-
Heterogenität
HT-29-Zellen weisen, wie andere Krebszelllinien auch, Heterogenität auf und bilden möglicherweise keine einheitliche Zellpopulation. Dies kann die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse in bestimmten Assays beeinträchtigen und zu geringfügigen Abweichungen bei den Versuchsergebnissen führen.
-
Begrenzte Differenzierung
HT-29-Zellen haben ein begrenztes Differenzierungspotenzial. Sie differenzieren sich nicht vollständig zu Darm- oder Kolonzellen, sondern weisen nur wenige charakteristische Merkmale auf. Diese Einschränkung kann ihre Verwendung bei der Untersuchung komplexerer biologischer Prozesse einschränken.
HT-29-Zellen: Anwendungen
Die HT-29-Zelllinie wird aufgrund ihres breiten Anwendungsspektrums in Forschungslabors in großem Umfang kultiviert. In diesem Abschnitt werden nur einige wichtige Anwendungen von HT-29-Zellen behandelt.
Krebsforschung: HT-29 ist eine Zelllinie für kolorektales Adenokarzinom und wird daher zur Untersuchung des Fortschreitens und der Entstehung von Krebs sowie der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen verwendet. In einer 2018 durchgeführten Studie wurde die HT-29-Zelllinie eingesetzt, um die für die Metastasierung verantwortlichen Zellmoleküle zu untersuchen. Diese Studie beobachtete, dass die Gene Vimentin und CXCR4 die Zellmetastasierung regulieren. Die Transfektion eines microRNA-193a-5p-Mimics kann hingegen die mRNA-Spiegel dieser Gene senken und die Metastasierung von Krebszellen erfolgreich verringern [2].
Toxikologische Forschung: Die HT-29-Zelllinie wird in der toxikologischen Forschung intensiv genutzt. Diese kolorektalen Karzinomzellen dienen dazu, die Toxizität verschiedener Wirkstoffkandidaten mithilfe unterschiedlicher Assays zu bewerten. So untersuchte beispielsweise eine Studie das toxische Potenzial eines ethanolischen Extrakts der Pflanze Syzygium cumini an der HT-29-Zelllinie. Die Ergebnisse zeigten eine signifikante Hemmung des HT-29-Zellwachstums, was auf vielversprechende krebsbekämpfende Eigenschaften des Extrakts hindeutet [3].
Mikrobiologie: HT-29 kann als Wirtszellsystem zur Untersuchung der Pathogenese potenzieller Mikroben, d. h. Bakterien und Viren, verwendet werden. Forscher können HT-29-Zellen mit Mikroben infizieren, um deren Virulenz und die Reaktion des Wirts zu untersuchen. In einer solchen Studie wurden HT-29-Zellen verwendet, um die probiotischen Eigenschaften von Milchsäurebakterien zu untersuchen [4]. In einer anderen Studie wurden HT-29-Zellen eingesetzt, um die Wirksamkeit und Sicherheit von Bakteriophagenbehandlungen zu bewerten [5].
5. Forschungsarbeiten zu HT-29-Zellen
Dieser Abschnitt stellt einige bemerkenswerte Veröffentlichungen zu HT-29-Zellen vor, die Ihnen bei der Konzeption Ihrer Forschungsstudie helfen werden.
Diese Studie schlug den ethanolischen Extrakt von Syzygium cumini als potenzielles Antikrebsmittel gegen die kolorektale Zelllinie HT-29 vor. Der Extrakt hemmte das Wachstum der Krebszellen signifikant.
Diese Veröffentlichung in Bioscience Reports untersuchte die krebshemmende Wirkung einer Verbindung, Tetrandrine, auf HT-29-Zellen. Die Ergebnisse zeigten, dass Tetrandrine die Proliferation und das Wachstum von Krebszellen durch die Regulierung von Zellsignalwegen hemmt.
