Die Zelllinie A375 – Ein Leitfaden zur Melanomforschung

A375 ist eine menschliche Melanom-Zelllinie, die in der toxikologischen und immuno-onkologischen Forschung weit verbreitet ist. Forscher nutzen diese Zelllinie, um die Krebsbiologie und Signalwege zu untersuchen, potenzielle Krebsmedikamente zu testen oder zu screenen und neue, wirksame Therapeutika zu entwickeln.

Herkunft und allgemeine Eigenschaften von A375-Zellen

Kenntnisse über die Herkunft und die allgemeinen Eigenschaften einer Zelllinie können Ihnen bei der Planung ihrer Verwendung in der Forschung helfen. Dieser Abschnitt des Artikels behandelt die Herkunft und die Merkmale der A375-Zelllinie. Was ist beispielsweise die A375-Zelllinie? Welche Eigenschaften weist die A375-Zelllinie auf? Woher stammen A375-Zellen? Wie sieht die Morphologie von A375-Melanomzellen aus? Wie groß sind A375-Zellen?

• Die Hautkrebs-Zelllinie A375 stammt aus der Explantatkultur eines soliden Tumors einer 54-jährigen Frau mit malignem Melanom [1].
• A375-Zellen weisen eine epitheliumähnliche Morphologie auf.
• Die Größe der A375-Zellen ist im Vergleich zu anderen Zelllinien relativ gering. Sie haben einen Durchmesser von etwa 12 µm.
• Die A375-Melanomzellen sind hypotriploid. Die modale Chromosomenzahl dieser Zelllinie beträgt 62. In der Regel besitzt jede Zelle neun Markerchromosomen und eine Kopie der normalen Chromosomen N2, N6 und N22.

A375-Zellen: Informationen zur Zellkultur

A375-Zellkulturen sind einfach zu pflegen. Sie stellen keine besonderen Anforderungen an die Zellkultur. In diesem Abschnitt erfahren Sie die notwendigen Informationen zur Zellkultur. Zum Beispiel: Wie lang ist die Verdopplungszeit von A375? Welches Medium wird für die A375-Zelllinie verwendet? Wie hoch ist die Aussaatdichte von A375? Sind A375-Melanomzellen adhärent?

Wichtige Punkte für die Kultivierung von A375-Zellen

Verdopplungszeit der Population:

Die Verdopplungszeit von A375 beträgt 20 Stunden.

Adhärent oder in Suspension:

A375 ist eine adhärente menschliche Melanomzelllinie.

Aussaatdichte:

Eine Zelldichte von 1 × 10^⁴ Zellen/cm^² ist ideal für A375-Zellkulturen. Adhärente Zellen werden mit 1× Phosphatpuffer-Salzlösung (PBS) gespült und mit Passagelösung (Accutase) inkubiert. Anschließend wurden die Zellen mit Kulturmedium versetzt und zentrifugiert. Die geernteten Zellen wurden in einem Kulturmedium resuspendiert und zur Vermehrung in neue Flaschen überführt.

Wachstumsmedium:

DMEM wird als ideales A375-Medium empfohlen, wenn es mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS), 4,5 g/l Glukose, 1,5 g/l NaHCO₃, 4 mM L-Glutamin und 1,0 mM Natriumpyruvat ergänzt wird. Das A375-Medium sollte 2–3 Mal pro Woche erneuert werden.

Wachstumsbedingungen:

A375-Melanomzellen werden in einem befeuchteten Inkubator (37 °C) mit einer 5%igen CO₂-Zufuhr gezüchtet.

Lagerung:

Gefrorene A375-Zellen sollten bei Temperaturen unter -150 °C in der Dampfphase von flüssigem Stickstoff oder in einem elektrischen Gefrierschrank aufbewahrt werden.

Einfrierverfahren und Medium:

Zum Einfrieren der A375-Zelllinie werden CM-1- oder CM-ACF-Medien verwendet. Um die Lebensfähigkeit der Zellen zu schützen, wird ein langsamer Einfrierprozess gewählt, bei dem die Temperatur schrittweise um 1 °C gesenkt wird.

Auftauprozess:

Das Fläschchen mit den gefrorenen A375-Melanomzellen wird 40 bis 60 Sekunden lang im Wasserbad kräftig geschüttelt, bis nur noch ein kleiner Eisklumpen übrig ist. Die Zellen werden mit frischem Medium versetzt und zentrifugiert, um die Bestandteile des Einfriermediums zu entfernen. Das gewonnene Zellpellet wird erneut resuspendiert und in neue Flaschen überführt.

Biosicherheitsstufe:

A375-Kulturen werden in Laboren der Biosicherheitsstufe 1 gehandhabt und gepflegt.

Forschungsanwendungen der A375-Zelllinie

Die A375-Zelllinie findet in der Krebsforschung umfangreiche Anwendungsmöglichkeiten. Hier sind einige der gängigen Bereiche, in denen A375-Zellen eingesetzt werden.

• Krebsforschung: A375-Zellen finden breite Anwendung in der Melanomforschung. Forscher nutzten diese Zellen, um die Biologie von Hautkrebs, die damit verbundenen Prozesse und die zugrunde liegenden zellulären Signalmechanismen zu untersuchen, darunter Zellproliferation, Migration und Invasion. Dies könnte Forschern auch dabei helfen, neue molekulare therapeutische Zielstrukturen zu identifizieren. Eine von Lin Zhu und Kollegen im Jahr 2019 durchgeführte Studie verwendete hochaggressive A375-Melanomzellen und untersuchte die Rolle von microRNA-3662 beim Wachstum und der Invasion von A375-Melanomzellen. Die Studienergebnisse zeigen, dass microRNA-3662 auf das ZEB1-Gen abzielt und das Wachstum von Melanomzellen in vitro und in vivo im A375-Tumormodell reguliert [2]. In ähnlicher Weise ergab eine 2018 durchgeführte Untersuchung, dass die PI3K/AKT- und MAPK/ERK-Signalwege an der Proliferation und Metastasierung der A375-Zelllinie beteiligt sind [3].
• Arzneimittelforschung und -prüfung: Die A375-Zelllinie ist ein nützliches In-vitro-Tumormodell zur Prüfung und zum Screening potenzieller Krebsmedikamente. Forscher bewerten die Toxizität und Wirksamkeit neuartiger Chemotherapeutika, Wirkstoffe und anderer Therapien unter Verwendung dieser A375-Melanomzellen. So untersuchte beispielsweise eine Studie die krebshemmenden Eigenschaften von aus Grapefruit gewonnenen Mikro- und Nanovesikeln an menschlichen A375-Melanomzellen. Die Ergebnisse zeigten, dass Mikro- und Nanovesikel einen Zellzyklusstillstand und Apoptose induzieren und die Genexpression bei Zellproliferation, Migration und Invasion hemmen [4].

A375-Zellen: Publikationen

Hier werden einige bedeutende Forschungsveröffentlichungen zu A375-Zellen aufgeführt.

Vitamin D und seine kalziumarmen Analoga modulieren die krebshemmenden Eigenschaften von Cisplatin und Dacarbazin in der menschlichen Melanom-Zelllinie A375

Diese Studie wurde 2019 im Journal of Oncology veröffentlicht. Die Studie legte nahe, dass eine kombinierte Behandlung mit Vitamin D und Analoga die krebshemmende Wirkung von Cisplatin und Dacarbazin in A375-Melanomzellen verbessert.

In-vitro-Bewertung der Anti-Melanom-Wirkungen (A375-Zelllinie) von Gel- und Ganzblattextrakten ausgewählter Aloe-Arten

Diese Forschungsarbeit wurde 2022 im Journal of Herbal Medicine veröffentlicht. In dieser Studie wurden die Anti-Melanom-Wirkungen von Aloe-Vera-Gel in A375-Melanomzellen untersucht.

Fermitin-Familienmitglied 2 fördert das Fortschreiten des Melanoms, indem es die Bindung von p-α-Pix an Rac1 verstärkt und so den MAPK-Signalweg aktiviert

Diese Studie in Oncogene (2021) legte nahe, dass Fermitin-Familienmitglied 2 (FERMT2 oder Kindlin-2) das Fortschreiten des Melanoms fördert, indem es MAPK durch Bindung an p-α-Pix und Rac1 aktiviert.

FARP1 fördert die Zellproliferation durch Modulation des MAPK-Signalwegs bei Hautmelanomen

Diese Studie im American Journal of Dermatopathology (2019) legt nahe, dass FARP1 die Entstehung und das Fortschreiten des kutanen Melanoms begünstigen könnte. Daher könnte es ein nützliches therapeutisches Ziel sein.

Zytotoxisches und apoptotisches Potenzial von Phyllodium elegans-Extrakten auf menschliche Krebszelllinien

Dieser Forschungsartikel wurde in Bioengineered (2019) veröffentlicht. Diese Studie untersuchte die zytotoxische und apoptotische Aktivität eines Pflanzenextrakts aus Phyllodium elegans auf menschliche Karzinomzelllinien, darunter A375.

Ressourcen zur A375-Zelllinie: Protokolle, Videos und mehr

Im Folgenden finden Sie einige Online-Ressourcen zu A375-Zellen.

• Transfektion von A375-Zellen: Dieses Video-Tutorial hilft Ihnen dabei, die Transfektion von A375-Zellen Schritt für Schritt zu erlernen.
• Zellkultur: Dieses Video enthält sehr nützliche Informationen zur Kultivierung von Zelllinien.

Die Zellkulturprotokolle für A375-Zellen sind hier aufgeführt.

• A375-Zelllinie: Dieser Link enthält nützliche Informationen zur Kultivierung und Pflege der A375-Zelllinie, einschließlich A375-Medien und der Handhabung von gefrorenen und proliferierenden A375-Kulturen.

Literaturverzeichnis

1. Avram, S., et al., Standardisierung von A375-Humanmelanom-Modellen auf der Chorioallantoismembran von Hühnerembryonen und Balb/c-Nacktmäusen. Oncol Rep, 2017. 38(1): S. 89–99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 zielt auf ZEB1 ab und hemmt die Invasion der hochaggressiven Melanomzelllinie A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: S. 5845–5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C hemmt die Proliferation und Metastasierung von A375-Melanomzellen durch Unterdrückung der PI3K/Akt- und MAPK/ERK-Signalwege. Life sciences, 2018. 206: S. 35–44.
4. Stanly, C., et al., Aus Grapefruit gewonnene Mikro- und Nanovesikel weisen in der menschlichen Melanomzelllinie A375 unterschiedliche Metabolomprofile und krebshemmende Wirkungen auf. Cells, 2020. 9(12): S. 2722.