OP9-Zellen
Charakterisierung der OP9-Zelllinie
Beschreibung | Die OP9-Zelllinie, eine Stromazelllinie, die aus den Calvarien von op/op-Mäusen gewonnen wird, weist eine Mutation auf, die zu einem Mangel an Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor (M-CSF) führt. M-CSF ist ein wichtiges Zytokin, das an der Differenzierung, dem Überleben und der Funktion verschiedener Zelltypen, einschließlich Makrophagen und Osteoklasten, beteiligt ist. OP9-Zellen wurden in der Hämatopoese-Forschung ausgiebig als Feeder-Layer in Co-Kultur-Systemen verwendet, um die Differenzierung und Expansion von hämatopoetischen Stammzellen (HSCs) und embryonalen Stammzellen (ESCs) zu unterstützen. Diese Co-Kultursysteme haben die Untersuchung der hämatopoetischen Differenzierungswege erleichtert und ermöglichen MSCs die Differenzierung in adulte erythroide Zellen, Erythroblasten und rote Blutkörperchen sowie Osteozyten, Chondrozyten, Myozyten, Tenozyten und Adipozyten. Die unterstützende Rolle der OP9-Zellen in diesen Systemen wird auf ihre Fähigkeit zurückgeführt, eine förderliche Mikroumgebung zu schaffen, die reich an Zytokinen und Wachstumsfaktoren ist, die für die Stammzellproliferation und die linienspezifische Differenzierung wichtig sind. Darüber hinaus ist die OP9-Zelllinie für die Untersuchung der Leukozytenreaktion und der Entwicklung von Immunzellen wie natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) von großer Bedeutung, was den Nutzen der OP9-Mauslinie für die immunologische Forschung belegt. Die von OP9-Zellen produzierten sekretorischen Faktoren, darunter Wachstumsfaktoren wie bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 und TGF-β3, spielen eine entscheidende Rolle bei Zellmigrations- und Differenzierungsprozessen. OP9-Zellen weisen ein fibroblastenähnliches Erscheinungsbild auf, das durch eine spindelförmige, flache Morphologie gekennzeichnet ist. Dieses morphologische Merkmal ist typisch für mesenchymale Stromazellen, die für ihre unterstützenden Funktionen in der Mikroumgebung des Knochenmarks bekannt sind. Trotz ihres enormen Potenzials sind OP9-Zellen aufgrund ihrer Nicht-Immortalisierung nur begrenzt einsetzbar, was ihre Verwendung auf kurzfristige und kleinmaßstäbliche Projekte beschränkt und die Notwendigkeit einer sorgfältigen Planung und Berücksichtigung bei der Versuchsplanung unterstreicht. |
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Organismus | Maus |
Gewebe | Knochenmark, Stroma |
Synonyme | OP-9 |
Merkmale
Alter | Embryo |
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Morphologie | Fibroblastenähnlich |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Dokumentation
Zitat | OP9 (Cytion Katalognummer 305174) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Genetischer Aufbau
Kultivierungsmethoden für OP9-Stromazellen
Nährboden | Alpha MEM, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, ohne: Ribonukleoside, w/o: Deoxyribonukleoside, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | 1:2 bis 1:4 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätssicherung der authentischen mesenchymalen Stammzelllinie OP9
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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