Neuro-2a cellelinje
Neuro-2a er en musedrevet neural cellelinje, der i vid udstrækning anvendes i neurovidenskabelig forskning. Disse celler anvendes hovedsageligt til at studere neural udvikling, differentiering, neurotoksicitet, cellesignalveje og aksonal vækst. Desuden bruges de til udvikling og screening af lægemidler.
Denne artikel fokuserer på vigtige aspekter af Neuro-2a neuroblastomceller, som kan hjælpe dig, før du begynder at arbejde med dem. Den vil hovedsageligt dække:
- Generelle egenskaber og oprindelse af Neuro-2a-celler
- Information om dyrkning af Neuro-2a-cellelinjen
- Fordele og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningsanvendelser af Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningspublikationer med Neuro-2a-celler
- Ressourcer til Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og meget mere
1. Generelle egenskaber og oprindelse af Neuro-2a-celler
Denne del af artiklen dækker baggrunden for og de grundlæggende egenskaber ved Neuro-2a-cellelinjen, som er vigtige at kende, før man arbejder med den. Her vil du lære: Hvad er Neuro-2a-cellelinjen? Hvad er Neuro-2a-cellelinjens oprindelse? Hvad er Neuro-2a-celledifferentiering? Hvad er størrelsen på en Neuro-2a-celle? Hvad er Neuro-2a-cellernes morfologi?
- Neuro-2a-celler stammer fra en spontan tumor (neuroblastom) fra en albino-mus (stamme A). Cellelinjen blev etableret af R.J. Klebe og F.H. Ruddle.
- Neuro-2a-neuroblastomcellerne udviser neuronal og amoeboid stamcellemorfologi.
- Neuro-2a-cellernes størrelse er 12 mikrometer i højden [1].
- Kromosomantallet i Neuro-2a-celler kan variere fra 59 til 193 med et modalt tal på 95. Karyotypen for disse neuroblastomceller er ustabil inden for et interval på 94 til 98 kromosomer.
2. Information om dyrkning af Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler bruges i vid udstrækning i neurovidenskabelige forskningslaboratorier. Før du arbejder med disse celler, bør du lære de vigtige oplysninger om celledyrkning, der er nævnt nedenfor. Det kan hjælpe dig med at gøre det nemmere. Det vil du vide: Hvad er et Neuro-2a-cellekulturmedium? Hvordan dyrker man Neuro-2a-celler? Hvad er fordoblingstiden for Neuro-2a-celler? Hvad er udsåningstætheden for Neuro-2a? Hvad er protokollen for Neuro-2a-celledyrkning? Hvad er Neuro-2a-cellemediet?
Nøglepunkter for dyrkning af Neuro-2a-celler
|
Fordoblingstid: |
Neuro-2a-cellernes fordoblingstid er ca. 70 timer. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
Neuro-2a er en adhærent cellelinje. |
|
Udsåningstæthed: |
Den optimerede celleudsåningstæthed for Neuro-2a-cellelinjen er 1 x104 celler/cm2. Ved udsåning vaskes cellerne med magnesium- og calciumfri fosfatbuffersaltvand (1x). Senere tilsættes en passageløsning (Accutase), og cellerne inkuberes i 8 til 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Efter celledissociation tilsættes friske medier, og cellerne centrifugeres. Den høstede cellepellet resuspenderes omhyggeligt, og cellerne hældes i en kulturbeholder til vækst. |
|
Vækstmedium: |
EMEM bruges til dyrkning af Neuro-2a-celler. Det indeholder 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM natriumpyruvat og NEAA for ideel cellevækst. Mediet skal udskiftes 1 til 2 gange om ugen. |
|
Vækstbetingelser: |
Neuro-2a-kulturer holdes i en 37 °C befugtet inkubator, der er tilsluttet en 5 % CO2-forsyning. |
|
Opbevaring: |
Cellerne skal opbevares ved en temperatur på under -150 °C i en elektrisk fryser med ultra-lav temperatur eller i dampfasen af flydende nitrogen på lang sigt. |
|
Fryseproces og medie: |
CM-1- eller CM-ACF-medier bruges til at fryse Neuro-2a-celler. Cellerne fryses gennem en langsom fryseproces, der kun tillader et fald på 1 °C pr. minut. Det beskytter cellerne mod chok og bevarer deres levedygtighed. |
|
Optøningsproces: |
For at optø frosne kulturer placeres hætteglasset i et 37 °C vandbad i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes kulturmediet, og cellerne centrifugeres. Dette trin hjælper med at fjerne frysende mediekomponenter. Cellepelleten resuspenderes derefter, og cellerne overføres til en ny kolbe fyldt med dyrkningsmedier. Herefter placeres cellerne i en inkubator ved 37 °C i mindst 24 timer. |
|
Biologisk sikkerhedsniveau: |
Laboratorieindstillinger på biosikkerhedsniveau 1 er obligatoriske for at håndtere og vedligeholde Neuro-2a-kulturer. |
3. Fordele og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har nogle fordele og ulemper, der adskiller dem fra andre neuronale cellelinjer. Nogle bemærkelsesværdige fordele og ulemper ved disse celler er listet her.
Fordele og ulemper
Fordelene ved den murine neuroblastomcellelinje Neuro-2a er:
-
Nem at vedligeholde
Neuro-2a-cellelinjen er ikke forbundet med komplekse eller indviklede celledyrkningsprocedurer. De er nemme at dyrke og vedligeholde i forskningslaboratorier.
