U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler

800,00 €*

Produkterne leveres frosne på tøris i kryorør. Hvert kryorør indeholder typisk 3 × 10 ⁶ celler til adhærente linjer eller 5 × 10⁶ celler til suspensionslinjer (se batch-COA for detaljer).

Priser ekskl. afgifter plus forsendelsesomkostninger

cryovial

Produktnummer: 300664

Sikkerhedsdatablad

Produktblad

Tredjepartsaftale

Beskrivelse	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 er en genomredigeret human osteosarkomcellelinje afledt af U2OS-celler, hvor det endogene SEH1L (SEH1)-gen er blevet modificeret ved hjælp af CRISPR/Cas9-teknologi til at kode for et in-frame SNAPf-tag. SEH1 er en komponent i Y-komplekset (også kendt som NUP107-160-komplekset), et centralt strukturelt modul i det nukleare porekompleks (NPC), der bidrager til porestrukturens samling og stabilitet. Ved at indsætte SNAPf-kodningssekvensen på det endogene locus udtrykkes det mærkede SEH1-protein under naturlig regulering, hvilket bevarer de fysiologiske ekspressionsniveauer og minimerer forstyrrelser i det nukleare porekompleks' sammensætning. SNAPf-tagget er en konstrueret, hurtigt reagerende variant af SNAP-tagget, der kovalent binder benzylguanin-konjugerede substrater, hvilket muliggør selektiv og stabil fluorescerende mærkning i levende eller fiksede celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler lokaliseres fusionsproteinet til kernehinden i et punktformet mønster, der er karakteristisk for NPC-fordelingen. Da mærkningen finder sted på endogene proteinniveauer, er dette system velegnet til kvantitativ fluorescensmikroskopi, superopløsningsbilleddannelse og enkeltpartikelsporingsanalyser med det formål at dissekere NPC-organisering og stoichiometri. Den flade morfologi og de store kerner i U2OS-celler letter yderligere højopløsningsvisualisering af kernehindestrukturer. SEH1 deltager i NPC-biogenese og har også været impliceret i kinetokor-associerede processer under mitose. Derfor udgør denne cellelinje en robust platform for undersøgelse af cellecyklusafhængig NPC-samling og -adskillelse, rumlig organisering af Y-komplekset inden for porestrukturen og SEH1's potentielle dobbeltrolle i kernehinden og mitotiske kinetokorer. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 muliggør mekanistiske studier af kerneporearkitektur og -dynamik under fysiologisk relevante ekspressionsbetingelser.
Organisme	Menneske
Væv	Knogle
Sygdom	Osteosarkom

Alder	15 år
Køn	Kvinde
Etnicitet	Kaukasisk
Morfologi	Epitel-lignende
Vækstegenskaber	Vedhæftende

Citat	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytion katalognummer 300664)
Biosikkerhedsniveau	1
NCBI_TaxID	9606
Indskyder	Ellenberg-laboratoriet (EMBL)
GMO-status	GMO-S1: Denne humane osteosarkomcellelinje (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) indeholder en CRISPR-medieret SNAPf-SEH1-fusion, der muliggør selektiv mærkning af SEH1-nukleoporinet. Modifikationen er stabilt til stede. Denne klassificering gælder kun i Tyskland og kan variere andre steder.

Protein-ekspression	SEH1, SNAPf-tag

Kulturmedium	McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glukose, w: stabil Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Kosttilskud	Suppler mediet med 10 % FBS, 3,0 g/L glukose, stabil glutamin, 2,0 mM natriumpyruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1 % NEAA
Dissociationsreagens	Accutase
Subkulturer	Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Frys medium	Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Optøning og dyrkning af celler	Bekræft, at hætteglasset forbliver dybfrosset ved levering, da cellerne sendes på tøris for at opretholde optimale temperaturer under transport. Ved modtagelsen skal du enten straks opbevare kryohætteglasset ved temperaturer under -150 °C for at sikre, at cellernes integritet bevares, eller gå videre til trin 3, hvis øjeblikkelig dyrkning er påkrævet. Ved øjeblikkelig dyrkning optøs hætteglasset hurtigt ved at nedsænke det i et 37 °C varmt vandbad med rent vand og et antimikrobielt middel og røre forsigtigt i 40-60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Udfør alle efterfølgende trin under sterile forhold i en flowhætte, og desinficer kryovialet med 70 % ethanol, før det åbnes. Åbn forsigtigt det desinficerede hætteglas, og overfør cellesuspensionen til et 15 ml centrifugerør, der indeholder 8 ml kulturmedium ved stuetemperatur, og bland forsigtigt. Centrifuger blandingen ved 300 x g i 3 minutter for at adskille cellerne, og kassér omhyggeligt supernatanten, der indeholder resterende frysemedium. Resuspender forsigtigt cellepelleten i 10 ml frisk dyrkningsmedium. For klæbende celler deles suspensionen mellem to T25-kulturkolber; for suspensionskulturer overføres alt mediet til en T25-kolbe for at fremme effektiv celleinteraktion og -vækst. Overhold etablerede subkulturprotokoller for fortsat vækst og vedligeholdelse af cellelinjen, hvilket sikrer pålidelige eksperimentelle resultater.
Inkubationsatmosfære	37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.
Overfladebehandling af flasker	For at opnå optimal vedhæftning og levedygtighed efter optøning anbefaler vi at bruge kollagenbelagte kolber eller plader.
Fryseprocedure	Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.
Forsendelsesbetingelser	Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.
Opbevaringsforhold	For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Sterilitet	Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder. For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Bemærk venligst, at denne cellelinje ikke er tilgængelig under en standard Cytion MTA, da den kræver en tredjepartsaftale og/eller er genstand for forhandling med den oprindelige licensgiver.

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler

Generel information

Karakteristika

Regulatoriske data

Biomolekylære data

Håndtering

Kvalitetskontrol / Genetisk profil / HLA

Tredjepartsaftale