Vero-celler: Banebrydende inden for virusstudier og vaccineinnovation
Vero-cellelinjen, en udødeliggjort pattedyrscellemodel, der stammer fra nyreepitelceller fra den afrikanske grønne abe, står i spidsen for forskning i virologi, mikrobiologi og cellulær og molekylær biologi. Deres udbredte anvendelse spænder over vaccineudvikling, farmaceutiske screeninger og udforskning af virus- og parasitbiologi, tumorimmunologi og immunterapeutiske strategier.
Vero-cellernes oprindelse og vigtigste egenskaber
At dykke ned i en cellelinje som Vero giver anledning til flere spørgsmål: Hvad er Vero-celler helt præcist? Hvordan blev Vero-cellelinjen etableret? Hvad er historien bag navnet "Vero"? Dette segment har til formål at belyse Vero-cellernes oprindelse og primære egenskaber.
Oprindelsen af Vero-cellelinjen går tilbage til 1962 og stammer fra nyreepitelceller fra den afrikanske grønne abe. Denne linje blev dyrket af Y. Kawakita og Yasumura på Chiba University i Japan. Udtrykket "Vero" stammer fra "Verda reno" på esperanto, som kan oversættes til "grøn nyre", selvom "Vero" også giver genlyd af begrebet "sandhed"
Vero-celler danner typisk monolag, men kan tilpasse sig suspensionskulturer med en epitellignende struktur. Disse celler er kendetegnet ved deres afrundede til langstrakte form og en gennemsnitlig diameter på ca. 17 µm. Vero-celler udviser især et hypodiploidt kromosomtal, hvor det modale kromosomtal er 58 i ca. 66 % af cellepopulationen, selvom variationer med højere ploidier findes i en lille del (1,7 %) af cellerne.
Vero-cellekloner og deres unikke egenskaber
Forskellige kloner, der stammer fra Vero-cellelinjen, udviser unikke egenskaber, der adskiller dem fra den oprindelige linje. Blandt disse er to bemærkelsesværdige Vero-cellekloner:
Vero E6-cellelinjen: Denne klon, der også er kendt som Vero C1008, stammer fra Vero 76-celler og blev isoleret i 1979 af P.J. Price ved hjælp af en fortyndingsteknik på mikrotiterplader. Vero E6-celler er særligt velegnede til dyrkning af vira, der replikerer langsomt.
Vero 76-celler: Disse celler stammer fra en nyre fra en afrikansk grøn abe i 1968 og har den epitheliale morfologi, der er karakteristisk for Vero-celler.
Disse varianter af Vero-celler er sammen med moderlinjen fortsat medvirkende til at fremme virologisk forskning og udvikling af medicinske indgreb, hvilket markerer deres betydning i det videnskabelige samfund.
Information om dyrkning
Dyrkning af Vero-celler, en abecellelinje, kræver kendskab til specifikke parametre som fordoblingstid, udsåningstæthed og det rette vækstmedium.
Populationens fordoblingstid: Fordoblingstiden for Vero-celler er omkring 24 timer.
Vedhæftning: Vero-celler klæber til overflader og danner typisk monolag, når de dyrkes.
Udsåningstæthed: Det anbefales at starte med en udsåningstæthed på 1 x 10^4 celler/cm^2. For at dyrke klæbende Vero-celler skal du vaske dem med PBS og behandle dem med Accutase for at løsne dem. Når cellerne er løsnet, centrifugeres de, resuspenderes i frisk medium og overføres til nye dyrkningsflasker.
Vækstmedium: Både Ham's F12 og DMEM er velegnede medier til dyrkning af Vero-celler. De skal suppleres med 2,5 mM L-glutamin og 5 % føtalt bovint serum (FBS) for at understøtte optimal vækst. Mediet skal opdateres to til tre gange om ugen.
Vækstbetingelser: Vero-celler trives ved en temperatur på 37 °C i en fugtig atmosfære med 5 % CO2.
Opbevaring: Ved langtidsopbevaring skal Vero-celler opbevares ved temperaturer under -150 °C, enten i en fryser med ultra-lav temperatur eller i dampfasen af flydende nitrogen.
Fryseproces og medium: Til kryopræservering anvendes CM-1 eller CM-ACF eller vækstmediet med FBS og DMSO som frysemedium. Anvend en langsom nedfrysningsteknik, hvor temperaturen gradvist sænkes med 1 °C pr. minut.
Optøningsproces: Optø Vero-celler ved at nedsænke beholderen i et 37 °C varmt vandbad og røre forsigtigt rundt i den i 40-60 sekunder. Fortynd derefter cellerne i frisk medium, centrifuger for at fjerne kryobeskyttelsesmidlet, resuspender i frisk vækstmedium, og anbring dem i en ny kolbe for at gendanne og vokse.
Biologisk sikkerhedsniveau: Vero-celler skal håndteres i et laboratorium, der opfylder kravene til biosikkerhedsniveau 1.
Anvendelser af Vero-cellelinjen i forskning
Vero-cellelinjen har mange forskningsmæssige anvendelser inden for cellebiologi og virologi. Her har vi diskuteret nogle specifikke.
Vero-celler i virusforskning og vaccineproduktion
Vero-celler, der stammer fra afrikanske grønne abenyreceller, er blevet en vigtig del af bioprocesudviklingen af vacciner mod forskellige vira, herunder poliovirus og japansk encephalitisvirus. Deres tilpasningsevne i både adhærente og suspenderede kulturer og deres brede evne til at understøtte virus, herunder patogener som des petits ruminants-virus, fremhæver deres betydning for virusisolering og vaccineudvikling.