Diese Studie legte nahe, dass miRNA-193a-5p die Metastasierung von HT-29-Zellen potenziell durch die Regulierung von Metastasierungs-bezogenen Genen steuern kann.
Dieser Artikel wurde 2018 in Nature Scientific Reports veröffentlicht. In dieser Studie wurde die tumorogene Zelllinie HT-29 als Darmzellmodell verwendet, um die Wirksamkeit der vorgeschlagenen Bakteriophagenbehandlung zu bewerten.
In dieser Studie untersuchten die Forscher anhand von HT-29-Zellen die probiotischen Aktivitäten von Milchsäurebakterien. Interessanterweise zeigte die Studie, dass Laktobazillen die Anhaftung pathogener Bakterien an Kolonzellen verhindern.
HT-29-Zellen – Ressourcen: Protokolle, Videos und mehr
In diesem Abschnitt werden einige Online-Ressourcen zu HT-29-Zellen vorgestellt, die beim Erlernen der Protokolle für deren Pflege, Kultivierung und Transfektion helfen.
Zellkulturprotokolle
Die folgenden Ressourcen bieten Ihnen eine Anleitung zur Subkultivierung von HT-29-Zellen.
- Kultivierung von HT-29-Zellen: Dieser Link vermittelt Grundkenntnisse über das Wachstumsmedium, das Auftauen und die Subkultivierung von HT-29-Zellen.
- Pflege von HT-29-Kulturen: Dieser Artikel enthält alle nützlichen Informationen zur Kultivierung und Pflege von HT-29-Zellen.
Transfektionsprotokolle
Die HT-29-Zelllinie weist eine hohe Transfektionseffizienz auf und wird häufig in Genexpressionsstudien verwendet. Die folgenden Ressourcen beschreiben die möglichen Transfektionsprotokolle für diese Zellen.
- Transfektion von HT-29: Dieser Website-Link enthält das detaillierte Protokoll für die Transfektion von HT-29-Zellen.
- Transfektion der HT-29-Zelllinie: Dieses Dokument beschreibt das Transfektionsprotokoll der HT-29-Zelllinie mit Plasmid-DNA.
Videos zur HT-29-Zelllinie
Hier finden Sie einige Videos zur Kultivierung und Pflege dieser tumorigenen Zelllinie.
- Passagieren von Zellen: Dieses Video zeigt das Protokoll zum Passagieren von adhärenten Zelllinien.
- Transfektion von HT-29-Zellen: Dieses Video führt Sie durch die für HT-29-Zellen verwendete Transfektionsmethode.
Wir gehen davon aus, dass die Informationen in diesem Artikel für Sie wertvoll und ausreichend sind, um die HT-29-Zelllinie zu handhaben und zu pflegen. Wenn Sie planen, HT-29-Zellen in Ihrer Studie zu verwenden, bestellen Sie diese bei uns.
Referenzen
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles und I. Recio, HT29-Zelllinie. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: S. 113–124.
- Shirafkan, N. et al., microRNA-193a-5p hemmt die Migration menschlicher HT-29-Darmkrebszellen durch Unterdrückung des Metastasierungsweges. Journal of Cellular Biochemistry, 2019. 120(5): S. 8775–8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean und R. Safaralizadeh, Bewertung der krebshemmenden Wirkung des ethanolischen Extrakts von Syzygium cumini auf die HT-29-Kolorektalzelllinie. Journal of Gastrointestinal Cancer, 2021. 52: S. 575–581.
- Fonseca, H.C. et al., Probiotische Eigenschaften von Laktobazillen und ihre Fähigkeit, die Adhäsion enteropathogener Bakterien an Caco-2- und HT-29-Zellen zu hemmen. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13: S. 102–112.
- Shan, J. et al., Bakteriophagen sind gegenüber Bakterien in menschlichen Zellen virulenter als in Bakterienkulturen; Erkenntnisse aus HT-29-Zellen. Scientific Reports, 2018. 8(1): S. 5091.