-
In vitro neuronal cellemodel
Neuro-2a er en praktisk neuronal cellemodel, der i vid udstrækning anvendes af forskere i neuronudvikling og differentieringsundersøgelser.
Ulemper
Ulemperne ved Neuro-2a-celler er:
-
Oprindelsefra mus
Neuro-2a stammer fra mus, og forskere bør udvise forsigtighed, når de ekstrapolerer resultater fra musebaserede studier til menneskers sundhed og sygdom, da musens og menneskets biologi kan variere betydeligt.
4. Forskningsanvendelser af Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har mange anvendelsesmuligheder inden for neurovidenskabelig forskning. Nogle få lovende anvendelser af denne cellelinje diskuteres her:
- Neural udvikling: Neuro-2a er en in vitro neuronal cellemodel, der i vid udstrækning bruges til at studere neuronal udvikling og relaterede processer som differentiering, aksonal vækst og synapsedannelse. En undersøgelse fra 2020 brugte Neuro-2a-celler til at udforske mikroRNA-124's rolle i retinsyreinduceret neuronal celledifferentiering [2]. Et andet studie undersøgte Neuro 2a retinoic acid receptor gamma (RARG) og miRNA-124-ekspression i neuroblastomcellelinjen (N2A). Denne undersøgelse foreslog, at RARG målrettes af miR-124 og undertrykker neuritudvækst [3].
- Neurotoksicitet: Neuro-2a bruges også til at vurdere de toksiske virkninger af lægemidler, kemikalier eller miljøfaktorer på neurale celler. For eksempel undersøgte Zhihong Yin og medarbejdere i et studie neurotoksiciteten af bisphenol A (BPA), et miljøkemikalie, ved hjælp af Neuro-2a-celler. De observerede, at BPA undertrykker neuronal celledifferentiering og -spredning ved at forstyrre deres cellulære og synaptiske integritet [4].
- Screening af lægemidler: Neuro-2a-celler bruges også til at evaluere den terapeutiske aktivitet af flere lægemidler, forbindelser og naturprodukter. I en undersøgelse blev der f.eks. brugt Neuro-2a-celler til at undersøge det antioxidative potentiale i Gingko biloba-planteekstrakt. Desuden foreslog forskningen, at det forårsager et fald i Aβ-aggregering og kan være en potentiel behandling af Alzheimers sygdom [5].
5. Forskningspublikationer med Neuro-2a-celler
Her er nogle interessante forskningsartikler om Neuro-2a-cellelinjen.
Dette studie i Journal of Natural Medicines, 2018, undersøgte de terapeutiske virkninger af alkamider isoleret fra hvid peber (P. nigrum) på Neuro-2a neuronale celler.
Nkx2. 1-nedregulering er involveret i hjerneabnormalitet fremkaldt af overskydende retinsyre
Denne forskning i Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020 foreslog, at Nkx2.1-genet spiller en vigtig rolle i musehjernens udvikling ved at regulere Shh-signalkaskaden.
Denne artikel blev offentliggjort i Toxicology and Industrial Health (2023) og foreslog, at et miljøkemikalie, bisphenol A, udløser neurotoksicitet i neuro-2a-celler og forstyrrer deres synaptiske og cytoskeletale dysfunktion.
Denne artikel i Pharmaceuticals (2021) foreslog, at et lægemiddel, hexarelin, modulerer PI3K/AKT og MAPK-kaskaden i neuroblastomceller (Neuro-2a) og hæmmer hydrogenperoxid-induceret neuro-2a-celle-apoptose.
Denne forskningsartikel i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) foreslog, at Emblica officinalis-frugtekstrakt undertrykker neuroinflammation i Neuro-2a-celler og dermed kan være gavnlig for neuroinflammatoriske sygdomme.
6. Ressourcer til Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og meget mere
Følgende er de tilgængelige online-ressourcer om Neuro-2a-celler. De omfatter Neuro-2a-cellekultur og transfektionsprotokol.
- Neuro-2a-transfektionsprotokol: Neuro-2a er en egnet transfektionsvært. Dette link vil vejlede dig om cellelinjens transfektionsprotokol. Neuro-2a-transfektionseffektiviteten varierer fra reagens til reagens.
Følgende link indeholder Neuro-2a-celledyrkningsprotokollen.
- Protokol for dyrkning af Neuro-2a-celler: Dette link hjælper dig med at lære protokollen for subkulturering af neuro-2a-celler.
- Neuro-2a-celler: Hjemmesiden indeholder omfattende viden om Neuro-2a-cellemedier, udsåningstæthed og protokoller til subkulturering og håndtering af kryopræserverede og proliferative kulturer.
Referencer
- Lulevich, V., et al, Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., miR-124's rolle i reguleringen af retinsyreinduceret Neuro-2A-celledifferentiering. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., Retinoic acid receptor gamma er målrettet af microRNA-124 og hæmmer neuritudvækst. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisphenol-A-eksponering inducerede neurotoksicitet og var forbundet med synapse og cytoskelet i Neuro-2a-celler. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Gingko biloba-ekstrakt (EGb) hæmmer oxidativ stress i neuro 2A-celler, der overudtrykker APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.