Talrige undersøgelser har brugt Vero-celler til produktion af humane vacciner. For eksempel viste en bemærkelsesværdig undersøgelse, der blev offentliggjort i 2019, brugen af Vero-celler i udviklingen af en inaktiveret vaccine mod gul feber-virus [2].
Vero-celler bruges ofte i undersøgelser af virusinfektioner, som f.eks. en undersøgelse udført i 2020, hvor Vero-celler blev inficeret med forskellige isolater af SARS-CoV-2-virus for at undersøge virussens vækstegenskaber [4]. På samme måde undersøgte et andet studie cellernes reaktion på SARS-CoV-2-infektion ved hjælp af Vero-cellekultur [5].
Vero-cellernes rolle i vævsteknik og upstream bioprocesudvikling
Ud over vaccineproduktion bidrager Vero-celler til vævsteknik og det bredere felt for udvikling af bioprocesser, hvilket understreger behovet for løbende forskning i deres egenskaber og anvendelser. Valget af passende Vero-celleunderlinjer er nøglen til at maksimere deres potentiale i den bioteknologiske og farmaceutiske industri.
Anvendelse af Vero-celler i test af lægemidlers effektivitet og sikkerhed
Vero-celler anvendes ofte i test af lægemidler for at vurdere effektiviteten og sikkerheden af farmaceutiske forbindelser. Disse celler betragtes ofte som en standardmodel for normale nyreceller i studier, der undersøger de cytotoksiske virkninger af forskellige lægemidler og terapeutiske midler. For eksempel viste forskning, der sammenlignede virkningen af Terminalia avicennioides planterodsekstrakter på både HepG2, en leverkræftcellelinje, og Vero-celler, der stammer fra abe-nyreepitel, at ekstrakterne var mere skadelige for kræftcellerne end for de normale celler.
Begrænsninger ved Vero-celler
Selv om Vero-celler er meget udbredte, har de deres begrænsninger, såsom produktion af Vero-toksin og genomiske ændringer, der kan påvirke visse anvendelser. Det er vigtigt at forstå de specifikke sublinjer og genomiske egenskaber ved Vero-celler, herunder Vero-linjen F6, for at kunne optimere brugen af dem i forskellige bioprocesser.
Udforsk vores Vero-celler og -derivater til banebrydende forskningsapplikationer
Forskningspublikationer
Følgende er nogle af de seneste og mest citerede forskningspublikationer med Vero-celler.
Denne undersøgelse, der blev offentliggjort i Vaccine Journal (2019), tilpassede Vero-celler til at vokse i suspensionskulturer for at producere rabiesvirus med høj titer ved hjælp af forskellige serumfrie medier.
Toxoplasma gondiis modtagelighed over for ethanolisk ekstrakt af Tinospora crispa i Vero-celler
Denne artikel blev offentliggjort i tidsskriftet Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine i 2019. Undersøgelsen foreslog, at det ethanoliske ekstrakt af planten Tinospora cris pa har en skadelig virkning på Toxoplasma gondii-parasitten. Det er dog sikkert for værtscellerne (Vero-cellelinjen).
Denne artikel blev udgivet af Journal of the Balkan Union of Oncology i 2021. I denne artikel undersøgte Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez og Gul Ozcan den cytotoksiske virkning af Colchicum baytopiorum bladekstrakt på C-4I og Vero cellelinjer.
Denne undersøgelse i Phytotherapy Research (2021) brugte SARS-CoV-2-inficerede Vero-celler til at undersøge den terapeutiske effekt af resveratrol på virusreplikation.
Lipofile statiner hæmmer produktionen af zikavirus i Vero-celler
Denne artikel i Nature Scientific Reports (2019) foreslår, at lipofile statiner, dvs. cerivastatin, lovastatin, fuvastatin, simvastatin og mevastatin, kan hæmme produktionen af zikavirus i Vero-celler.
Ressourcer til Vero-celler: Protokoller, videoer og meget mere
- Transfektion af Vero-celler: Dette link guider dig gennem en transfektionsprotokol for Vero-celler.
- Transfektion af Vero-cellelinje: Denne video forklarer en transfektionsprotokol for Vero-cellelinjen.
- Subkultur af Vero-celler: Denne video beskriver generelle anbefalinger for subkulturering af adhærente cellelinjer.
Protokoller for celledyrkning
- Dyrkning af Vero-celler: Denne hjemmeside indeholder en velforklaret protokol til dyrkning af Vero-celler.
- Dyrkning af Vero-celler: Dette dokument kan hjælpe dig med at lære protokollen for opformering, vedligeholdelse og nedfrysning af Vero-celler.
Ofte stillede spørgsmål om Vero-celler
Referencer
- Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton og A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): s. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
- Pato, T.P., et al., Oprensning af gul feber-virus produceret i Vero-celler til fremstilling af inaktiveret vaccine. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
- Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferativ effekt af ekstrakter og fraktioner af roden af Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill og Perr. på HepG2- og Vero-cellelinjer. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): s. 1-7.
- Yao, P., et al., Isolering og vækstegenskaber af SARS-CoV-2 i Vero-celler. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
- Park, B.K., et al., Differentiel signalering og virusproduktion i Calu-3-celler og Vero-celler ved SARS-CoV-2-infektion. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.