A9-Zellen

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Produktnummer: 305166

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Product sheet

Beschreibung	A9-Zellen sind eine fibroblastenähnliche Zelllinie, die aus dem Fettgewebe der Maus gewonnen wird. Sie wurden 1940 von W. R. Earle als Subklon des Elternstamms L929 etabliert. Der Elternstamm wurde aus normalem subkutanem areolären und adipösem Gewebe einer männlichen C3H/An-Maus gewonnen. Ein bemerkenswertes Merkmal dieser Zellen ist, dass sie Adenosin-Phosphoribosyl-Transferase (APRT) und Hypoxanthin-Phosphoribosyl-Transferase (HPRT) exprimieren, die als APRT+ und HPRT+ bezeichnet werden. Diese Zellen haben sich bei der Untersuchung von Viren bewährt, insbesondere des Pseudorabies-Virus (PRV), des vesikulären Stomatitis-Virus (VSV) des Indiana-Stammes und des Herpes-simplex-Virus (HSV). Die Empfindlichkeit der A9-Zellen und ihre Reaktion auf diese Viren haben sie für die Untersuchung der viralen Replikation, der Pathogenese und möglicher antiviraler Behandlungen nützlich gemacht. In der Immunologie werden A9-Zellen in verschiedenen Forschungsbereichen eingesetzt. Sie sind ein wertvolles Modell für die Untersuchung von Immunreaktionen, der Antikörperproduktion, der Herstellung monoklonaler Antikörper und der Hybridomtechnologie. Aufgrund ihrer schnellen Vermehrung (Verdopplungszeit von etwa 24 Stunden) bieten A9-Zellen einen ausreichenden Zellvorrat für Experimente und nachgeschaltete Anwendungen. A9-Zellen haben eine fibroblastenähnliche Morphologie und haften am Kultursubstrat. A9-Zellen, die als tierische Zellen eingestuft werden und zum Hybridom-Zelltyp gehören, entstanden durch die Fusion von B-Lymphozyten aus Mus musculus (Maus) mit Myelomzellen derselben Spezies. Dank dieser einzigartigen Kombination weisen A9-Zellen Eigenschaften sowohl von B-Lymphozyten als auch von Myelomzellen auf. Insgesamt sind A9-Zellen eine gut etablierte fibroblastenähnliche Zelllinie, die zur Untersuchung von Virusinfektionen, insbesondere PRV, VSV und HSV, und in der Immunologie eingesetzt wird.
Organismus	Maus
Gewebe	Subkutanes Bindegewebe, loses Bindegewebe und Fett, normal
Synonyme	A-9, A9 (Hamprecht), A9(Hamprecht), AG 9, GM00346, GM-346, GM346, GM00346B

Alter	100 Tage alt
Geschlecht	Männlich
Morphologie	Fibroblasten-ähnlich
Wachstumseigenschaften	Adhärent

Zitat	A9 (Cytion Katalognummer 305166)
Biosicherheitsstufe	1

Antigenexpression	H-2k
Tumorigene	Ja, an nackten Mäusen.

Nährboden	DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Mittlere Supplemente	Supplemente des Mediums mit 10% FBS
Passage-Lösung	Accutase
Subkultivierung	Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Splitverhältnis	1: 3 bis 1: 4
Medienwechsel	2 bis 3 Mal pro Woche
Einfriermedium	Verwenden Sie als Kryokonservierungsmedium ein komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Handhabung von kryokonservierten Kulturen	Vergewissern Sie sich, dass das Fläschchen bei der Lieferung tiefgefroren ist, da die Zellen auf Trockeneis versandt werden, um während des Transports optimale Temperaturen zu erhalten. Lagern Sie das Kryofläschchen nach Erhalt entweder sofort bei Temperaturen unter -150 °C, um die Unversehrtheit der Zellen zu gewährleisten, oder fahren Sie mit Schritt 3 fort, wenn eine sofortige Kultivierung erforderlich ist. Für eine sofortige Kultivierung tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es in ein 37°C warmes Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel eintauchen und 40-60 Sekunden lang vorsichtig schütteln, bis ein kleiner Eisklumpen zurückbleibt. Führen Sie alle weiteren Schritte unter sterilen Bedingungen in einer Abzugshaube durch und desinfizieren Sie das Kryo-Fläschchen vor dem Öffnen mit 70%igem Ethanol. Das desinfizierte Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension unter vorsichtigem Mischen in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur überführen. Zentrifugieren Sie das Gemisch 3 Minuten lang bei 300 x g, um die Zellen abzutrennen, und verwerfen Sie den Überstand mit dem restlichen Gefriermedium vorsichtig. Das Zellpellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren. Bei adhärenten Zellen die Suspension auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen; bei Suspensionskulturen das gesamte Medium in eine T25-Flasche überführen, um eine effektive Zellinteraktion und ein effektives Wachstum zu fördern. Halten Sie sich an die festgelegten Subkulturprotokolle, um ein kontinuierliches Wachstum und die Aufrechterhaltung der Zelllinie zu gewährleisten und zuverlässige Versuchsergebnisse zu erzielen.

Sterilität	Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

A9-Zellen

Allgemeine Informationen

Merkmale

Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation

Expression / Mutation

Handhabung

Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA